Способ разделения гликозаминогликанов

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯ .К ЛВТ Союз Советских Социалистических Республик(43) Опубликовано 250478 32161/28-1 М. Кл,601 Н 3 Гааидаратввнныи иомитвСаввтв Миниотров СССР.ао двлвм иэобрвтвнийи атнрытий 3) УДК 616-008.8(45) Дата опубликования описания 0304,78 72) вторы изобретения Ю,А,Юр(71) Заявит Научно-исследовательский институт педиатрии АМН ССС 54) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ ГЛИКОЗАМИНОГЛИКА из- оия к клиничеметодов исоединений,ических цел оситаетских обретение от иохимии и ка ия биологичеемых для ди 1 О т в ыйв ь 30 кой б с я следован с с испольэу агност ейв клинике.При самых различных заболеванияхпоражается система соединительной ткани, широко распространенная в организме человека и животных, сложная в морфологическом и метаболическом отношении, Структурные компоненты соединительной ткани, волокна и клетки погружены в так называемое основное вещество соединительной ткани,Основное вещество соединительнойкани является межклеточной средой,которой протекает экстрацеллюлярнобмен между кровью и тканями и онопервую очередь поражается при действии различных патологических агентовна организм,Одна из главных функций основноговещества, обеспечивающая создание благоприятных условий для специфическойдеятельности паренхиматозных клетокорганов и тканей, зависит от гликозаминогликанов (мукополисахариды), входящих в состав основного вещества.Гликоэаминогликаны - высокомолекулярные углеводные соединения, среди котоРых в настоящее время наиболеевестны гиалуроновая кислота, хондртин-сульфат, хондроитйн-сульфат,хондроитин, дерматансульфат, кератансульфат, гепарин, гепаринсульфат. Соотношение между отдельными гликоэаминогликанами в различных тканях изме-.няется в процесса роста, развития истарения организма, а также при различных заболеваниях. Представление осостоянии обмена гликозаминогликановможно получить изучая содержание исоотношение их компонентов в биологических жидкостях Организма.,Известен способ разделения гликозаминогликанов путем злектрофореза вагарозном геле.Однако этот способ трудоемок, требует применения специальной аппаратуры и дорогостоящих реакторов, что затрудняет его применение в клинике.Целью изобретения является упрощение способа для широкого использованияего в практической клинике.Это достигается тем, что .испол зут гель, составленный из агарозы иакриламида, взятых в соотношени 2:1,и пиридин-муравьиный буфер (рН 3,0),а фореграьмы фиксируют в водном растворе бромистого цетилтриметиламмония,б 03903 Формула изобретения Составитель Н.МакароваТехред Н, Бабурка Корректор М. Демчик Редактор А. Бер Заказ 20 б 1/36 Тираж 1112 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП Патент, г. Ужгород, Ул. Проектная 4 Способ осуществляют следующим образом,Вначале готовят гель, Для этогоб 00 мл агароэы заливают 60 мл пиридинмуравьиного буфера (рН 3,0) и выдер 1 кивают в кипящей водяной бане 7-10 миндо получения прозрачного раствора,затем добавляют 300 мг акриламида,тщательно размешивают и охлаждают до40-45 С, Теплым гелевым раствором эаоливают расположенные в прибОре для10электрофореза стеклянные пластины, вкоторых делают стартовые щели длявведения смеси гликозаминогликанов.КаМеры прибора для электрофореза заливают пиридин-муравьиным буфером. Электрофореэ проводят в течение 2,5 часпри напряжении 17-20 В/см, в силе то,ка 50-70 мА.После окончания электрофореза фотограммы Фиксируют в О, 1-ном водном 20растворе цетавлона в течение 1 час прикомнатной температуре. Затем гель накаждой пластине закрывают фильтровальной,бумагой и оставляют сохнуть при37 фС. Высохшие фореграммы имеют вид 25тонкой пленки и легко красятся 0,04 ным раствором толуидинового синего,приготовленного на 80 ацетона в течение 3-5 мин, Излишки краски отьываютдважды 3-ной уксусной кислотой и несколько раз дистиллированной водой.Сушат окрашенные фореграммы при комнатной температуре.В результате испытания данного способа получено четкое разделение смесистандартов, состоящей иэ гиалуроновой кислоты, гепарина хондроитинсульфата и дерматансульфата. При электрофорезе гликозаминогликанов мочи дете.1 получены четкие фракции гиалуроновой кислоты и хондроитинсульфатов - основных гликозаминогликанов мочи,Установлены существенные изменения в соотношении этих фракций гликозаминогликанов у детей, больных ревматоидным артритом (по сравнению с таковыми у здоровых детей) .Предложенный способ разделения гликозаминогликанов пригоден для изучения этих соединений в биологических жидкостях и тканях организма, он более прост в исполнении, менее трудоемок и может быть применен в клинике для качественного и количественного анали. за гликоэаминогликанов в норме и при патологиях. 1. Способ разделения гликозаминогликанов путем электрофореза в геле, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с цельюупрощения способа, используют гель,составленный из агароэы и акриламида,взятых в соотношении 2:1, в пиридинмуравьином буфере, а фореграммы фиксируют в,водном растворе бромистого цетилтриметиламмония.2. Способ по п.1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что электрофоретическоеразделение ведут в течение 2-2,5 часпри напряжении 17-20 В/см, силе тока50-70 мА,