Способ определения жизнеспособности сердечной мышцы в условиях гипотермии

ОП ИСАНИЕИЗЬБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик 972314Опубликовано 07.11.82. Бюллетень41Дата опубликования описания 17.1.82 ло делам лзобретекий и открытий. сГорьковский медицинский институт им. С. М. Кирова и.7(.Щ 1 сЛа 7 Ьгс 1 Ю 1 л ГГХагчи гд .д Б 11 ЫЛсс 10 Т,(71) Заявитель(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ СЕРДЕЧНОЙ МЫШЦЫ В УСЛОВИЯХ ГИПОТЕРМИИ Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно морфологии,Известен способ определения жизнеспособности сердечной мышцы путем определения ее энергетики 11,Однако известный способ не обеспечивает высокой точности.Цель изобретения - повышение точности способа.Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа определения жизнеспособности сердечной мышцы в условиях гипотермии исследуют срезы сердечной мыщцы, на которых определяют общее содержание митохондрий и митохондрий, содержащих фермент сукцинатдегидрогеназу, и по соотношению митохондрий с положительной активностью фермента к общему содержанию митохондрий определяют жизнеспособность сердечной мышцы. Способ определения жизнеспособности ткани сердца осуществляют следующим образом.У животного под эфирно-кислородным наркозом в 4-5 межреберье слева производят торакотомию и проводят прижизненную биопсию миокарда левого желудочка для гистохимического и электронно-микроскопического анализов. В одном сосуде растворяют 5 мл нитросинего тетразолия (Нитро-СТ фирмы Реанал) в 5 мл 0,1 М фосфатного буфера рН 7,6. В другой сосуд наливают 15 мл дистиллированной воды,в которой растворяют 405 мг сукцината натрия.Содержимое обоих сосудов сливают, прив готовленную среду наносят на криостатныйсрез и выявляют активность сукцинатдегидрогеназы СДГ, которая используется как маркер метаболически эффективных митохондрий, Полученный срез с выявленными митохондриями с положительной активностью фермента с помощью микроскопа МБИ - 6 с увеличением в 400 раз фотографируют пять разных полей (с одного препарата). Площадь одного поля 0,1085 см 2.Производят подсчет гранул (т. е. выяв ленных митохондрий с положительной активностью фермента) в каждом поле. Подсчитывают среднее количество гранул на одно поле, которое в данном случае равно 463,739,497234 3 с Ф(5)ь(уга изобретения ВНИИПИ наказ 80803 тираж 887 Подписное Филиал ППП Патеп, г Ужгород, ул. Проектная, 4 Затм, с помощью элк 3 ро- цой микроскопии (увеличение 20 21 тьш. раз) полсчиьзк) 3 количество всех имекицихся митохолри 3 (532,462,4) на т) же елииц плоцали чиокарла (0,1085 см).Из общего количества (53.),4= 62,4) вычит;ют количество мит(хоцлрцй с положи Г 3033 активостью фсрмегга (463, з: 39,4Н,УЧ 3 о КОСИнес)ВО ХИТОХ(13;РИй С ОТРИгегьгой активностьк фе.рхеГ 1 (68,7).0 соотношению количсава читохоцлр:й с положительной активц(.стьк) фрмец. 33 и Оощсму ко;ичествчитохон,риЙ сЛ 5 т (.;б уроьцс жизнеспособности (кани (ерлца В ч(ГОВИ 51 х эфи)НО-кислоролОГО наркОЗа, ВС.1 И ЧИН и СООТН 01 НЕНИ я В,1 с Н ЫХ ЪСЛОВИяХ кол(б 3,есь г 0,87 ло 0,945.г Огиер. С пособ Осч 1 ест 3,)як)т, езоз,е ЙГВ 51 на миокард ез ус,оези 5 х ГиОТрхии К)с 3(ОБРЕЧ 1 НЫ." РсЗР 5 ДОМ ЦЕРЕ 113 ОГО элктрц еского тока.Ол э(еро-к 3 Горо)13 м наркозоч жи- ОТО( ОХЛЕждс)ОТ,о РЕКтаЛЬЦОЙ тЕМПЕРатуры 24 С (ацалогечо с условиями клини. К 1) . 1 О лостижеци 3 данной т(меретмры В 4-5 чежре(ерье слева производят торакотомк и црово,51 т црижезее 31 к) беосик) миокарда .3 ного желулочка лля гистохимического и э, ектро 31 о-чкроскоп 3(ко Г и ц зл из оп.