Способ получения ферментного препарата каталазы

Союз СоветскихСоциапистицескииРеспублик ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕУЕПЬСУВУ 111 594172(61) Доноснтельно т. свил. 22) Заявлено 21,07.76 (21)2364104 С 12 0 13 рисо яикинением Гасударственный намет Совета Министров ССС по делам изобретений и открытий(72) Авторы изобрегеиня т, Ф. Гулый, 1. Г. Дегтярь, Л. В. Гудкова, Н. И, Н. В. Латьцнко, А. Н. Кривчун и В. Е. Киодо иронеико,Институт биохилии им, А. В. Паппадина АН Украинской СС и Косарский спиртокомбииат(54) С 11 ОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНКАТАЛАЗЫ 1 РЕПАРАТА дейст Изобретение относится к технологии получения фермептных препаратов, в частностикатализы из микробиологического сырья, иможет быть использовано в ферментной пролыи 1 еиности,Известны способы получения катапазы издорогого и дефицитного сырья животОгопроисхождения, например печени и эритроцитов крови 1,Однако катапаза, попученная из тканейживотных, обпадает узким Оптимумом р 11действия, недостаточной терлкустойчивостыги невысокой устойчивостью к действию перекиси водорода и ряда дентурирую 1 их фнкторов, что О 1 раничивает ее промьпипенное испопьзование.)1 звестен способ Выдепения катапазыиз мик 1 ООиоОиеск 01 О сыр 1 зя, В чпстпОстииз купартур 1 ы 01 жидкости й 5 х 1 Дт.гв 1 зДат,путем сорбции фермента на ,ос грипирова 1.,уО цоппюозу при рН 4,0-5,5 с поспедукиигй песорбцией фосфт.ых буфером с рНЫ,0 121.+ ОсОСОО недостаточно э(1 фективеи ипе н;шо: Иро.,ышпенного 1 и;,епя,Наибопее близким к предпагаемомуизобретению по технической сущности является способ выдепения очищенных ферментных препаратов катапазы из культу ральной ж пдкости гр ион Рюттгс 1%0 ттт ЙЪзсеР 1 дорг е 1 Ъ 2 ат, попучаемой при глубинномвырш Ванин гриба по авт, свид,353956133Способ включает адсорбцию .катапазына гепь-фосфате кальция, отдепение адсор- О бента с катапазой, выдепение катапазы эпюцией, осаждение фермента спиртом и очистку препата диапизом. Выход катаазы врепарате составпяет 70-80% от ее содержая в купьтурапьной жидкости.5 Кагапаза, полученная по этому способу,обпадпет широким оптимумом рН вия,высокой термоустойчивостью, достаточнойусгойчивостыо к действию перекиси водорода и ряда денатурируюших факторов, а так же имеет Высокун чдепьную активность:( Ка 1 ф 460000 ).Но при поучении фермента по описанномуспособу .ицеий гриба является отходомпроизводсгва, в и,етеми устазОвпеО,гто в п 1 оизвоцствегны.х усопия. пр гпуби 1раствором однооснов ного фосфорнокслогокапи, Латд зоат Отде;яот пентрифуГироваек и осадок геля ппомываютО 3 М раствором. одпоосповпого калия.5роддвнОЙ раствор прсоед яют к эюту, Из оучеого раствора охажденоого до 2-4 С, каталазу осаждают полуторным объемом спирта, например, этиловогос температурой от -4 до -6 С илиизопропилового при комнатной температуре.Осадок отделяют центрифут ированием, растворякт в воде и вторично переосаждаюттем же спиртом, при тех же условиях. Затем осадок растворяют в воде, диапизируютпротив воды и вьсушивают в вакууме. Выход каталазы в препарате составляет70-75% от ее содержаний в исходном растворе, активность препаратов - 600010000 ед/мг. 55 ЦНИИПИ Заказ 77 О/30 тираж 567 Подписное Филиал ППП Патент, г, Ужгород, ул, Проектная, 4 ном выравада; РещсИ.