Способ получения моеномицина

П КСАН ИЕ ЗОЬРЕТЕН ИЯ Своа ЕоаетеСфаманметммавзаРеса убае 1)603347(61) Дополнительный к патен 1) 2153965/ 2) 23.07.74 М. Кл,вС 12 Р 9/1 Гвауаарстввнай квмвтвтВвввтв Меввтрвв ССРав лвам иавбрвтеааа втврвпвй(088,8) 72) Авторы изобретения Рацек (ЧССР, ФРГ) ИностранцыДитрих (ФРГ), МироспавСукач иГеорг Неземанн Юр Иностранная фирмаХехст АГ") СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОЕНОМИЦИН ращивание неионоген 1000 - 150020 где й - щий 8 - 18 содержать а в=18 - .3 22) Заявлено 14,07,75( (23) Приоритет ((45) Дата опубликованы 1Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получений антибиотика моеномицина,Известен способ получения моеномицина путем микробиологической ферментации моеномицинообразующих стрептомицетов и в качестЬве дополнительного углеводородного источникаиспользуют жирыИзвестен также способ получения моеномнцина путем выращивания продуцента Ягер 1 оптусез 8 Ьапаепзз АТСС 14,672; Ягер 1 огпусез вагпвегрепзз АТСС 13.879 или Мгер 1 огпу осез едегепз 1 з АТСС 15.304 или Ягер 1 отусезеуз 1 гепз 1 з АТСС 15.303 на питательной среде, содержащей источники углерода, азота иминеральные соли с последующим выделениемцелевого продукта 2.Целью изобретения является повышение выхода препарата.Эта цель достигается тем, что выосуществляют в присутствии жира иного тензида с молекулярным весомобшей формулы, - 0 - (СН - СН - 0) пН,глеводородный радикал, содержаатомов углерода и который можетакже одну гидроксильную группу,2 Ь Предпочтительными углеводородными радикалами для выращивания моеномицина являются октил, попил, децил, ундецил, додецил, тридецил, тетрадецир, пентадецил, деценил, ундеценил, додеценил, тридеценил, тетрадеценил,пентадеценил, гексадеценил, гептадеценил и октадеценнл, а также оксиоктил, оксинонил, оксидецил, оксиундецил, оксидодецил, окситрндецил, окситетрадецил, оксипентадецил, оксигептадецил, а также оксиоктадецил, Оксигруппа у всех вышеназванных остатков может стоять у первого, второго, третьего нт, д. допред.последнего С-атома; С- Су у октила, С- Св уноиила, С- С у децила, С- Со у ундецила, С- Су додецила, С- Сг у тридецила, С - С, у тетрадецила, С - С, у пентадецила, С, - С у гексадецила, С - Св у гептадецила, С - С у октадецила,По отношению к положению гндпоксильнойгруппы в молекуле предпсчтнтельны такие соединения, которые на практике являются самыми легко доступными, как например, 12-окси-Л,10-октадеценовая кислота или 12-окси-Л,7-октадеценовая кислота илн 12-окги-Л--9,10-тетрадеценовая кислота нли 12-окси-Ь -5,6-тетрадеценовая кислота.Среди тензидов предпочтительными являются такие, молекулярный вес которых 1000 -500, точка помутнения (г вещества33473 60в 10 мл 100%-ного раствора поваренной соли) 73 - 79, гидроксильное число 39 - 78и значение липофильиогидрофильного баланса 16 - 18.П рюпочтительиыми тензидами являются такие, у. которых п=25 и й является смесью,состоящей из 6 - 9% октила, 5 - 7% делила,48 - 54 о доцедила; 18 - 20% тетраделила, 7 - 9% гексаделчла и 8 - 10% октадецила,или и = 18, 20, 22 и Р обозначает додецил,Ферменталию стрептомицетов проводят ваэробных условиях в водной среде, котораявместе с неорганическими солями в качествеуглеводородного источника содержит крахмал,глюкозу, тростниковый сахар или мелазу идополнительно животный, растительный илисинтетический жир, а также в качестве источ.ника азота раздробленнуо сою или соевуюмуку, экстракт дрожжей, муку из семян хлоп.чатника или его ростков, нитраты или солиаммония, а тк.ке тензид.Ферменталию проводят до достижения максимальной антибиотической активности, Ее определяют измерением концентрации растворен.ного азота в ферментативной среде или определением веса образовавшейся сухой массы.