Способ определения жизнеспособности лейкоцитов в слюне

О П И С А Н И Е (11) 42934 бИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республик(51) М, Кл, б 01 л 33/16 Государственный комитетСовета Министров СССРпв делам изобретенийи аткрытий(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ ЛЕЙКОЦИТОВ В СЛЮНЕИзобретение относится к области стоматологии,Известен способ определения жизнеспособности лейкоцитов крови путем изучения фагоцитарной активности клеток. Однако такой способ сложен.Целью изобретения является упрощение и повышение чувствительности способа.Для этого слюну центрифугируют, измеряют активность лактатдегидрогеназы в осадке и надосадочной жидкости и по соотношению активностей определяют процент жизнеопособности лейкоцитов,Способ осуществляют в три стадии.1. Сбор и разделение ротовой жидкости на фракции,С целью удаления остатков пищи из ротовой полости исследуемый прополаскивает рот 0,9%-ным раствором хлористого натрия, После этого собирают ротовую жидкость в градуированную центрифужную пробирку в течение 10 мин. Обе пробирки после сбора ротовой жидкости центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин. Измеряют общий объем ротовой жидкости и объем осадка после центрифугирования, Надосадочную жидкость сливают в сухую пробирку и помещают до определения в холодильник. Осадок аккуратно размешивают с 3,0 мл охлажденного физиологического раствора и снова центрифугируют. Надосадочную жидкость отбрасывают, к осадку прибавляют дистиллированной воды в количестве, необходимом для восстановления первоначального объема (до 3,0 мл) и тщательно гомогенизируют, Сохраняют до определения в холодильнике.2. Измерение ЛДГ (лактатдетидрогеназа)активности полученных фракций.Активность ЛДГ определяют по обратной 10 реакции, которую она катализирует:А-лактат+ НАДпируват+ НАД Н,т, е. определяют скорость окисления восстановленной формы никотинамид адениндину клеотида (НАД Н 2) в присутствии пирувата,Так как НАД Н, обладает максимумом поглощения при 340 ммк, то по мере его окисления отмечается убыль экстинкции на этой длине волны.20 Измерения производят в специально термостатированных кюветах. В каждую кювету из кварца помещают 2,2 мл бидистиллированной воды; 0,5 мл натрий - калий фосфатного буфера (0,1 М, рН 7,4); 0,1 мл пирувата натрия 25 (0,5 М); 0,1 мл раствора НАД Н 0,1% и0,1 мл исследуемого вещества. Температуру инкубационной смеси поддерживают на уровне 30+-1,0 С. Отсчеты экстинции производяг на 1, 3, 6 и 11-ой минутах инкубации. АктивЗО ность выражают в единицах экстинкции наКорректор О. Усова Редактор Д, Пинчук Заказ 2775/17 Изд. Мо 886 Тираж 651 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская набд. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 1 мл исследуемого вещества за 10 мин инкубации,3. Расчет активности ЛДГ и вычисление процента деградации эмигрирующих лейкоцитов.Расчет активности ЛДГ надосадочной фракции ротовой жидкости производят по формуле:Ан: (Е 1 мингмин)10 (1 общ 1 ос)1 где Ан - активность ЛДГ надосадка ротовой жидкости;Е 1 мин Е 2 мин - ЭКСТИНКЦИЯ НЯДОСадка рОТОВОЙжидкости за 1 мин и 2 мин исследования;Уобп, - ОбЪЕМ рОтОВОй жИдКОСтИ, ПОЛУченный у исследуемого за10 мин;Чоо - объем осадка ротовой жидкости,полученный у исследуемого за10 мин. Расчет активности ЛДГ осадка ротовой жидкости производят по формуле: Р Аос - (Е 1 мин Егмин)10 1 осгде; А - активность ЛДГ осадка ротовой жидкости; Е 1, Е 2 м - экстинкция осадка ротовойжидкости за 1 мин и 10 мин исследования;Чос - объем осадка ротовой жидкостипосле разбавления.Степень деградации лейкоцитов, эмигрирующих в ротовую полость определяют по формуле: Сравнение величин деградации или динамики восстановления пирувата лактатдегидрогеназой надосадочной и осадочной фракции ротовой жидкости людей до и после примене. ния, например, микроволн, позволяет судить о характере их действия на эмиграцию лей,коцитов. 20 Предмет изобретенияСпособ определения жизнеспособности лейкоцитов в слюне, о тли ч а ю щий ся тем, что, с целью упрощения и повышения чувствительности способа, слюну центрифугируют, изме 25 ряют активность лактатдегидрогеназы в осадке и надосадочной жидкости и по соотношению активностей определяют процент жизнеспособности лейкоцитов.