Способ получения постоянных цитохимических препаратов микроорганизмовэукариот

(и) 5 Б 964 ОПИСАНИЕ ИЗО БРЕТ Е Н И Я К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(22) Заявлено 08.08,73 (21) 1955150)13с присоединением заявки123) ПриоритетОпубликовано 30.05,76. Бюллетень20Дата опубликования описания 18.06.76 011 Ч 1 2 вулпрстеенный комитетМвввте Министров 00 СР о лелзм иеобретеннй К 5780851хрыти 72) Автор изобретени 71) Заявитель Ю, Г. Симаков Московский ордена Трудового Красного Знамени нженерно-строительный институт им. В. В. Куйбышева(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОСТОЯ Н НЪХ ЦИТОХИМИЧ ЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ МИКРООРГАНИЗМОВ - ЭУКАРИОТ2 Изобретение относится к области микротехники и может быть применено при морфологическом и цитохимическом анализе в эмбриологии, цитологии и паразитологии,Известен способ получения тотальных, постоянных цитологических и цитохимическихпрепаратов микрооргацизмов-эукариот путемфиксации проводки через промежуточные среды, окраски и последующего заключения втвердую среду.10Однако такой способ не обеспечивает сохранения структуры микроорганизмов размеромот 50 до 300 мкм.С целью сохранения структуры микроорганизмов размером от 50 до 300 мкм по предлагасмому способу микроорганизмы прижимаютк предметному стеклу с помощью покровцогостекла, за мор аживают, затем снимают покровцое стекло и мгновенно переносят в водоотнимающий фиксатор. 20Способ осуществляют следующим образом,Исследуемые микроорганизмы помещают напредметное стекло в капле воды. Затем тонкооттянутой Пастеровской пипеткой воду из капли отсасывают до уровня, при котором микроорганизмы начинают касаться поверхностипредметного стекла, Для получения давленыхпрепаратов необходимо более глубокое отсасывание воды. Затем микроорганизмы придавливают покровным стеклом, Стекло только 30 опускается ца каплю с микроорганизмами и своей тяжестью сплющивает исследуемые микрообьекты, оставляя их прц этом живыми, Изготовляемый препарат переносят па термоэлектрический замораживающий столик ТОЗ - 11, Микроорганизмы прц полном замораживании становятся видимы невооруженным глазом как маленькие белые точки.Скальпелем поддевают край покровцого стекла и срывают его движением вверх. Замороженные микроорганизмы при этом остаются ца предметцом стекле, Сразу же после срыва покровцого стекла предметное стекло с замороженным материалом помещают для фиксации в 96-цый этиловый или метиловый спирт, можно также фиксировать в смеси спирт - ацетон (1: 1). Оттаивание препарата сопровождают быстрым удалением воды и соранецием той структуры, которая была при замораживании, Микроорганизмы после фиксации остаются прикрепленными к предметному стеклу и распластацы ца нем. Время фиксации от 5 до 10 мин, в зависимости от величины обьектов. Затем следует обычная обработка и проведение препарата до воды по спиртам понижающейся концентрации (в проводке должны быть обязательно после 70-ного спирта 50 и 30-ные спирты). Дальнейшую операцию проводят по прописям требуемых реакций, препарат окрашивают на цитохимию515964 Фар мула изобретения Составитель С. Малютина Редактор Н. Спиридонова Техред М. Семенов Корректор Е. Хмелева Заказ 1324713 Изд, М 1374 Тираж 1029 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 или морфологию, доводят по возрастающим концентрациям спиртов до ксилола и заключают в канадский бальзам или в другие синтетические смолы.Полученные этим способом препараты позволяют выявить точную локализацию химических компонентов клетки, придавить до монослоя и изучить все клетки у многоклеточных организмов, провести реакции на выявление химических компонентов, при которых требуется спиртовая фиксация, Способ сокращает время изготовления одного препарата по сравнению с другими способами. Способ получения постоянных цитохимических препаратов микроорганизмов-эукариот 5 путем фиксации, проводки, окраски, заливки втвердую среду, отличающийся тем, что, с целью сохранения структуры микроорганизмов размером от 50,до 300 мкм, микроорганизмы прижимают к предметному стеклу с 10 помощью покровного стекла, замораживают,затем снимают покровное стекло и мгновенно переносят в водоотнимающий фиксатор.