После достижения максимальной антнбиотнческой активности ферменталию прерывают,Для выделения антибиотика всю культуру гомогеиизируют и после этого экстрагируют, илиотделяют мнлелнй от раствора лентрнфугированием и обе эти составные части экстрагируют.В качестве экстрагирующих средств используют растворители, которые частично или хорошо смешиваются с водой: метанол, этанол,бутанол, этнленгликоль, монометиловый эфир,ацетон или дноксан,Из полученного экстракта выделяют антибиотик путем испарения растворителя при пониженном давлении. Остаток для дальнейшейочистки экстрагнруют горячим полярным орга ническим растворителем, например метанолом,и антибиотик выпадает из экстракта, сконцентрированного при пониженном давлении, путем осаждения умеренно полярным органическим растворителем, как этиловый эфир, диизопроннловый эфир или зтилацетат.В качестве моеномицинообразующих стрептомилетов применяют Ягер 1 опусез д 1 апаепззАТСС 14.672, Ягер 1 опусез вапвегрепз 1 зАТСС 13.879, Ягер 1 огпусез едегепззАТСС 15.304 и Ягер 1 опусез гаузг 1 епзз, АТСС5.303, атакже их мутанты и ревертанты.В качестве животных жиров используютжиры животного происхождения, как свинойсмальл или бараний жир, или полученные ис-,кусственным путем фракции этих жиров с определенным содержанием углерода. В качестверастительных жиров используют жирные масла, например оливковое, подсолнечное, бобовоекокосовое и рацннусовое масла. Кроме того, .применяют синтетические жиры, например трнг.лицерид масляной кислоты или трнглнцеридстеариновой кислоты. Все жиры применяютв концентрации О, - 16%, предпочтительно 2 -5 вес, %. Добавка тензида оказывает стимулирующеедействие иа образование моеномилина,Пример. 81 гер 1 оаусез фапаепз 1 зАТСС 4,72 прививают в 300 мл колбе Эрлеи-.мейера на 30 мл питательной среды следующегосостава, вес,%: 4,0 глюкозы, 3,0 соевой муки,0,3 барды сухой, 0,25 поваренной соли, 0,25 карбоната кальция, воды до 30 мл, После прививки культуру встряхивают при температуре 28 -30 С два дня с частотой 300 об/мин.Ферментативная среда имеет следующийЮ состав, %:Соевое масло 3,0Соевая мука 3,0Маисовый крахмал 3,0Сахароза 1,0Сульфат аммония 0,3Карбонат кальция 0,4Дрожжи 2,0Вода до 30 млДобавку одного из тензидов к ферментативной среде осуществляют в виде 100%-ногоа водного раствора с дважды дистиллированнойводой. Раствор стерилизуют непосредственнопосле этого в течение О мин при 23 - 127 С.Ферментативную среду смешивают с 1,5 млраствора тензида при 37 С, Затем добавляют 5 мл культуральноя жидкости. Затемфф культуру встряхивают при 28 - ЗООС в течение 120 ч при 260 в 3 обмин.Затем добавляют 60 мл метанола и встря-.хивают еще 2 мин в вибросмесителе и послеэтого фильтруют .через складчатый фильтр. ВЗй одной аликвотной части фильтрата определяютсодержание моеномилина в результате его действия на стандартную культуру Яарйу 1 ососсизаигеиз 1 цв 1 йве 1 г 1 зст в сравнении с эффективностью моеномицинового раствора известногосодержания,М Предлагаемый способ обеспечивает высокий выход целевого продукта моеномилина,Формула изобретенияСпособ получения моеномилнна путем выращивания продуцента Ягер 1 оаусез фапаепз 1 з АТСС 14.672, 1 гер акопусез вапвегрепз 1 з АТСС 13.879, Ягер 1 овусез едегепз 1 зАТСС 15,304 или Ягер 1 опусез рузг 1 епз 1 зАТСС 15.303 на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральныесоли. с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода препарата, выращивание осуществляют в присутствии жира и неионогенного тензида с молекулярным весом 1000 - 1500общей формулыЯ - О - (СН г - СН г - 0) пНгде К - углеводородный радикал, содержащий 8 - 18 атомов углерода и который можетсодержать также одну гидроксильную группу, а В=18 - 30.Источники информации, принятые во внимание прн экспертизе:1. Патент ФРГ1210514, кл. 30 Ь 6,1966.2. Патент США3674866, кл. 424 - 118; -1972, Ц.ИПИ Заказ 6Филиал 1 .Г:атент 79/63 Тираж 568одиисное , г. Ужгород, ул. роентнаи, 4