о Оци( аной м(УГО,икциазо;15 т НОЛ- чсг количства читохоцдрий 3 оложитльнои ы кинос Ьк) рч 3 тс 3 ( . )2,3 5, 1 ) Г р 3 цатсгьОЙ ак е 81 остью ф( рхе 3 с (187, 5) их обцсго оис 7 в 3 (480: 5),О) н ко:ффц(31(1 Га эв ргеГЕЧ(КОГО Г)О(ц(Чсц Я 1 ИО- хард 10,60% 5: 0,775) .Я(потное ВО 31 еЙсГвчо Г Раз Р 1,о 1 и(.- Р)1:13101 О сЛ(КТРИЧЕСКО 0 Гока ( ЦВПРЕЖЕ- цисм 210 В в течение трех скунд. С:разу 3 осрезрЛароводят прикизнеццук) биопсию миокарда левого желудочка и произволят гисгохимичский и электронно-микро(коцчский анализ мышцы сердца.11 олсчитываот количество гистохимичсс к Выявлецых митохондрий с положительной активностью фермента (537,3 - 90,3). Г 3 омоьО электронной микроскопии подсчитывают общее количество имекнсцихся митохолри 1 (586, Гта 68,0). Подсчитываю г количество митохондрий с отриательцой акг 3 зцо 7 ьк фермент 49.2) .Вычисляют соотношение митохондрий с нложительцой активностью Срмта к об:,е 1 количеству митохондрий. Величица ( оотц(ц 3 и 53 после дачи разряда тока ко- ,1(билась от 0,862 ло 0,958, ло(тигая исходныхх ИОГ 10 ( р м ически х величин (,87 0,(45) .1 рн снижении Величины ца,ряжения ло 50 и 180 В уровень жизцесеособностц из;,я,ся целостоверно цо сравнению с и(риолом до дачи разряда и характеризовался колебанием соотношения от 0,572 до 0,711 При повышении напряжения до 260 - 280 В наблюдалось обратное действие. Отмечалось снижение уровня жизнеспособности, соответствовавшее величине колебания соотношения от 0,512 до 0,457.Аа;огичные тенденции выявлены и при ОЗрел лен и и длительности разряда. П ри уменьшении длительности разряда до 2 ис величина коэффициента энергетического обеспечения миокарда (КЭОМ) по сравнении) с периодом ло дачи разряда практически не менялась (0,521 - 0,682). Увеличение длительности разряда ло 4,5 и 6 с,наоборот, приводило к снижению ве.ичины КЭОМ. В.о колебания составили в этом сл уч ае от 0,535 ло 0,48.Таким образом, величина напряжения 220 В и д;1 ительность разряда 3 с яВились оптимальными параметрами воздействия в данных условиях опыта.Сравнивая результаты (до и после воз;ействия тока на миокард в условиях гипотермии) делают вывод, что жизнеспособность ткани серда после кратковременного Воз,1 ействия переменного тока значительно выше, о чем свидетельствует увеличение КЭОМ от 0,609+. 0,0775 ло 0,910 + 0,048 (р ( 0,05), достигающего исходных нормот(рмических величин.Пр(ллагаемый способ позволяет объективно, В когичсстве 33 ом, оценить жизнеспособность ткани сердца цри воздействии на него любого агента (лекарственных преп а ра ов, физических факторов),Изобретение позволит оценить влияние нш,х (и проверить воздействие известных) факторов ца энергетическом уровне, преж,( чем рекомендовать их в клинику, тем самым поможет отбору наиболее эффективных срлств воздействия на организм. Способ оцреле. ,я жизнеспособностисерлечной мышцы в условиях гипотермии,Г)т,гичаюи(ийся тем, что, с целью повышения(чцости способа, исследуют срезы сердечной мышцы, на которых определяют общеесодержание митохондрий и митохондрий, содржащих фермент сукцинатдегидрогеназу, и по соотношению митохондрий с положительной активностью фермента к общему содержанию митохондрий определяютжизнеспособность сердечной мышцы.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Мосс Д. В., Баттерварт П. Д.Энзимология и медицина, М., Медицинач 1978,с. 1022.