Способ получения сывороточного альбумина

Республик ТЕЛЬ СТВУ К АВТОРСКОМ(61) Дополнительно (22) Заявлено 05,02 сви 51) М. КлА 61 К 23,0 1629487 31-16 с присоединением заявкиГооулерственный комите Госете Министров СССР(23) ПриоритетОпубликовано 05.07,76. Бюллетень КДата опубликовашгя описания 28.06.772) Авторы изобрстепи М, И, Иванов, А. А, Фром, А, А. Никитенко,А, Е, Киселев и Л. И. Скобеле Центральный ордена Ленина институт гематоло кровиМ. Русанов,) З 151 Витсл гии и переливания 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЪВОРОТОЧНОГО АЛЪБУМИН 50 л смеси плацентар отки. Путем фракциоо Кону отделяют фракиспользуют для,пригоина. Центрифугат А, лення осадка фракции 30 Пример 1. Берут ной и абортной сыво нирования сыворотки цию 11+111, которую товления гаммаглобу оставшийся после отдИзооретенис от 1 осится к области медицины, а именно к способам получения сывороточного альбумина.Известен апособ,получени 11 сывороточного альбумина из белковых растворов, содержащих альбумин, путем разделения смеси белков этиловым спиртом, Однако известный способ не дает возможности получать чистый альбумин.С целью повышения степени очистки препа рата по предлагаемому способу этиловый спирт к белковому раствору добавляют до концентрации 18 - 35 об. %, одновременно добавляют соль жирной кислоты, например каприлат натрия, в количестве 0,1 - 0,6% при 15 0 - 30 С и рН 2,0 - 5,0, выпавший осадок отделяют центрифугированисм, извлекают альбумин из осадка и центрифугата, концентрируют и отделяют от спирта известными приемами, 20Кроме того, с целью стабилизации целевого,продукта после удаления спирта из раствора снижа 1 от рН до 3,3 и вновь повышают до 70 11+111, содержит 25% этилового спирта, около 2% белка, примеси гсмопигмента, пирогенных субстанций, тканевые белки; рН раствора 7,2 - 7,8. К полученному раствору дооавляют каприлат натрия до его конечной концентрации 0,3%, рН не коррегир(ют.После растворения каприлата натрия рН смеси снижают до 3,3, тем(пературу раствора предварительно устанавливают 20 С. После перемешивания в течение 30 мин при 20 С рН смеси смещают до 4,4, после чего раствор центрифугируют для отделения образовавшегося осадка. Центрифугат осветляют фильтрацией и снижают е)го темгературу до - 6 - 8 С. 11 ри таких условиях альбумин переходит в нераствори;,1 ое состояние и его опделяют центрифугированием. Полученный осадок растворяют и дистиллированной апирогенной воде, смещают рН до нейтральных значений, затем снижают рН до 3,3 и вновь (повышают до 6,8 - 7,2. После установления рН белковый раствор разливают по флаконам, пристеночно замораживают и лиофильно ВысушиВа 10 т, ПО- рошок альбмина растВоря 1 ОТ В а(пирогенной дистиллирОВанной ВОде до требуемоЙ концентрации, осветляют и стерплизуют фильтрацией, стерильно разливают по флаконам.П р и м е р 2. Исходным сырьем служит донорская плазма. 50 л плазмы обрабатывают методом Кона, включая стадию отделения467536 Формула изобретения 35 40 45 50 Составитель Т, ГоловинаТехред Т. Зимина Корректор Т. Добровольская Редактор Т. Блохина Заказ 1317/6 Изд, Мо 1334 Тираж 630 Г 1 оди ис иое ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 осадка 11+111. В центрифугате, полученном после отделения осадка фракции 11+111 и содержащем 25 об. /о спирта, доводят концентрацию каприлата натрия до О,Зо , рН снижают до 4,5. Раствор выдерживают при 20 С в течение 20 мин. Образовавшийся осадок отделяют центрифугированием, который служит для дополнительного извлечения альфа- и бета-глобулинов и альбумина.