Способ отделения -форм бактерий

(5) М, Кл С 1" К 1/04 Опубликовано 25,01,79, Бюллетень 3 Дата опубликования описания 25,01,79(53) УДК 576,8.093.1 (088,8) С, В. Прозоровский, И. А. Дианова. Клокова, И, С Тартаковский н О. В. Полковникова Научно.исследовательский ордена Трудового Красного Знамщс,институт эпидемиологии и микробиологии им. почетного академика Й, Ф, Гамалеи(71) Заявитель Изобретение относится к области медицинской микробиологии,Известен способ определения 1 форм бактерийпутем посева исследуемого материала на диагнос.тические питательные среды с последующим учетом в ыро сших колоний (1 ) . 5Однако извесгный способ не обеспечиваетвысокой чувствительности и быстроты определения,Цель изобретения - повышение чувствительности и ускорения способа, 1 ОЭто достигается тем, что исследуемый материал предварительно подвергают изопикническо.му центрифугированию в градиенте плотностиизотоничного вещества, и посев осуществляют насреды, не содержащие -трансформирующего 35агента.Кроме того, в качестве изотоничного вещества используют фиколл, урографнн.П р и и е р, Выделение 1. - форм из смываротовой полости здоровых людей, 2 ОВ предварительных опытах было показано,что 1.-формы гетерогеины по плотности и образуют в градиенте плотности фиколла два снов,2имеющие плавучую плотность 1,04 Щ 01 гсм и 1,10+0,01 г/см, причем во втором слое присутствует более 90% жизнеспособных клеток 1:форм. Плавучая плотносгь бактерианьных клеток в градиенте плотности фиколла равняется 1,15+0,01 г/смз, При ультрацентрифугнрованин смеси бактерий и- форм происходит распределение клеток на фракции, имеющие соответ. ствующие плотности.Фиколл 400 растворяют в дистиллированной воде и автоклавируют ьри 110 С 10- 15 минут. Линейные градиенты плотности готовят, исходя из 50%(г/г) раствора фиколла в специальном смесителе при комнатной температуре, Иа градиент с плотностями от 1,01 до 1,21 г/смф, объемом 4 мл наслаивают 1 мл исследуемого ма.териала и центрифугируют на центрифуге ВесКпап 1.- 65 в роторе БВ 50 при 4 С в течение 5 час при 40000 оборотов в минуту, После центрифугирования фракции (по 0,5 мл) отбирают при комнатной температуре различными способами: верхние фракции, содержапве 1. - формы, с 5-ой по 10.ую отсасывают пипеткой сверху, нижние фракции, содержащие бактериалыые клетки, с( осад)ьте)1 ь С, )ал)от)5 иаГгехред З.цужк Корректор И, Тупица Редактор И, Разумоаа гараж а 27 Подписное ЦИИИИИ 1 ос)даре) венного коиитета ССС.Р по депага пзоДретенив и о-кратт)155 153035, Москва, Ж, Раушскаа наб., д. 4/5. Фип)аги ИИИ "Патент", г. Уан прод, уп. Ироектнаа, 4 с)и цо 4 що тцз ц)те, Црок 1 Л 5 чан)я Лцз1 ецт 1)иф жцОЙ 1)001 рки, ,зт 5)о)озць 1 С фр:И 5)цВносят В фцзиоцо, ич ск)1 Й рзств 00 5 ВьсеваОт цад 1 агцостицсссу",о 1215 тзтельцу 1) соеду без )Тец)51 цл.лица. П 1)и Высевс фракОН, ГЦЛОтцось КО Горыхсоответстве Г цлавучсй ц)Отнес т 1 -фор;.5 1 5. Зяи 7 ЗЯ), наблгодзгот Вост тиниИых колсц 1 цй цеста.бицьцых 5,. - фо)м. При Высевс ци)юцх фракций, с. Ой цо 4-у 1 о на чзгцках вырзстзьзт б)дстсриал)ь.цье котОции. 53 конты 1 ых с)цытзх цсследус 10Мьгй матсризА Выссва 10 т цз средь 1 с цсци 1 РЦ)Л)ц)оьи без БОГО. Иа чацках Осз 31 Тии 50 ти 1 са Обцльцыйбактериальцый рост цс дозволяет обна)уж 5 т1 СО,ОЦИ 1 3 - фоМ,Д 1 рдчз),См)ьй мог)ц т)ьчела,чс 1 ор 1:; рградиенте гв)отцостц цозцоляст быс:ро достигнутьлучццего О депеццяГ)Орм от бактет)5 Й ц 5,.10)1;стбьгг., Ирць)гцсц длс Вь)5)еец 15 ч3;рь 1 цз ната;ь,1Венных цсгэтцикОВ цри лие)зОстикс здбо)1 свдций, в зксцерцме 1 гтацьцых исследованЦх, .В тех 20сц"1 зях, когда аяал)Гитье мстолы не ЦозволяО Об)царухить 1 фОрмы и). Зз црцсутстиия ц низкОмт".Гре 5; )З 5 ст: Онаганой цоун 1 Ц 15 Формула изоб)ретеция1. СНОСОб оц 1)елелсццт 5 1 - Ао)ь 5 бастсий цутем лосева исследуемо 0 матеоиала ця 1 и цОсти"ЧЕСКИЕ )Ц 1 ТДТЕ 1 Ы 1 ЫЕ СЗЕДЫ С ЛОС 5 Е 5 УГЦДИЬ 5 УЧЕТОМцы)Огццих колоний, 0 т л и ч а к) )д и Й с я тем,чО, с целью Г)ОВ)ццеци)1 1 увствигелыОсгц и уссо.рсцц) Сцособз, исследуемь 5 Й материал цредварительцо цо 5 ВС)г 1 От цзоццкцическоыу 5 ецт Ои 1)уги 1)оваци)О в г)адиецте )ц 022 Ос)и изото 05 чОГО Всцества, и цосев Осугцествл)цот цз среды, це сддер