Способ получения концентрированного низина

О П И С А Н И Е и) 427 Я 6ИЗОБРЕТЕН ИЯ Союз Советскю Социалистическии Республик(б 1) Зависимый от патента 2) Заявлено 07.01.70 (21) 1393515/28-13(33) ПНРОпубликовано 05.05.74, Бюллетень М 1 осударствеиимй комитетСовета Мииистроо СССРпо делам изооретеиийи открытий 53) УД 1 615.779,91088.8) опубликования описания 10.10,7(72) Авторы изобретени Иностранцы Казимиж Брониковскибита Якубчик, Мария Ш Ежи Меллер, Галина Вось Ева Липинска, Эль гдан Раковски,овска м Ш ь 644(71) Заявите Иностранн тновский фармацевтиая и ма ескии завод ПолР) 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЕНТРИРОВАННОГО НИЗИНА ивают, Промывают осатательной средой с полуоторый фильтруют и таквленис ацетона осущестосадок, полученный посми натрия, для его обезтурой ниже 0"С.ия продуцента низина ожет содержать глюкозу, пепсионовый гидролизат кков из серологической т казеина или альбумина, ые вещества могут быть упности друг с другом,при вспенивании филушивают, например,сируют путем изменен 20Пример 1. Берут 1жидкости с активностной путем ферментирщим штаммом Ягер 1 о25 ной среды следующегной сыворотки, 20 кг250 л пепсиновогострептококков, принадческой группе Х. 000 л ф ью 4200 ования соссцз 1 о состав артофел гидроли лежаще" ционнои получен- бразую- итательл молочиропа иультуры ерологиер ментаед/мл,низин-оасЫз иа: 750ьнопоэатаи к с Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам получения концентрированного низина.Известен способ получения концентрированного низина путем выращивания его продуцента Ягер 1 ососецз 1 ас 11 з на питательной среде, содеркащей молоко или молочные продукты, например обезжиренное молоко, выделения низина из культуральной жидкости путем добавления сычужного фермента и хлористого кальция, подкисления ее соляной кислотой, резделения на твердую и жидкую фазы, отделения твердой, например, фильтрованием с последующим промыванием ее и вспениванием полученного фильтрата, осаждения низина из пены добавлением солей натрия в присутствии ацетона, полученный осадок центрифугируют, растворяют в метиловом спирте и вновь осаждают низин при помощи ацетона. Полученный низин высушивают.По предлагаемому способу получают высококонцентрированный низин.Для этого культуральную жидкость подкисляют до значения рН, равного 3,3 - 3,7, преимущественно 3,5, перед вспениванием среду нагревают до температуры б 0 - 120 С, преимущественно 95 С, выдерживают при этой температуре в течение нескольких минут, например пяти, и осадок охлаждают, отделяют от раствора, который вспен док отработанной пи чением экстракта, к же вспепивают, доба 5 вляют многократно в ле высаливания соля воживания с темпера Для выращивап питательная среда м 0 картофельный сироп,культуры стрептоко группы К, гидролиза причем вышеуказанн введены как в совок 5 так и отдельно. Пену, полученную рата и экстракта, ос стаиванием и конден скорости течения струферментационную жидкость подкисляют18%-ной соляной кислотой до рН 3,5, а затемее подогревают до температуры 95 С, при этойтемпературе выдерживают в течение 5 мини охлаждают до температуры 25 С. Выпавшийпри этом белковый осадок фильтруют.Отфильтрованную жидкость подвергаютдвухступенчатому процессу вспенивания припомощи механического пенообразователя, например насоса, в который непрерывно подают ферментационную жидкость и воздух вобъемном отношении около 6;1.Полученную пену осушивают в резервуаре,в нижней части которого имеется отвод дляобедненной ферментационной жидкости, а вверхней - воронка, собирающая пену под действием вакуума.Осушенную пену, собранную в воронку поддействием вакуума, переводят в жидкость путем изменения скорости течения струи.