Способ получения препарата антигенов

ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ Н ИЯ Союз Советских Социалистических Республик(11) 5 б 8378 Т 2) Заявле 4.03,73 (21) 1900044/15 М л С 12 К 1/О 23) Приоритет (32) 08.06.7 Гасударственный комитет Совета Министров СССР по делам иэооретений и открытий(45) Дата опубликования оп ания 07,07.7 вторыобретени Иностранцы Ив Моро, Кристиан Стельман и Жан Те(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА АНТИГЕНО 2 помощью глутарового альдегида (конечная концентрация альдегида 0,7%), промьвают в буферном фосфатном растворе (рН 7,6) и проводят лиофили. зацию в присутствии субстрата из смеси лактозапептон - фосфатный буферный раствор. Полученньп препарат обладает высокой стабильностью.П р и м е р 2. Приготовление антигенов ньюкаслской болезни.От собранного вируса, выращенного на аллантоисной жидкости яиц известным способом, отдео ляют оболочку, вводя твиновый эфир при 4 С, центрифугируют для удаления плавающего сверху продукта, который содержит оболочки, осадок с вирионами (титр по вирусу 80 мг/мл) промывают, вводят глутаровый альдегид (конечная концентрация 0,5%), промьвают в буферном растворе, проводят лиофплизацию и получают стабильные анти- гены,змов, предназначенныхглютинации.ения препарата антигеантигенов микроорганиреакций пассивной гемаИзвестны способы получдля пассивной гемаггл инации, включающие троцитами.Недостатком известно пособа является п ой устойчивостью в е препаратов с невь ме С 3, Приготовление антигенов беПример шенства.Получают культу ках, собирают виру введения твинового полученный раствор добавляют глутаров ифугирования, в усу 150 мг/мл) (конечная кони цен(61) Дополнительный к пате зобретение относится к способам приготов активацию микроорганизмов и связьвание их ю повышения устоичивости препарат антигенов, например, вирусных или бактериальных, предлагается связьвание микроорганизмов с эритроцитами осуществлять с помощью диальдегида, например глутарового альдегида, с последующей лиофилизацией полученного препарата.Для инактивации обычно используют Р-пропиолактон или твиновый эфир.П р и м е р 1. Приготовление препарата антигенов бычьего аденовируса 111.20Получают известным способом культуру бычье. го аденовируса 111 на клетках из телячьей почки. После сбора получают раствор с титром по вирусу 90 в 1 мг/мл, инактивируют его 11-пропиолактоном, связываютантигеныс эритроцитами барана с ру вирусов бешенства на клет ы, отделяют оболочки посл568378 Составитель Е. Арская Техред А. Демьянова Редактор Т. Шарганова Корректор И. Гоксич Заказ 1803/5 Тираж 541 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035. Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4 центрация 0,8%), промывают в фосфатном буферном растворе, проводят лиофилизацию и получаютстабильные антигены,Аналогичным образом получают бычьи антигены Негрев а гцв, связанные с эритроцитами барана.П р и м е р 4. Приготовление язвенных антигенов.Готовят язвенные антигены штамма Негревч 1 гоз из какой. нибудь культуры, например типаФренкеля, концентрируют их, очищают путем ультрацентрифугирования в градиенте сахарозы, Передконцентрированием проводят инактивацию с помощью 13.пропиолактона. Затем связывают антигенс эритроцитами с помощью глутарового альдегида(концентрация 0,2 - 1%) при комнатной температуре в течение 1 час, центрифугируют, промываютосадок два раза в фосфатном буферном растворепри рН 7,6, суспендируют в буферном растворе ипроводят лиофилизацию в присутствии субстрата,образованного из смеси растворов лактозы (200 г), 20понтона (40 г) и воды (до 1 л) и антисептика,Из приготовленных и лиофилизованных такимобразом антигенов, усзойчивых в течение длительного периода времени, и после шести месяцевполучают суспензию в дистиллированной воде с тем 25же самым титром по вирусу, что и перед лиофилизацией.Исследуемую сыворотку инактивируют путемнагревания до 56 С, обрабатывают эритроцитамилля устранения естественной агглютинации, ломе. 30шают в чашечки, содержащие вначале один и тот жеооъем буферного раствора, и вводят одинаковыеколичества испытуемых доепаратов язвенных анти.генов. связанных с эритроцитами,В контроле в чашечки помещают эквивалентное 35количество эритроцитов без антигенов. После пере.мешивания выдерживают чашечки 1 час при комнатной температуре и определяют реакцию приразличных разведениях сыворотки,При очень позитивной реакции констатируют 40образование таблеток с краями, сложенными в видефестона. При позитивной реакции получают болееобширные микроскопические агглютинаты или поменьшей мере достаточно гомогенную пленку эрит 4роцитов. При негативной реакции эритроциты собираются в центре донышка чашечки в виде неболь. шого правильного кольца,Аналогичные результаты получают для язвенных антигенов, приготовленных предлагаемым способом из штаммов А. А 1 Пег 60 ц О. 7 апзаппе 65,П р и м е р 5. Приготовление препарата антигенов инфекционного бронхита.Приготовляют корона-вирус инфекционного бронхита на яйцах с девятидневным зародышем, Суспензию вирусов, представляющую собой аллантоисную жидкость, собирают через 24 час после инокуляции, концентрируют ее в 25 раз путем ультрафильтрации с последующей очисткой ультрацентрифугированием в градиенте сахарозы в течение 3 час при скорости 25000 об/мин, Отобранную очищенную часть, соответствующую пику оптической регистрапии, обрабатывают твиновым эфиром, титруют в белках вируса способом Фолина, связывают вирус с эритроцитами с помощью глутарового альдегида и проводят лиофилизацию в присутствии субстрата из смеси растворов лактозы, пептона, воды и антисептика, Полученный препарат в течение длительного времени стабилен и приблизительно в 100 раз более чувствителен, чем препарат, приготов. ленный осаждением в агаровой среде. Формула изобретения 1. Способ получения препарата антигенов, например, вирусных или бактериальных, для реакции пассивной гемагглютинации, включающий инактивацию микроорганизмов и связывание их с эритроцитами, отлича ющий ся тем, что, с целью повышения устойчивости препарата, связывание микроорганизмов с эритроцитами осуществляют с помощью диальдегида с последующей лиофилиза. цией полученного препарата.2, Способ по и. 1, от лича ющийс я тем, что в качестве диальдегида берут глутаровый альдегид.3. Способ поп, 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что инактивацию проводят с помощью 13 - пропиолактона или твинового эфира.