Способ определения активности лектинов в почве

СВОЗ СОВЕТСНИХСО 1 ИАЛИСТИЧЕСНРЕСПУБЛИК 51)5 с 01 11 3 У 2 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕпО изОБРетениям и ОтнРцтиПРИ П(НТ СССР АНКЕ ЗСБРЕ 7 ЕИКЯДЕТЕПЬСТВУ ТОР СКОМУ определения, цля этого предват ель но определя ют а кт уал ьную или обменную кислотность почвы общепринятыми методами. Затем готовят фосфатную .буферную смесь с величиной РН,равной РН почвенной вытяжки (соднойили солевой), Путем дробного этанольного фракционирования из образцов почвы вьщеляют лектины и определяют их активность, проводя реакцию геиагглютинации в иммунологических планшетах в течение 1 ч пр",о25 С. Визуальную оценку гемагглютинируей активности прояорят попятибальной шкале, Преимуществаспособа заключаются в более высокой аЯдостоверности результатов определения активности лектинов в почве.1 табл,озяйств в, В.,Ч.В,Н,Сам088.8)Панасю 1 доЕ.Н, ; Еи ВНОСТ ОПРЕ.1 ЕЛЕНИЙОЧВЕение относижет быть исбиохимичесссов в поч ввышение дос ЛЕКТИНОВ(57) Изо ведению при изуч я к почво ользовано их и хими и мо ени роц Цель изоб- Оверности рет ения - по ной вьггяжки (вог 1 но тем дробного этано вания из образцов тины и определяют этого в лунки план гических реакций в приготовленного бу бретение относится к почвов может быть использовано при изучении биохимических и химических процессов в почве,Цель изобретения - и ие до. стоверности определения.П р и м е р. Актуальную и обменную кислотность почвы определяют общепринятыми методами. для этого навеску почвы заливают соответственно дистиллированной водой или 1 Н раствором КС 1 в соотношении 1:2,5. После 5"минутного вс гряхивания суспензии дают отстоять.я и в ей с": лелеет рН потенциометрическим методом. Затем готовится фосфатная буферная смесь с величиной рН равной реакции почвеновышен атных послед ктинов, доба суспензии т в в каждую л и 25 С. Визу ютинирусщей а 5-балльной ш опреп е-, ени я поее важнову ий 2 ь-но роцит 1 чп маггл ка ив остгл лект знание актуальнойтности почвы, поов ннои кисл или о(9) СПОСОБ й или солевой), Пульного фракциониропочвы выделяют леких активность. г 1 ля шета для иммунолоносят по 0,05 мл фера делают серию овательных разведевляют по 0,05 мл рижды отмытых эритунку и инкубируют альная оценка гективности проеодит"304цае, да1: 0,01, сравнива мые результаты имеют существенные отличия и являются достоверными, Во всех изучаемых вариантах активность лектинов, спределяемая с учетом кислотности почвы, существенно выше по сравнению с прототипом (Т т) с 0,01). Гемагглютинирующая способйост ь лектинов по прототипу низкая и практически не изменяется по вариантам (2,0- 3,5 ед.).При оценке по преплагаемому способу их активность меняется в широких Пределах (5,5-11,0 еа. в буфере с рН волной вытяжки, 7,5-11,5 еа. в буфере с рН солевой вытяжки), что указывает на зависимость от почвенных характеристик.Все это свидетельствует о более высокой аостоверности предлагаемого способа по сравнению с прототипом.Данный способ может быть легко реализован в практической работе, так как необходимые цля его осуществления реактивы и оборудование являются дешевыми и доступными. Активность по преалагэемому способу Активностьпо прототипу (буФер с рН7,4) Образцы почвы,взятые под: 0,05 Буфео срН воцнойвытяжки БуФер с рркт рН солевойвытяжки Залежью ,а ха 1-.,Й с вс клоЙОзимой пшеницей 10,90 4,60 9,3 4,60 8,57 4,60 12,46 4 60 9,0 10,90 9,0 5,5 5,45 а,О 8,В 10,12 7,11,0 11,68 11,2,0 20 курузои 3 17075скольку она является важнейшим фактором внешней срелы, влияющим на всебиохимические процессы в почве,Путем дробного этанольного Фракционирования иэ образцов почвы подзалежью и различными сельскохозяйственными культурами выцеляют лектины(Фракция, выпадающая в осацок при76-ном насыщении эталоном по объему)10и определяют их активность,Реакцию гемагглютинэции проводятв иммунологицеских планшетах. По прототипу готовят фосфатный буфер рИ 7,4,По предлагаемому способу рН буфера 5соответствует знацению актуальной илиобменной кислотности исследуемых образцов почвы, которая определяетсяпотенциометрически, В лунки планшетапри помощи полуавтоматического дозатора вносят по 0,05 мл соответствующего буфера в смеси с физиологическим раствором (1:1). Лектины последовательно двукратно разводят в восьми,лунках рля каждого из вариантов, После добавления по 0,05 мл 22-ной суспензии трижды отмытых эритроцитов иинкубации 1 ч при 25 С интенсивностьреакции гемагглютинации оценивали по5-балльной шкале. 30В таблице представлены экспериментальные данные о эритроагглютинирующей активности лектинов в почве (вусловных единицах) в зависимости отрН буфера, 35 Математическую обработку провоаили методом оценки существенности разности средних по С-"ритерию Стьюаента.ПРи этом еоРРавное пРи 1-ном 40 уровне существенности 4,60, сравнивалось с 1 уакт полученным при обработке экспериментальных данных В том слуФормула изобретения/Способ определения активности лектинов в почве, включающий их дробное этанольное фракционирование из почвы и определение эритроагглютинируоцей способности в фосфатном буфере, о тл и ч а ю щ и й с я тем цто, с целью повышения достоверности определения, предварительно определяют актуальную или обменную кислотность почвенной вытяжки, а опрецеление эритроагглютинирующей способности ведут в Фосфатном буФере при рН, равной рН почвенной вытяжки,1