Способ идентификации патогенных энтеробактерий

-т,вфсл422769 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советскии Социалистицеских Республикс присоединением заявки ЛЪ осударственныи комитетСовета Министров СССРпо делам изобретенийи открытий(32) ПриоритетОпубликовано 05.04.74, Бюллетень М 13 Дата опубликования онисаня 14.11.74 53) 76,851,4088,8)Г, П. Калина Московский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт гигиены им. Ф. Ф, Эрисман(54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИ ПАТОГЕННЫХ ЭНТЕРОБАКТЕРИ в первой срсахарозу иры высеваюнижнем сл5 а в верхнемповареннуюиндикатор,тон, поваредикатор с10 генного стртой с третьеПредлагавведения(комплексн15 ного трехфа оситсяой микргенных еделеас приуреаз 0,4 -жевой оза по бром- изация осте- азли 04 -Изобретение отн к области медицинской и ветеринарн обиологии, а именно к диагностике пато микробов семейства энтеробактерий.Известен способ идентификации патогенных энтеробактерий с использованием девяти тестов, включающий посев микроорганизмов в питательную среду в шести пробирках и выращивание их в ней в течение двух - трех дней.Однако недостатком известного способа является то, что известный набор тестов не в состоянии диагносцировать вновь описанные таксономические группы - Аризона, Гафния, Провиденция, Эдвардсиелла, требующие дополнительных тестов, Способ громоздок и не обеспечивает быстроты процесса определения родовой, групповой и видовой принадлежности патогенных энтеробактерий.Целью изобретения является упрощение и ускорение процесса определения родовой, групповой и видовой принадлежности патогенных энтеробактерий.Это достигается тем, что в предлагаемом способе производят посев изучаемой культуры последовательно в различные по составу среды - первую, содержащую пептон, дрожжевой экстракт, поваренную соль, лактозу, саха- розу, мочевину и индикатор, затем после 4 - 5 час культивирования при 43 С выделяемые еде нс сораживающие лактозу или не разлагающие мочевину культут во вторую среду, содержащую в ое полужидкий питательный агар, слое пептон, дрожжевой экстракт, соль, тиосульфат натрия, лизин и и в третью среду, содержащую пепнную соль, дульцит, маннит и инпоследующим определением антиоения (о-антигены) культуры, сняй среды.емый способ осуществляется путем в комбинацию интегрированных ых) сред принципа последовательзового отбора (СИТО). Первая среда (для экспрессного опр ния в одной пробирке в течение 4 - 5 ч 43 С фсрмснтации лактозы, сахарозы и О ной активности). В среду входит; вода 100 мл; пето 0,6 г; поваренная соль 0,3 - 0,5 г, дрож экстракт 3,0 - 5,0 мл, лактоза н сахар 0,2 - 0,3 г 1,67 д-ны щелочной раствор 5 тимолового синего 0,2 - 0,3 мл; стерил при 1/2 атм 20 мин. После стерилизаци бавляют 3 - 4 мл 50,/О-ного водного (са рилизующегося) раствора мочевины и вают асептично в маленькие пробирки по О 0,5 мл.422769 Помещают врилизуют при 1в вертикальном Верхний слой. Вода Пептон Дрожжевой пробирки по 2,5 - 3,0 мл, стеатм 10 - 12 мин и охлаждаютположении; 100 мл 0,8 - 1,2 г2,0 - 3,0 мл экстракт Предмет изобретения Составитель О. Сливкина Техред Л. Богданова Корректор Т. Добровольская Редактор С. Быяихина Заказ 2308/14 Изд.713 Тираж 456 Подписи зе ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Сапунова, 2 Типография, пр,Вторая среда (для определения подвижности, декарбоксилирования лизина, образования индола и сероводорода).Среда состоит из двух слоев.Нижний слой,Питательный бульон 100 млАгар-агар 0,2 - 0,3 г Поваренная соль 0,3 - 0,5 г, тиосульфат натрия 0,02 - 0,06 (предпочтительно 0,05 ) г, лизин 1,0 г, 1,6%-ный щелочной раствор бромтимолового синего 0,2 - 0,4 мл. Стерилизуют при 1 - 2 атм 20 мии, разливают асептично вторым слоем по 2,0 мл в пробирки с застывшим полужидким агаром. Посев производят уколом до дна пробирки. Затем между пробкой и стенкой пробирки помешают реактивную бумажку, пропитанную 10%-ным водным раствором уксуснокислого свинца и высушенную в сушильном шкафу, После учета результатов на поверхность верхнего слоя наливают 0,2 - 0,3 мл реактива Ковача (парадиметиламидобензальдегид 5 г, амиловый или изоамиловый спирт 75 мл, концентрированная соляная кислота .20 мл) для определения индола.Третья среда (для определения ферментации дульцита и маннита и газообразования при ферментации этих углеводов, Эта же среда служит и для накопления биомассы для заключительной фазы идентификации - серо- логической).В среду входит: вода 100 мл, агар-агар 1,2 - 1,5 г, поваренная соль 0,5 г, пептон 1,0 - 1,5 г, маннит 0,08 - 0,1 г, дульцит 1,0 - 1,2 г, 1,6%-ный щелочной раствор бромтимолового синего 0,3 - 0,5 мл, Разливают в пробирки по 4 - 5 мл, скашивают по типу среды Ресселя (столбик и высокий скос). Посев производят штрихом по поверхности скоса и уколом в столбик,Способ заключается в следующем.Подозрительную колонию с элективно-дифференциальной среды вносят целиком в пер 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 вую среду, которую помещают в водяную баню при 43 С и в этой же бане - в термостат при 43 С. Через 4 - 5 час учитывают результат - пробирки с пожелтевшей и посиневшей средой исключают (для выявления энтеропатоге 1 пных кишечных палочек из пожелтевших пробирок можно сделать высев на сектор среды Эпдо). Из пробирок с неизменной или темно-зеленой окраской среды культуру высевают во вторую и третью среду, во второй пробирке помещают между пробкой и стенкой пробирки реактивную бумажку для выявления сероводорода и ставят обе пробирки в термостат при 37 С на 18 - 20 час, затем учитывают изменения в средах второй и третьей, ставят реакцию на индол во второй среде,На основании комбинации биохимических свойств определяют ориентировочную принадлежность изучаемой культуры к любой группе патогенных энтеробактерий. Культуры, отвечающие признакам патогенных энтеробактерий, испытывают в реакции агглютинации адсорбированными сыворотками соответственно биохимической характеристике. Способ идентификации патогенных энтеробактерий путем посева микроорганизмов в питательную среду и выращивания в ней, отл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения и ускорения процесса определения родовой, групповой и видовой принадежности патогенных энтеробактерий, производят посев изучаемой культуры последовательно в различные по составу среды - первую, содержащую пептон, дрожжевой экстракт, поваренную соль, лактозу, сахарозу, мочевину и индикатор, затем после 4 - 5 час культивирования при 43 С выделяемые на первой среде несбраживающие лактозу или сахарозу и не разлагающие моче- вину культуры высевают во вторую среду, содержащую в нижнем слое полужидкий питательный агар, а в верхнем слое - пептон, дрожжевой экстракт, поваренную соль, тиосульфат натрия, лизин и индикатор, и в третью среду, содержащую пептон, поваренную соль, дульцит, маннит и индикатор, с последующим определением антигенного строения (о-анти- гены) культуры, снятой с третьей среды.