Способ дифференциации бруцелл

1 ц 1664994 П,И(Втеки,.Н И Е Союз Советских Социалистических Республик) Приоритет оллетень Ме 2 СССР ло делам изобретений(53) УДК 576,8.093.31(088.8 Опубликовано 30.05,79. Б ткрытнй Дата опубликования описания 30.05.7 Авторыизобретения М, Ременцова и Т. шин(71) Заявите Научно-исследовательский институт эпидемиологи микробиологии и инфекционных болезней) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ БРУЦЕЛЛ ПУТЕМ ПОСЕВА КУЛЬТУРЫ БРУЦЕЛЛАгар Дифко Глицерин Аминопептиди определяют Вгцсе 11 ачию кольца на глубине в пробирках расане, остужают до Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в медицине и ветеринарии для диагностики бруцелл.Известен способ дифференциации бруцелл путем посева культуры бруцелл на 5 питательные среды с последующим инкубированием посевов и определением видовой принадлежности бруцелл.Одкако известный способ является трудоемким, громоздким инеобеспечивает быст роты дифференциации Вгцсе 11 а плеНепз 1 з от других видов бруцелл.Цель изобретения - упрощение и ускорение дифференциации Вгцсе 11 а тпеИ 1 епз 1 з от других видов бруцелл. 15Эта цель достигается тем, что культуру бруцелл засевают на питательную среду, содержащую, г/л мясо-пептонного бульона:Глутаминовая кислота 3,7 - 6,2Двузамещенный фосфорно-кислый 20калий 0,5 - 0,75Лимонная кислота 1,25 - 3,7Сернокислый магний 0,5 - 0,75Железоаммониевьлйцитрат 0,05 - 0,075 251,25 - 3,723,6 - 39,4101,5 - 152,2плеИепз 1 з по нали 1 - 2 мм от поверх ности среды через 20 - 24 ч инкубирования и второго кольца на глубине 20 - 25 мм на 14 сутки инкубирования.Для осуществления способа готовят дифференциально-диагностическую среду. В 1 л подогретого мясо-пептонного бульона последовательно растворяют 5,0 г глутаминовой кислоты, 0,62 г двузамещенного фосфорно-кислого калия, 2,5 г лимонной кислоты, 0,62 г сернокислого магния, 0,062 г железоаммониевого цитрата, 31,5 г глицерина. Раствор регулируют с помощью 1 н. ХаОН до рН 7 0 - 7 2, после этого добавляют 2,5 г агара Дифко, смесь доводят до кипения до полного растворения агара, Готовую среду разливают по 4,0 мл в стерильные пробирки, которые закрывают ватно-марлевыми пробками, и стерилизуют при О,б атм 30 мин, Правильно приготовленная среда должна быть гомогенной и прозрачной.Идентификацию Вгцсе 11 а плеИепз 1 з проводят следующим образом.Исследуемая культура должна быть в 5- или К-форзле. Смешанная популяция не допускается, Это условие обязательно при выполнении всех известных способов дифференциации.Перед посевом средуплавляют на водяной б664994 Составитель С. Малютина Техред А. Камышникова Корректор Р. Беркович Редактор М. Дк 1 итриева Заказ 1142/11 Изд, Мо Збб Тираж 548 Подписное НПО : Поиск Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, 7 К, Раушская набд. 4/5Типография, пр, Сапунова, 2 50 С и содержат при этой температуре в процессе работы. В стерильных условиях в каждую пробирку добавляют О,5 мл аминопептида и 0,5 мл 3-миллиардной взвеси двухсуточной культуры бруцелл в 1 мл физиологического раствора по стандарту мугности для бруцелл. Содержимое пробирки тщательно перемешивают. Для искл,очения случайных погрсшностей каждую исследуемую культуру засевают нс мспес чем па 3 пробирки ср "ды. Для посева наряду с эталонными штаммами (Вг. гпеИепяз 16 М, Вг, аЬог 1 пз 544, Вг, зшз 1330, Вг. пео 1 огпае 62/2 Вг. сашз 1066, Вг. оу 1 з 63/290) используют культуры бруцелл, выделенные от людей и от животных, После посева пробирки оставляют при комнатной температуре до застывания агара, затем запаивают пробками, смоченными расплавленным парафипом. Посевы инкубируют при 37 С.Учет результатов проводят через 20 - 24 ч и ежедневно в течение 14 суток.Через 20 - 24 ч Вгпсе 11 а гпеИепяз всех биотипов образуют ростовое кольцо толщиной 2 - 3 мм, расположенное на глубине среды в 1 - 2 мм от поверхности. В отличие от Вг, гпеИепз 1 з бруцеллы других видов через 20 - 24 ч растут в непосредственной близости к поверхности, прорастая в глубину среды на 1 - 2 мм, ростового кольца на глубине не образуют. Через 1,5 - 2 суток различия в характере роста бруцелл сглаживаются и вновь окончательно формируются к 14 суткам, Это выражается в том, что только Вг. гпеШепз 1 з прорастают на глубину 20 - 25 мм, постепенно формируя второй ростовой слой - кольцо осаждения в глубине среды, в то время как другие испытуемые виды бруцелл прорастак)т на глубину, значительно меньшую (5 - -7 мм) и пе формируют второго ростового слоя - кольца осаждения,Все испытуемые штаммы бруцелл парал лельно дифференцируют стандартными методами. Результаты идентификации Вг. п 1 еИспяз прсдлагасмым способом и стандартными методами совпали в 100% случаев.Предлагаемый способ идентификации 10 бр целл обеспечиваст зиачитсльпос упрощспис и ускорение исследований. Доступен любой практической лаборатории. Формул а из обр етени я 15 Способ дифференциации бруцелл путемпосева культуры бруцелл на питательные среды с последующим инкубированием посевов и определением видовой принадлежности бруцелл, отл и чающий с я тем, 20 что, с целью упрощения и ускорения дифференциации Вгпсеа гпеИепяз от других видов бруцелл, культуру бруцелл зассвают на питательную сред, содержащую, г/л, мясопептонного бульона:25 Глутаминовая кислота 3,7 - 6,2Двузамещенный фосфорно-кислыйкалий О,5 - 0,75Лимонная кислота 1,25 - 3,7 Сернокислый магний 0,5 - 0,75 30 Железоаммониевыйцитрат 0,05 - 0,075Агар Дифко, 1,25 - 3,7 Глицерин 23,6 - 39,4 Аминопептид 101,5 - 152,2 35 и определяют Вгпсе 1 а гпе 111 епз 1 з по наличию кольца на глубине 1 - 2 мм от поверхности среды через 20 - 24 ч инкубирования и второго кольца на глубине 20 - 25 мм на 14 сутки инкубирования.