Способ определения алкилирующего соединения в органах и тканях животных

ОООк И Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлено 120279 (2) 2727507/28-13с присоединением заявки Йо -(23) ПриоритетОпубликовано 1512.80. Бюллетень Мо 46Дата опубликования описания 15.12.80 5)м(л З 6 01 М 33/12 О 6 01 М 31/08 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛКИЛИРУЮЩЕГО СОЕДИНЕНИЯ В ОРГАНАХ И ТКАНЯХ ЖИВОТНЫХ Изобретение относится к способам газо-хроматографического определения циклофосфамида в органах и тканях при токсикозе животных.Известен способ определения алкилирующего соединения в органахи тканях животных, предусматривающий гомогенизацию пробы и экстрагирование органическим растворителем 1.Однако этот способ не позволяет с достаточной точностью определять алкилирующее соединениеЦель изобретения - повышение точности определенияУказанная цель достигается тем, 15 что после экстрагирования производят концентрирование с последующим растворением остатка в водно-спиртовом растворе, затем добавляют иэотонический раствор хлористого натрик и осу ществляют дополнительное экстрагиро" вание и концентрирование, а остаток растворяют в ацетоне и вводят в колонку газового хроматографа с термоионным детектором, а о количестве 25 алкилирующего соединения судят, сравнивая высоту или площадь пика исследуемой пробы с эталонной.В качестве органического растворителя исполь зуют хлороформ, а основное экстраги ь рование производят в присутствии без- водного сернокислого натрия.Способ осуществляют следующим образом.Органы и ткани животных экстрагируют с хлороформом в присутствии сульфата натрия, Затем экстракт фильт руют в фарфоровую чашку и упаривают досуха, Сухие остатки растворяют в спирто-водном растворе(1:3), переносят в делительную воронку, добавляют изотднический раствор йа 0 и дважды дополнительно экстрагируют хлороформом, Отделяют хлороформ, объединяют и упаривают досуха. Сухие остатки растворяют в ацетоне, переносят в про бирку с притертой пробкой, добавляют 1-2 г безводного сернокислого натрия и конечное определение проводят количественно на газовом хроматографе с термоионным детектором.Условия хроматографирования: хроматограф "Цвет" стермоионным детектором; рабочая шкала электрометра 110-о А, скорость протяжки картограммы самописца 1 см/мин; газ-носитель азот со скоростью 24 мл/мин, водород 16 мл/мин, воздух 400 мл/мин, колонка стеклянная с длиной 600 мм и внутренним диаметром 3 мм, фаза787989 формула изобретения Составитель И.КутуковаРедактор Т.Веселова Техред Н.Ковалева Корректор,О.Билак,Заказ 8343/51 Тираж 1019 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб.,д.4/5филиал ПППфПатент",г.ужгород,ул.Проектная,4 ХЕ(3) на хроматоне (60-80 меш) температура колонки 200-220 аС, испарителя - 250 -260 С. В колонку вводится 3-5 мкл стандартного раствора или раствора анализируемой пробы.Абсолютная чувствительность стан", дартного циклофосфамида составляет 5 нг. Чувствительность определения циклофосфамида в мясеорганах и тканях составляет 8 мкг в пробе (100 г) или 0,08 мг/кг. Процент. извлечения циклофосфамида из мяса, органов и тканей ,составляет 70-90 .Линейность детектирования соблюдается в пределах 5-50 кг, Время удерживания циклофосфамида 2,2 мин.15П р и м е р. Берут 100 г. гомогенизированной пробы (мяса, органы и ткани), добавляют 30 г безводного серно- кислого натрия и экстрагируют 50 мл хлороформа в течение одного часа при 20 комнатной температуре. Затем экстракт фильтруют в Фарфоровую чашку и упаривают досуха под током воздуха, Сухие остатки растворяют 5 мп спирто-водного раствора 13) и переносят в дели- эе тельную воронку. Сюда же добавляют 50 мл изотонического раствора йаС иэкстрагируют дважды по 30 ьщ хлороформа в течение 2-х мии, Отделяют хлороформ, объединяют и упаривают досуха.30 Сухие остатки растворяют 5 мл ацетона переносят в пробирку с притертой пробкой, добавляют 1-2 г безводного сернокислого натрия и разделение .проводят на хроматографе"Цвет"с тер. .моионным детектором. . М Количественное определение проводят методом сравнения высоты или площади пика исследуемого вещества в пробе и известного количества стан дарта.Расчет ведут по формуле Д 5 А н, чХ= или Х=5 чч вчч4 где Х - количество препарата в мг/кгА - количество препарата в стандартном растворе, введенном в хроматограф, в нг;- площадь (Н - высота)пикастандартного раствора препарата, введенного в хроматограф, мм(мм);3 " площадь (Н - высота)пикапрепарата в пробе, ммф (ммЧ - объем экстракта, введенногов хроматограф, в мкл,Ч - общий объем экстракта послеупаривания, в мл,Ч - количество анализируемойпробы, г.Предлагаемый способ позволяет повысить точность определения циклофос- фамида и может найти широкое применение для контроля препарата в продуктах животноводства в исследовательских лабораториях ветеринарной и медицинской службы страны. 1. Способ определения алкилирующего соединения, преимущественно циклофосфамида, в органах и тканях живот ных, предусматривающий гомогенизацню пробы и экстрагирование органическим растворителем, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения . точности определения, после экстрагирования производят концентрирование с последующим растворением остатка в водно-спиртовом растворе, затем добавляют изотонический раствор хлористого натрия и осуществляет дополнительное экстрагирование,а остаток растворяют в ацетоне и вводят в колонку газового хроматографа с термоионным детектором, а о количестве алкилирующего соединения судят, сравнивая высоту или площадь пика исследуемой пробы с эталонной.2. Способ по п. 1, о т л и ч аю щ и й с я тем, что в качестве органического растворителя используют хлороформ, а основное экстрагирование производят в присутствии безводного сернокислого натрия.Источники инФормации,принятые во внимание при экспертизе1. ОЬгесЬ ей ай, БйасЬ. Г КгеЬьГогасЬ, бб, 151, 1964