Способ определения криза отторжения трансплантированного органа

Союз СоветсиикСоциалистическиеРеспублик ОЛ ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ц 935078(22)Заявлено 07 06.78 (21) 2628257/28-13с присоединением заявки рй -Опубликовано 15.06. 82Бюллетень р 1 е 22 ео делан нзееретеннй н еткрытнйДата опубликования описания 15. 06.82(72) Авторы изобретения Г.Т. Закиян и М.А. Давтян Филиал Всесоюзного научно-исследовательского, институтаклинической и экспериментальной хирургми,(5 Й) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КРИЗА ОТТОРЖЕНИЯ ТРАНСПЛАНТИРОВАННОГО ОРГАНА Изобретение относится к медицине, а именно к биохимии.Известен способ определения криза отторжения трансплантированного органа путем исследования аргиназы в крови 13.Однако известный способ не обеспе" чивает раннего определения криза отторжения кожи, так как введение иммунодепрессанта до и после пересадки удлиняет сроки отторжения и, сле 10 довательно, невозможно определить начало реакции отторжения, вызванной аллотрансплантатом.Целью изобретения является раннеет 5 определение криза отторжения кожи.Цель достигается тем, что соглас" но способу определения криза отторжения трансплантированного органа путем исследования активности арги" назы в крови активность аргиназы определяют в сыворотке крови, при этом ее инкубируют в физиологических условиях 1-3 ч в глициновом буФере 2в присутствии -аргинина и хлористого магния, инкубационную смесь центрифугируют, к супернатанту добавляют смесь Фосфорной кислоты, хлористого железа и 34-ного водного раствора диацетилмонооксима, образовавшийся окрашенный раствор колориметрируют.Способ осуществляется следующим образом.Берут 0,1 мл сыворотки крови, инкубируют при 37 оС, в течение двух часов в 0,04 И глициновом буфере в присутствии (.-аргинина и хлористого магния. Реакцию приостанавливают и через 20 мин центрифугируют при 3000 об/мин. Берут 1 мп супернатанта в пробирку со шлифованной пробкой, добавляют 2,5 мп смеси Фосфорной кислоты, хлористого железа и 0,25 мл 3-.ного водного раствора диацетилмонооксима, который с образовавшейся мочевиной дает желтое окращива" ние, по интенсивности чего судятФормула изобретения Составитель Ю. АлмазовТехред Л. Пекарь Корректор В. Синицкая Редактор М. Дылын Заказ 4089/8 Тираж 714 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4 3 93507 о количестве мочевины. Содержимое пробирок хорошо перемешивают и кипятят в водяной бане в течение 45 мин в темноте. После охлаждения колориметрируют при длине волны 478. Активность аргиназы выражается в сМ образовавшейся мочевины на 1 г свежей ткани.П р и м е р 1. Проведено исследование активности аргиназы в гомо о генатах печени после пересадки кожного лоскута у крыс по предложенному способу. Повышение активности 1аргиназы начинается с 6-9 дня, а к моменту отторжения кожного лоскута 1 з активность аргиназы увеличивается в несколько раз.П р и м е р 2. Проведено исследование аргинааной активности в сыворотке крови у кроликов по предложенному способу после перекрестной пересадки кожного лоскута. Повышение активности аргиназы в сыворотке крови на 554, начиная с 6-9 дня. К началу реакции отторжения кожного лоскута (12"15 день) активность фермента повышается на 93, а в дни полного отторжения кожного лоскута (16-20 день) она достигает 129 по сравнению с интактными животными. 30Таким образом, предложенный способ позволяет проводить раннее определение криза отторжения кожи и умень 8 4шает количество сыворотки (до 0,1 мл), необходимой для исследования. Способ определения криза отторжения трансплантированного органа путем исследования активности аргиназы в крови, отличающийся тем, что, с целью раннего определения криза отторжения кожи, активность аргиназы определяют в сыворотке крови, при этом ее инкубируют в физиологических условиях 1-3 ч в глициновом буфере в присутствии-аргинина и хлористого магния, инкубационную смесь центрифугируют, к супернатанту добавляют смесь фосфорной кислоты, хлористого железа и 3-ного водного раствора диацетилмонооксима, образовавшийся окрашенный раствор колориметрируют. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе1. Петрунь М,М., Мигаль Л,Я.и Дранник Г.М, Змни активност аргнази кров при аллотрансплантац нирки 1 застосуванн антилмфоцитарного глобулну як мунодепресанта.- "фзологчний журнал, 1976, т, ХХ 11, " 5, с. 671-674