Способ получения живой брюшнотифозной вакцины

Союз Советских Социалистически Республикрт 549420 ОП ИСАНИ ЕИЗОБРЕТЕН ИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 61) Дополнительное к авт, св(45) Дата опубликования о Государствеиныи комитет Совета Министров СССР по дедам изобретеиийи открытий Бюллетень чсания 17.06.7(71) Заявит ьский институ. Мечникова сков вакц 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЖИВОЙБРЮШНОТИфОЗНОЙ ВАКЦИНЫ ко вакцина, пол , недостаточно эф ная тив унтанта по стрептомиеверсии по их ре- путем Изобретение относится к медицине.Известен способ получения живой брюш нотифозной вакцины на основе мутанта Яа 1 тпопе 11 а 1 урЫ, зависимого по стрептомицину,Одна учен известным способом фек на и реактогенна.С целью получения высокоиммуногенной и нереактогенной вакцины используют мутант Яа 1 тпопе 1 а урЫ, обладающий дополнительно зависимостью по пурину.Способ получения живой брюшнотифозной вакцины осуществляют следующим образом.Используют мутанты бактерий Яа 1 гпопе 11 а 1 ур 1 т 1, зависимые по пурину (рог. В - ) и стрептомицину (з 1 г-с 1), Мутанты по пурину получают пенициллиновым методом. Для получения стрептомицинзависимых мутантов исходный штамм высевают на 1,5%-ный мясо-пептонный агар Хоттингера, содержащий стреп. томицин в концентрации 300 ед/мл. Выращенные колонии подращивают в мясо-пептон. ном бульоне Хоттингера в течение 3 ч, после чего высевают их на твердую агаровую среду с антибиотиком и без него. Колонии, выросшие только на среде с антибиотиком, являются стрептомицинзависимыми.Вирулентные свойства мутантов и вертантов изучают на белых мышах внутрибрюшного введения культуры в физиологическом растворе. Тифозные бактерии вводят в полужидком агаре. 1.Рвычисляют пометоду Кербера в модификации Ашмарина5 и Воробьева,При мутации к пурин- и стрептомицинзависимости сальмонеллы разных видов становятся авирулентными: их показатель 1 Р 5в миллионы раз больше, чем этот же показа.0 тель у исходных штаммов.При изучении вирулентных свойств рсвер.тантов з 1 г-с 1 мутантов сальмонелл устанавливается расщепление этого свойства. 80 -85%,ревертантов остаются авирулентными,15 остальные же ревертанты в той или иной степени восстанавливают вирулентные свойства,Ревертанты из пуринзависимого штамма3. 1 ур 111 М 71 рцг. В - в 100% остаютсявирулентными20 Чтобы получить живую брюшнотифознуквакцину, безопасную в практическом использовании, применяют двойной мутант Я. 1 урЫ,зависимый по пурину и стрептомицину. В качестве исходного штамма используют пурин 25 зависимый мутант 5. 1 ур 1 п Мрцг. Виз которого отселекционировали стрептомицинзависимый мутант.Частота реверсии двойного мпурину составляет 2 10 в , а поЗО цину - 4 1 О , Одномоментной р549470 Составитель С. МалютинаТекред В. Рыбакова Редактор С, Титова Корректор И. Симкина Заказ 290/935 Изд.463 Тираж 589 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5Тпп, Харьк. фил. пред. Патент двум признакам двойного мутанта при посеве его в количестве 1 10 п микробных клеток на минимальный агар без стрептомицина не установлено.Вирулентные свойства двойного мутанта и ревертантов по одному из признаков изучают на белых мышах.Ревертанты, выделенные из двойного мутанта, по одному из признаков по пурину или стрептомицину остаются авирулентными со значением 1.Р 6 10 - 1 10 микробных клеток.Отсутствие одномоментной реверсии по двум признакам, авирулентность ревертантов по одному из признаков обуславливает безопасность практического применения живой брюшнотифозной вакцины, приготовленной на основе мутанта, зависимого по пурину и стрептомицину,Иммуногенные свойства вакцины, приготовленной на основе двойного мутанта 5. 1 урЫ Мрог. В - з 1 г-д, проверяют на белых мышах по методу,Луипольда. Группы мышей, по 10 штук в каждой, иммунизируют энтерально различными дозами вакцины и разрешают вирулентной культурой в 0,4/,-ном полужидком агаре 5. 1 урЫ Т 5501 в дозе 5 10 1 Л)зо. В качестве контроля используют гретую вакцину, приготовленную из вирулентной культуры 5. 1 урЫ Т 5501. Иммуногенные свойства живой брюшнотифозной вакцины, приготовленной на основе двойного мутанта, 10 при энтеральном способе применения в 5 развыше по сравнению с иммуногенными свойствами гретой вакцины. Формула изобретения 15Способ получения живой брюшнотифознойвакцины путем выращивания стрептомицинзависимого штамма Ьагпопе 11 а 1 урЫ в питательной среде с последующим отделением 20 культуры и лиофилизацией, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью получения высокоимму.ногенной и нереактогенной вакцины, используют мутант Яа 1 п 1 опе 11 а урЫ, обладающий дополнительно зависимостью по пурину,