Сконденсированная пена - это фракция, составляющая высокосгущенный водный концентрат низина. Обедненную ферментационуюжидкость отводят из резервуара и направляютна следующую ступень, где этот процесс повторяют.Количество ступеней зависит от пенообразующих свойств среды и от требуемой степенисгущения.20 кг белкового осадка, содержащего 7000ед/г низина, экстрагируют 180 л отработаннойпитательной среды. Полученный экстрактфильтруют и вспенивают в две стадии, получают 32,5 л жидкой фракции, обладающей активностью 120000 ед/мл, из нее осаждают низин добавлением 8,3 кг поваренной соли.Осадок центрифугируют, троекратно экстрагируют 15 л ацетона, охлажденного до - 15 С.Примеси ацетона, оставшиеся в полученномосадке, удаляют путем отгонки в вакууме притемпературе - 15 С.Получают 0,450 кг высококонцентрированного низина крепостью 8,3 10 ед/г,П р и м е р 2, Берут 1000 л ферментационнойжидкости крепостью 5500 ед/мл, полученнойпутем ферментирования низин-образующимштаммом Ягер 1 ососсцз 1 асЫз питательной среды, состоящей из обезжиренного молока,Фер мента ционную жидкость подкисляют18/о-ной соляной кислотой до рН 3,5, а затемподогревают ее до 95 С и при этой температуре выдерживают в течение 5 мин, после этогожидкость охлаждают до температуры 25 С, авыпавший при этом осадок фильтруют. Отфильтрованную жидкость подвергают двухступенчатому вспениванию. Получают белковыйосадок в количестве 80 кг, содержащий 8000ед/г низина.Экстрагируют 720 л молочной сыворотки,предварительно лишенной низина. Экстракт10 1. Способ получения концентрированного низина путем выращивания его продуцента Ыгер 1 ососсцз 1 ас 11 з на питательной среде, содержащей молоко или молочные продукты, например обезжиренное молоко, выделения низина из культуральной жидкости путем подкисления ее соляной кислотой, разделения на твердую и жидкую фазы, отделения твердой, например, фильтрованием, с последующим промыванием ее и вспениванием полученного фильтрата путем введения в него воздуха, осаждения низина из пены добавлением солей натрия с последующим центвифугированием, добавлением ацетона и высушиванием, например, под вакуумом, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что культуральную жидкость подкисляют до рН, равного З,З - 3,7, преимущественно 3,5, перед вспениванием среду нагревают до 60 - 120 С, преимущественно 95 С, выдерживают при этой температуре в течение нескольких минут, например пяти, и осадок охлаждают, промывают отработанной питательной средой с получением экстракта, который фильтруют, а также вспенивают, ацетон добавляют многократно в осадок, полученный после высаливания солями натрия, для его обезвоживания с температурой ниже 0 С.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что питательная среда для выращивания продуцента наряду с молоком и молочными продуктами содержит глюкозу.3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что среда содержит картофельный сироп.4, Способ по пп. 1 - 3, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что питательная среда содержит пепсиновый гидролизат культуры стрептококков из серологической группы Х.5, Способ по пп. 1 - 3, отл и ч а ющи йся тем, что питательная среда содержит гидролизат казеина,или альбумина.6. Способ по пп. 2 - 5, отличающийся тем, что вышеуказанные вещества могут быть введены как в совокупности друг с другом, так и отдельно.7. Способ по п, 1, отличающийся тем, что пену, полученную при вспенивании филь- трата и экстракта, осушивают, например, отстаиванием и конденсируют путем изменения 60 скорости течения струи,15 20 25 Зо 35 40 45 50 55 подвергают двухступенчатому вспениванию, получают 41,5 л жидкой фракции, обладающей активностью 120000 ед/мл. Эту жидкую фракцию перерабатывают в дальнейшем, как описано в примере 1.В результате получают 0,550 кг концентрата низина крепостью 8,5 10 ед/г. Предмет изобретения