Осадок растворяют в дистиллированной воде, осветляют фильтрацией, рН довадят,до нейтральных значений. Полученный раствор содержит 15 альфа-глобулинов, 25% бетаглобулинов и 60% альбумина. В центрифугате снижают концентрацию водородных ионов до 3,3. После перемешивания в течение ЗО мин рН доводят до 4,5, затем отделяют образовавшийся осадок. Процесс проводят при положительной температуре, Осадок содержит альбумин, бета-глобулины и денатурированные белки. Центрифугат охлаждают до - 8 С, оставляют для созревания осадка на 24 ч, Осадок, содержащий чистый альбумин, отделяют центрифугированием. Осадок чистого альбумина растворяют в апирогенной дистиллированной воде в соотношении 1:4, лиофильно высушивают. Порошок альбумина растворяют в апирагенной дистиллированной воде до концентрации 20%, рН раствора снижают до 3,3 и выдерживают 30 мин. Затем раствор осветляют фильтрацией при рН 4,5 и среду нейтрализуют до рН 7,0, Полученный раствор содержит иммунофоретически чистый альбумин, устойчивый к,прогреву при 60 С в течение 10 ч с целью инактивации вируса гепатита, причем для стабилизации раствора не требуется .дополнительного добавления стабилизирующих веществ.П р и м е р 3. Сырьем служит экстракт ллаценты, содержащий 2,5% белка, тканевые белки, гемоглобин до 50% от общего белка, пирогенные субстанции.Процесс ведется аналогично примеру 1, за исключением количества каприловокислого натрия, используемого для фракционирования. Каприлат натрия добавляют до концентрации в растворе 0,2/о, что связано с пониженным содержанием белка в исходном материале.П р и м е р 4. Исходное сырье - плазма или сыворотка бычьей крови. 5 10 15 20 25 30 К 50 л такой сыворотки добавляют 96%.ный спирт до его конечной концентрации в растворе 25 об, /,. Перед добавлением спирта в сыворотку вводят каприловокислый натрий до концентрации его в растворе 0,3%. После растворения каприлата натрия рН раствора доводят до 3,3, В этих условиях белковую смесь выдерживают при 20 С в течение 40 мин, после чего рН защелачивают до 4,5. Образовавшийся осадок отделяют центрифугированием, После отделения осадка температуру центрифугата снижают до - 8 С и раствор выдерживают в течение 48 ч для образования осадка. Отделенный осадок содержит альбумин и следы тлобулинов. Осадск разводят апирогенной дистиллированной водой в соотношении 1: 4 и подвергают лиофилизации.Сухой порошок альбумина растворяют апирогенной дистиллированной водой до требуемой,концентрации. В,полученном растворе рН доводят до нейтральных значений, затем смещают концентрацию водородных ионов до 3,3. После 20 мин выдержки рН среды доводят до нейтральных значений. Обработанный таким образом раствор фильтруют для осветления и отделения следов глобулипов, стерилизуют фильтрацией и стерильно разливают по флаконам. 1, Способ получения сывороточного альбу- мина из белковых растворов, содержащих альбумин, путем разделения смеси белков этиловым спиртом, отличаю,щийся тем, что, с целью повышения степени очистки прспарата, этиловый спирт добавляют к белковому раствору до концентрации 18 - 35 об.%, одновременно добавляют соль жирной кислоты, например каприлат натрия, в количсстве 0,1 - 0,6% прп 0 - 30 С и рН 2,0 - 5,0, выпавший осадок отделяют центрифугированием, извлекают альбумин из осадка и центрифугата, концентрируют и отделяют от спирта известными приемами.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что, с целью стабилизации целевого продукта, после удаления спирта снижают рН до 3,3 и вновь повышают до 7,0.