Способ определения биологической активности химических препаратов

биб: 368308 О ПЪГС АЙ И Е ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советских Социалистических РеспубликК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Зависимое от авт. свидетельстваЗаявлено 01.Х 11,1970 ( 1495139/30-15 М. Кл. С 12 с 1/006 01 п 33/16 еламткрцтиЯнистров КомитетаобретеииИ Приор ите К 63:576.8:543.9(088,8 Опубликовано 26.1.1973. БюллетеньДата опубликования описания 9.1 Ъ.1973 при Совете ССАвторыизобретени 3. Гамбург, Л. М. ова и Е. ф. Высоцк аявите СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСК ХИМИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТАКТИВНОСТ присоединением заявкиПредлагаемое изобретение относится к способам,испытания химических препаратов на их биологическую активность. Кроме того, способ может быть применен для определения токсичности, антимитотической и антипроли ферационной активности химических препаратов для р а стительных клеток.Известен способ определения биологического действия ядохимикатов на растение. Недостатком этого способа является то, что об ак тивности химического препарата судят не непосредственно по изменению состояния и скорости роста растения, а по изменению количества микроорганизмов корневой микро- флоры. 15С целью быстрого и точного определения абсолютной и относительной биологической активности химических препаратов предлагается использовать суспензионные культуры клеток табака или сои. Для оценки токсично сти, антимитотической и антипролиферационной активности препаратов предлагается вводить в питательную среду ауксин (а в нафтилуксусную или 2,4-дихлорфеноксиуксусную кислоты), необходимый для нормального раз множения клеток.По предлагаемому способу активность препарата определяется непосредственно по его действию на растительные клетки. Для определения требуется 5 - 7 дней, одновременно зо может быть испытано от трех до восьми препаратов в пяти, шести концентрациях каждый. Это позволяет дать сравнительную оценку активности р азличных препаратов путем нахождения концентраций, необходимых для получения одинакового эффекта. Расход препарата на одно испытание не превышает 0,2 - 0,5 лгг. Средняя квадратпчная ошибка одного определения из пяти повторностей не превышает 5%,Для осуществления предлагаемого способа в пробирки размером 16;х,150 лтлт вносят по 0,5,цл водных растворов испытуемых препаратов в нескольких концентрациях и по 3,5 лгл суспензии клеток табака или сои, разбавлен. ной свежей средой Мурашпгеи Скуга в 10 раз Пробирки закрывают ватными пробками и помещают в наклонный вращающийся со скоростью 60 об/,вин барабан и затем культивируют 5 - 7 дней при 26 в темноте. По окончании срока культивации содержимое каждой пробирки переносят на стеклянный фильтр, среду отсасывают, а ткань взвешивают. При использовании ткани табака помимо определения веса необходим подсчет количества клеток, при работе с тканью сои этого не требуется. Если требуется оценить токсичность, антимитотическую или антипролиферативную активность, то одновременно с испытываемыми веществами в пробирки добавляется а-нафти368308 Предмет изобретения Составитель К. Гамбург Редактор В, Фельдман Техред Т. Курилко Корректоры: Л. Чуркина и В. ЖолудеваЗаказ б 69/12 Изд. М 210 Тираж 467 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва, Ж-З 5, Раушская наб д. 4 Я Типография, пр, Сапунова, 2 луксусная кислота 2 иг/г или 2,4 -дихлорфеноксиуксусная кислота 0,05 мг/л. Для определения антпмитотической активности ткань в процессе выращивания используется для подсчета митотического индекса стандартными цитологическими методами.На основании полученных результатов строится график, на оси абсцисс которого откладывается логарифм концентрации препарата, а на оси ординат вес ткани (соя) или количество клетой (табак). С помощью интерполяции находят концентрацию, обеспечивающую половину максимального эффекта, которая и служит мерой биологической активности. Для работы необходимо сохранение стерильности суспензии. Поэтому все растворы автоклавируются или стерилизуются фильтрованием, операции по закладке опыта проводятся в стерильном боксе,1, Способ определения биологической активности химических препаратов с использовани ем суспензионной культуры клеток растительного происхождения в качестве биологическг го теста, отличающийся тем, что, с целью повышения скорости и точности определения, в качестве суспензиовной культуры клеток рас тительного происхождения берут культуруклеток ткани табака,или сои.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что,с целью оценки токсичностК антимитотической и антипролиферационной активности химичес ких препаратов, в суспензионную культуруклеток табака,или сои в самом начале их культивирования добавляют вещества типа ауксинов, например а-нафтилуксусную и/или 2,4-дихлорфеноксиуксусную кислоты.