Способ приготовления диагностикума для определения антигенов в реакции коагглютинации

(5)5 6 01 й 33/53 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ТЕЛЬСТВУ ТОРСКОМУ С Целью и ние чувстви Цель до билизацией лококка об мощностью трижды отм ном раствор проводят се Примности стафи ют ул мин и помо УЗДН ума 10 ококка тразву ри 22 к щи уль ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР(71) Научно-исследовательский институвакцин и сывороток им. И,И.МечниковЦентра микробиологии и иммунобиотехнологии АМН СССР(54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ В РЕА,(ЦИИ КОАГГЛЮТИНАЦИИ(57) Изобретение относится к медицине, аименно к диагностике инфекционных забо Изобретение относится к области медицинской микробиологии и может быть использовано при изготовлении диагностикумов для реакции коагглютинации. зобретения является повышеельности способа.тигается тем, что перед сенсификсированные клетки стафирабатывают ультразвуком 100 Вт/см не более 1 мин, ывают в барбитуратном буфере рН 8,6 и в таком же растворе нсибилизацию антителами.е р 1, Для приготовления диаг-фиксированную суспензиюштамм СОИ/Ай 1 подвергаковой обработке в течение 1 Гц и мощности 100 Вт/см при тразвукового дезинтегратора робные клетки трижды отмыва 2леваний. Целью изобретения является повышение чувствительности диагностикума, Суспензию клеток золотистого стафилококка штамма СОччАИ 1 после фиксации формалином подвергают обработке ультразвуком мощностью 100 Вт/см не более 1 мин, отмывают их барбитуратным буферным раствором рН 8.6 и в нем не проводят сенсибилизацию антителами. Интенсивность реакции коагглютинации оценивают общепринятым методом(на четы рех крестной системе) при отсутствии реакции с контрольным реагентом, Изобретение позволяет повысить чувствительность диагностикума в 16 раз,ют барбитуратным буферным раствором рН 8,6 и ресуспендируют до 10 концентрации в том же растворе, Сенсибилизацию прова- - в дят добавляя 0,1 мл омнисыворотки (содержит антитела к капсульным полисахаридам О пневмококка) к 1 мл 100 суспензии клеток , в барбитуратном буферном растворе рН 8,6,Смесь инкубируют 1 час при 37"С при периодическом встряхивании. Затем микробные клетки отделяют центрифугированием и ресуспендируют в 1 мл барбитуратного буферного раствора. Контрольный диагностикум изготовлен тем же способом, ис- а пользуя для сенсибилизации нормальную кроличью сыворотку.На предметное стекло помещают две капли стерильного физраствора, в котором суспендируют бактериальный материал, Затем к исследуемому материалу добавляют равное количество заранее приготовленного коагглютинационного диагностикума; к1762242 Формула изобретения20 Составитель П.БонарцевТехред М.Моргентал Корректор М,Максимишинец Редактор Заказ 3257 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035. Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 первой капле - диагностикум на основе омнисыворотки, ко второй - контрольный див гности кум на основе неиммунной сыворотки кролика.Активность реакции оценивали определением минимальной концентрации капсульного полисахарида пневмококка вызвавшей выраженную агглютинацию с образованием видимых невооруженным глазом хлопьев и просветлением реакцион. ной смеси при отсутствии реакции с контрольным диагностикумом.Установлено, что диагностикум реагирует с капсульным полисахаридом пневмококка в концентрации 0,03 мкг/мл, Диагностикум, приготовленный по способу- прототипу, реагирует с тем же антигеном в концентрации 0,48 мкгl мл.П р и м е р 2, Коагглютинационный реагент для выявления микроорганизмов НДЕМОРНП ОЗ аЕ ОЕИгДЕ.. Приготовление реагентов проводят по предложенному методу(пример 1) с использованием сыворотки К.Н.НЕЕ.ОЕМ 2 АЕ.В качестве тест-антигена был использован препарат микробных клеток гемофильной палочки с известным содержанием поли рибоэилрибитолфосфэта.Диагностикум, приготовленный по описанной нами методике, реагирует с тест-антигеном в концентрации 0,12 мкг/мл.П р и м е р 3, Коагглютинационный реагент для выявления микроорганизмов В.РЕВТОЗЗЗ. Реагент готовят по предложенному методу (пример 1) с использованием агглютинирующей коклюшной сыворотки.Определение чувствительности диагно стикума проводят описанным ранее методом, используя в качестве тест-антигена препаратмикробных клеток В.РЕВТОЗЗЗс известным содержанием липополисахарида, Липополисахарид В.РЕЙТОЗЯЗ опре деляется в концентрации 39 мкг/мл.Положительный эффект способа заключается в том, что чувствительность повышается в 16 раз,Данный способ может быть использо ван для изготовления коагглютинационныхдиагностикумов для выявления и других видов микроорганизмов. Способ приготовления диагностикумадля определения антигенов в реакции коагглютинации, включающий синсибилизацию фиксированных клеток золотистого стафи лококка штамма Совап 1 препаратом антител,отл ича ющийся тем, что, с целью повышения чувствительности диагностикума, перед сенсибилиэацией фиксированные клетки стафилококка обрабатывают ультра звуком мощностью 100 Вт/см не более 1мин, трижды отмывают в барбитуратном буферном растворе рН 8,6 и в таком же растворе проводят сенсибилизацию антителами.