Способ диагностики беременности ранних сроков

ОП И.ИЗОБРЕТЕН ИЯ Союз Советски кСоциалистически кРеспублик ц 701636 К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕРЬСТВУ(5)М. Кд,А 61 В 10/00 оеоударотеаииый комитет СССР ае делам иаобретеиий и открытий(72) Авторы изобретения А. В. Мальцев л Н, П. Волкова Первый Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени медицинский институт нм. И. М. Сеченова(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ БЕРЕМЕННОСТИ РАННИХ СРОКОВ Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и касается ди-агностики беременности ранних сроков,Известен способ диагностики беременностиранних сроков путем проведения иммунохимической реакции специфической антисыворотки(к ткани плвценты) с исследуемой пробой крови 11.Однако известный способ недостаточно специфичен, так как ткань плаценты формируетсяв организме беременной женщины в более поздние сроки.Целью изобретения является повышение специфичности диагностики.Поставленная цель достигается тем, что вкачестве специфической антисыворотки используют антисыворотку к специфическим белкамдецидуальной ткани.Антисыворотку к специфическим белкамдецидуальной ткани получают следующим образом,Децидуальную ткань получают при медицин.ском прерывании беременности сроком от 6до 12 недель у женщин, предварительно не подвергавшихся гормонотерапни. Чистоту децидуальной ткани контролируют гистологически.С момента выделения материала до обработки,, ткань хранят на холоду не более 45 мин, Вседальнейшие операции, связанные с выделением 5обелка, проводят при температуре 4 - 6 С. Тканьтщательно очищают от сгустков крови, пять разпромывают десятикратным объемом физраствора, подсушивают на фнльтровальной бумаге,взвешивают и измельчают. Гомогенизацию из.мельченного материала проводят гомогенизатором стекло - тефлон в соотношении 1 ч. ткани к4 ч 0,001 М трис.НС буфера (рН 7,4), содержа.щим 0,001 М ЭДТА и 0,25 М сахарозы. Гомоге- / 15нат центрифугируют при 5000 д 15 мин дляудаления клеточных мембран и ядерного материала. Осадок отбрасывают, а супернатант90 мин центрифугируют при 105000 д для уда.пения рибосомального материала. Количествобелка в пострибосомальном цитозоле определяют методом Лоури (4), Электрофоретнческоеразделение растворимых белков децилуальнойткани человека проводят по методу Маурсра(5) в 7,5 о-ном полиакриламидном геле рН 8,9ф )ф 1) ф уФФФЮ/Фу ,:мУ фЩорлфггУ г:701636 Составитель С. МалютинаРедактор Л. Волкова Техред ЭЯужик Корректор М, Вигула Заказ 7478/6 Тираж 672 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4 3с трис-глициновымэлектродным буфером рН 8,3. На каждую трубку с разделяющим гелем 0,5 х 8 см наносят по 200 мкг белка. Электрофоретическое разделение проводят при токе 5 мА на трубку в течение 70 мин при температуре 4 С. Белки окрашивают 1% ами. дошварцем и отмывают от избытка краски 7%-ной уксусной кислотой. Распределение белковых фракций в геле схематически переносят на миллиметровую бумагу и рассчитывают относительную подвижность к фронту бромфенолово. го красителя. Молекулярные веса определяют по методу Шапиро в 7,5%-нрм геле, содержащем 0,1% додецилсульфат йа, Калибровку гелей для определения молекулярных весов проводят в ди апазоне от 147000 до 16000. Количественную оценку содержания белка по фракциям электрофореграмм проводят денситометрированием полиакриламидных гелей на спектрофотометре при 610 ммк. Абсолютные количества белка при ден ситометрировании выражают условно - весовым методом.Электрофоретический спектр растворимых белков децидуальной ткани состоит из 13 фракций, в состав которых входит специфическая фракция белка а молекулярным весом 52000,П р и м е р. ДЬг выявления беременности у обследуемой женщины берут 1-2 мл крови и получают сыворотку. В центральную лунку агарового блока помещают 0;20 - 0,25 мл антисыворотки к специфическим белкам децидуальной ткани. Для контроля в одну из окружающих лунок помещают 0,2 мл фосфатного буфера 4рН 6,4, В другие лунки помещают пробы сыво. ротки крови обследуемых женщин.Положительная реакция преципитации сви. детельствуег р присутсвии в крови соответству. ющих антигенов и, следовательно, о наличии беременности.Было обследовано 30 женщин. Положительная реакция выявлена у 24 женщин, у которых в процессе наблюдения подтверждена беременность. У 6 женщин результаты были отрицатель. ные, отсутствие у них беременности было установлено при последующих обследованиях.Предлагаемый способ является строго специ. фичным, так как децидуальная ткань формируется в организме беременной женщины раньше, чем ткань плаценты, поэтому значительно повышается достоверность и точность диагноза бере. менности в более ранние сроки. Формула изобретения Способ диагностики беременности раннихсроков путем проведения иммунохимическойреакции специфической антисыворотки с исследуемой пробой крови, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью повышения специфичностидиагностики, в качестве специфической антисыворотки используют антисыворотку к специфическим белкам децидуальной ткани.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Журнал "Лабораторное дело", 1978, Мф 5,с, 298-300 (прототип),