Способ определения ацетилхолиноподобных веществ в биологических тканях

Сфез Сфаетеких Сфциалиетичаеиих Реепублих(51)М. Кл.А 61 В 10/00 С 01 Н 33/48 Государствеииый комитет СССР по иелам изобретений и открытийДата опубликования описания 300881(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЦЕТИЛХОЛИНОПОДОБНЫХ ВЕЩЕСТВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ТКАНЯХИзобретение относится к медицинским и биологическим исследованиям иможет быть использовано при определении содержания в различных биологических тканях ацетилхолина и его гомологов, а также в клинической диагностической практике, ветеринарии изоотехнике, при определении холинергической активности материала биоп-сии,Наиболее близким к предлагаемомуявляется способ определения ацетилхолиноподобных веществ в биологических тканях, основанный на свойствахэтих веществ вызывать сократительную 5реакцию изолированных мышечных тестпрепаратов, обладающих чувствителсвностью к ацетилхолину и его гомолога И.Регистрируют величину сокращения 20мышечного препарата при воздействии,ацетилхолиноподобных веществ. Одинконец изолированного мышечного тестпрепарата жестко закрепляют, а другой соединяют с подвижной регистрирующей системой.ри таком способерегистрации ответной реакции чувствительность способа составляет величину порядка 10г/мл ацетилхолинового эквивалента, 3 Однако низкая стабильность ответных реакций тест-препарата, обусловленная частыми спонтанными сокращениями его, а также низкая чувствительность данного параметра реакции не позволяют проводить определение ацетилхолиноподобных веществ, в частности, в микронавесках биологических тканей, поскольку для извлечения (экстракции) достаточного для биологического тестирования их количества необходимо переработать до 30 г ткани. Таким образом, способ не имеет высокой точности.Цель изобретения - повышение точности способа, что предопределяет возможность количественного анализа ацетилхолиноподобных веществ в микронавесках биологических тканей.Поставленная цель достигается тем, что ацетилхолиноподобные вещества экстрагируют из биологической ткани физиологическим раствором Рингера рН 3,9-4,1, а мышечный препарат перед определением концентрации веществ в экстракте растягивают до предельного состояния (полного расслабления).Способ осуществляется следующим образом.858783 Формула изобретения Составитель Е. КореневаТехред З.фанта Корректор У. Пономаренко Редактор Н. Кешеля Заказ 7392/10 Тираж 687 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 1 мг биологической ткани помещают, в стеклянный капилляр объемом 0,1 мп, куда вносят 0,05 мл Физиологического раствора Рингера, подкисленного до рН 4 однонормальной соляной кислотой. Капилляр эапаивают в пламени спиртовки и погружают на 10 мин в кипящую воду для экстракции ацетилхолиноподобных веществ. По истечении времени экстракции капилляр с содержащимся в нем экстрактом извлекают из бани и охлаждают до комнатной температуры. Определение концентрации веществ производят обычным образом, т.е. исследуемый экстракт наносят на подготовленный препарат мышцы, а концентрацию -цетилхолиноподобных веществ определяют по характеристикам вызванного сокращения мышцы, сравнивая со стандартной калибровочной кривой, При этом как определение, так и построение калибровочной кривой производят на предельно растянутом препарате мышцы.Использование предлагаемого способа определения ацетилхолиноподобных веществ в биологических тканях существенно улучшает точность и воспроизводимость результатов, что повышает их достоверность, с одновременным увеличением чувствительности способа, которая делает возможным определение ацетилхолиноподобных веществв микроколичествах биологических тканей. Способ определения ацетилхолиноподобных веществ в биологическихтканях путем их экстракции физиологическим раствором и определенияконцентрации по активности сокращения препарата мышцы, о т л и ч а ю -щ и й с я тем, что, с целью повыше ния точщсти способа, экстракцию ведут при рН 3,90-4,10, а препарат мьнацы перед определением концентрациивеществ растягивают до предельногосостояния,20 Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Ивченко Г.М. К методике определения ацетилхолина. Морфологическиеи физиологические основы регуляциии восстановления функций организма.