т Ч 11 е, обеспечивающем максимальное накопление катапазы.в купьтурапьной жидкости, в мицепииостается 30-100".о фермента но отношениюк его содержанию в купьтурапьной жидкости.Цепью зобретения йвпяется расширениесырьевой базы за счет использования в качестве сырья мицепя гриба РеюсИ 4 цтл ИаРЯ,являющегося отходом производства,Эта цель достигаетсй тем, что в способеполучения очищенного фермептного препарата катапазы из гриба Рел 1 сЫцтт Уйссе,предусматривающем адсорбцию катапазы нагель-фосфате кальция, отделение геля садсорбированной катапазой, эпюирование катапазы одноосновным фосфорнокиспык калием, осаждение фермента спиртом с последующим диализом и сушкой, в качестве исходного сырья:спопьзуют мицепи грибаРетпсЭИцлз У 1 мСе, лри этом последнийизмельчают и из него экстрагируют ферментводой, а адсорбцию катапазы на гель-фосфате кальция осуществляют из экстрактапри рН 6,8-7,2, причем перед элюированиемгель с адсорбированной каталазой промывают водой с последующим отделением его отводы.Способ получения очищенного ферментного препарата катапазы осуществляется следующим образом.30Мипепий гриба Ретс 1 Ижтп %1 а 1 е Р 1 борс.К Ьби отделяют от купьтуральной жидкости,измепьчают и экстр агируют фермент водой, р Нэкстракта равно 6,9-72, Экстракт отделяюти прибавляют к нему при перемешивании равнье объемы 0,5 М растворов хлористогогкальция и двухосновного фосфорнокиспогонатрия в количестве рассчитанном изсодержания катапазы в растворе и сорбционной емкости образуемого геля. 40Гель, образованный 1 мл 0,5 М раство.ра хлористого кальция и 1 М 05 М раствора двухосновного фосфорнокиспого натрия,адсорбирует из раствора 8000-9000 единиц катапазы. Это соответствует сорбции 45на гель, образованный из 1 г хлористогокальция и эквимолярного количества фосфорнокиспого натрия, 80000 единиц катапазы.Гель.с адсорбированной каталазой отделяют от раствора, промывают водой иЯцентр ифуг ируют,Эпюируют каталазу при интенсивном пе-ремешивании в течение 40-45 мин 1 И Формула изобретения Способ получений ферментного препарата катапазы из гриба Ретсй"ит 1 Уйди Вбоу.КМС 1, предусматриваощий адсорбцию катапазы на гепь-фосфате капьци, отделениегеля с адсорбированной каталазой, эщоиро-вание катапазы одноосповным фосфорнокиспым калием, осаждение фермента спиртом споследуюяидапиоом и сушкой, о т л ич а ю щ и й с и тем, чтосцельюрасширения сырьевой базы, в качестве исходногосырья испопьзуот мицепий гриба Ретис 1 СслтьЧФасе Р 1 ЫорР,е ИГа, при этом последнийизмельчают и из него экстрагируют ферментводой, а адсорбцию катализы на гель-фосфате кальция осушествпякт из экстракта прирН 6,8-7,2, причем перед зпюированиемгель с адсорбрдованной:катапазой промывают водой с последующим отделением егоот воды.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе:1, Нсчесст Я., 5 сЫЫет Н Неттлей Н.,йте .ие 1 Ьоде гит ьос 1 ет ъпф чот каМоьеоаэи т 1 тдет ЫЬет оЬае оттеасипдотДол 1- 5 Ое ГоьцтьттиАе,"Х. РЬу 510 . .Иетп .215, 229, 061,2. Авторское свидетельство СССР% 410083, кл, С 07 Я 7/028, 1972.3. Авторское свидетельство СССРМ 353956, кл. С 123 13/10, 1971.