Способ получения антиостеобластической остеогенной сыворотки

Союз Соввтоиив Свциалиотичеокив РвопубливЗависимое от авт. свидетельства М М. Кл, А 611 с 23 л 02 явлено 12 11.1966 ( 1054884/34-16) с присоединением заявки оритет омитвт оо де зооретений и откр;гтирори Совете ггЛиниотроаСССР ДК 615,373(088 Опубликовано 26.1.1973. Бюллетень М 9 Дата опубликования описания 30,111.1 ст Авторыизобретени ажуг Ф. Батю явитель СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИОСТЕОБЛАСТИЧЕСКОИ ОСТЕОГЕННОЙ СЫВОРОТКИИзобретение относится к медицине, точнее к иммунологии.Известен способ получения сыгвороток путем ИММуНИЗацИИ КРОЛИКОВ ЭКСтрахтаМИ ТКаоНЕй с последующим забором крови и отделением сыворотии,Цель изобретения - получение антиостеобластической остеотенной сыворотки, сп мулирующей заживание поврежденной кости.Для этого животных иммунизируют волносолевым экстрактом из гомогепата очага окостенения трубчатой кости крупного рогатого скота. Экстракт вводят внутривенно в дозе 0,5 - 0,1 - 1,5 - 2,0 лл с игнтервалом в 4 - 5 дгней.П р и м е р. Исходный материал для получения антигена - живой плод, крупного рогатого скота, трубчатые кости которого содержат очапп окостенения - острым скальпелем измельчают, промывают стерильным физиологическим раствором, переносят в гомогенизатор или стерильную ступку со стерильным промытым песком и тщательно растирают. В гомогенизатор добавляют пятикратное количество 0,85 оо-ного физиологического раствора хлористого натрия, гомогенизируют 5 мин при 5000 обмин останавливают на 10 мин и сггова включают на 5 мин. В той же лропорции физиологический раствор добавляют в ступку после растирания ткани. После гомогенизации гомогенат переносят в стерильную колбу и помещают в рефрггжсратор при 2 - 4 С иа 18 - 20 час. Суопензию гпосле экстр агирования в холодильнике взбалтывают 5 и центрнфугируют 5 мин при 3000 об,лгин.Прозрачную часть анпггена сливают в стерильныи фильтр Зейца. Полученный филь- трат - антиген проверяют иа стерильностьпутем посева на питательные среды.10 Антиген ВВОЛЯт к 1 голикам Внутривег;ИО(В ушную вену), начиная с 1 лг.т и увеличивая последующую дозу на 0,5 мл. Всего на цикл им.;гунпзации треоуется 4 ипьекции антигена с промежутками в 4 - 5 дней.15 Пробное кровопускание лля определениятитра сыворотки производят через 3 - 4 лня после последнего введения антигена. Если титр антител не нике 1: 256, то у кроликов - пролуцентов берут по 40 в -15,11 л крови, а че рез месяц начинают, второй цикл иммунизации(реглммунизация), соблюдая те же условия, что и в первом цикле. При титре сыворотки 1: 256 и выше, после репммунизации кровопускание производят двухкратно не позже 7 дней 25 после последней иггъекции антигеиа, В первыйдень берут 50 - 60 мл крови и полкожво вводят кролггкам подогретый до 37 С физиологический раствор в лозе, соответствугощей количеству взятой крови. Второе тотальное кро- ЗО вопускание производят через 5 дней после пер367867 Сел авнгепн С. 1 ценеыаРедактор Г. Иыченкова Тскред 1. Борисова Корректор Л. Новожилова Заказ 668(12вд. М 211 Тираж 467 ПодписноеЦ 11111111 И Ко штева но дела,н изобретений и открьпенй нри Совете Министров СССР1 осква, 7 К.З 5, Раушская наб., д. 4/5 Типографи, пр. Сапунова, 2 вого путем вскрытия сонной артерии. Забор крови производят в стерильные цилиндры. Цилиндры с кровью после кровопускания ставят в термостат с температурой 37" С на 30 мин, затем оставляют при комнатной тех 1 пературе на 18 - 24 час, после чего сыворотку декантируют с помощью сифона в колбы емкостью 200 мл, Сыворотку отстаивают 48 час при 2 - 6 С, отсасывают большой стерильной пипеткой Мора и фильтруют через асбестовый фильтр. Для консервации к получаемой сыворотке добавляют мертиолат 1: 5000, После фильтрации производят контроль сыворотки на стерильность, токсичность и активность.Для проверки стерильности сыворотку высевают на питальные среды и выдержкивают 8 дней в термостате при 37 С.Проверку токсичности производят на морских свинках и белых мышах. Пяти мышам весом 15 - 20 г подкожно вводят по 1 мл сыворотки, трем иорским свинкам весом 350 г вводят подкожно по 10 мл. В течение 7 дней свинки должны оставаться здоровыми и не иметь местной реакции к концу наблюдения. Мыши должны оставаться здоровыми в течение 4 - 5 суток наблюдения.Сыворотка должна быть стерильной, прозрачной, строго специфичной с достаточно высоким титром (приблизительно 1: 256 по РСК) и нетоксичной,Для оценки активности полученной сыворотки против репаративного остеогенеза п л.о ставят 11 серий опытов на 120 (собак 21, кроликов 99) животных различного возраста.Поставлены опыты с полными закрытыми 5 переломами трубчатых костей и опыты с резекцией участка диафиза трубчатой кости вместе с надкостницей (5 - 10 им).Проведенные опыты показывают, что малые дозы (0,1 - 0,2 ил) антиостеобластической 10 сыворотки стимулируют остеогенез и ускоряют заживле 1 ние переломов костей. Напротив, применение больших доз (0,6 мл) этой сыворотки, особенно у молодых животных, приводит к угнетению регенеративного процесса 15 в кости на продолжительное время. Предмет из обретения1. Способ получения антиостеобластическойостеогенной сыворотки путем иммунизации ла боратор 1 ных животных экстрактом ткани с последующим забором крови и отделением сыворотки, отличающийся тем, что, с целью получения антиостеобластической остеогенной сыворотки, стимулирующей заживление по врежденной кости, животных иммунизируютводно-солевым экстрактом из гомогената очага окостенения трубчатой кости крупного рогатого окота.2, Способ по п. 1, отличающийся тем, что 30 экстракт вводят животным внутривенно вдозе0,5 - 0,1 - 1,5 - 2,0 мл с интервалом в 4 - 5 дней.