Способ подготовки тканей полукружных каналов вестибулярного аппарата для изучения в сканирующем электронном микроскопе

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 168 О А 9 я)5 6 01 й 33/4 ЕТЕНИ ТЕЛЬСТ К АВТОРСКОМУ Изо цины, а гии вест Цел ности с подгото ющем э Споласти меди ой морфоло ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗ(56) Винников Я.А. и др. Исследование отолитовой мембраны утрикулюса морскойсвинки, - Эволюц. биохимии и физиологии,1981, М 5, с. 474 - 481,(54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ТКАНЕЙ ПОЛУКРУЖНЫХ КАНАЛОВ ВЕСТИБУЛЯРНОГОАППАРАТАДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ В СКАНИРУЮЩЕМ ЭЛЕКТРОННОМ МИКРОСКОПЕ(57) Изобретение относится к области медицины, в частности гистологии, а более конкбретение относится к обименно к функциональнибулярного аппарата,ь изобретения - сохранение целосттруктур полукружных каналов привке их для исследования в сканирулектронном микроскопе.соб реализуется следующим обраНаркотиэированное животное перед декапитацией транскардиально перфузируют вначале физиологическим раствором при 36 - 37 С, а затем холодным (4 С) 1,5 ф глютаральдегидом на фосфатном буфере с добавлением 50 сахароэы. Время перфузии 40 - 45 мин. После декапитации выделяютпирамиды височных костей, проводят постфиксацию в 10 растворе четырехокиси осмия и дегидратацию в спиртах еосходяретно - к функциональной морфологии вестибулярного аппарата, Цель изобретения - сохранение активности полукружных каналов при подготовке их для исследования в сканирующем электронном микроскопе. Укаэанная цель достигается тем, что наркотизироеанное животное перед декапитацией в течение 40 - 45 мин транскардиально перфуэируют вначале физиологическим раствором с добавлением гепарина, а затем 1,5-ным раствором глютаральдегида с добавлением 5 сахарозы на фосфатном буфере (0,1 моль/л, рН 7,4) и извлекают структуру внутреннего уха лишь после по- стфиксации и обезвоживания пирамид височных костей,щеи концентрации и лишь после обезвоживания извлекают полукружные каналы иэ полости вестибулярного лабиринта. Сушат, напыляют золотом и изучают в сканирующем электронном микроскопе.П р и м е р. Морскую свинку массой 320 г под нембуталовым наркозом из расчета 40 мг/кг транскардиально перфуэируют вначале физиологическим раствором с добавлением гепарина 25000 ед./л е объеме 300 мл при 37 С, а затем 1,50 глютаральдегидом на фосфатном буфере рН 7,4 с добавлением 50/ сахарозы (4 С), Время перфуэии 45 мин. После декапитации выделяют пирамиды височных костей, перфорируют преддверие и круглое окно, постфиксируют в 1 растворе осмиевой кислоты на фосфатном буфере - 1 ч, обезеожиеают в спиртах восходящей концентрации от 30 - 100. После1681250 Формула изобретения Составитель А. ДревальРедактор Т. Пилипенко Техред М.Моргентал Корректор Н. Король Заказ 3310 Тираж 385 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 дегидротации извлекают полукружные каналы иэ вестибулярного лабиринта, монтируют на предметном столике, сушат вкамере при критической точке в СОг, напыляют золотом и изучают в сканирующем 5электронном микроскопе,Предлагаемый способ приготовленияпрепаратов оказывается продуктивным нетолько при анализе тонких структур полукружных каналов, но и позволяет изучить 10особенности рельефа тела утрикулюса, области перехода его в полукружные каналы,исследовать рельеф и распределение отоконий на утрикулярных и саккулярных мембранах, позволяет получить нативную 15структуру базилярной мембраны и волокнистых клеток слухового анализатора - улитки, выявить стереологические особенностислуховых косточек - стремячка и др. Способ подготовки тканей полукружных каналов вестибулярного аппарата для изучения в сканирующем электронном микроскопе, включающий извлечение исследуемого материала, фиксацию, постфиксацию, обезвоживание, сушку и напыление препаратов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью сохранения активности исследуемого материала, производят предварительно перед декапитацией фиксацию всех тканей животного, в том числе структур внутреннего уха, путем транскардиальной перфузии гепариниэированным физиологическим раствором, а затем глютаральдегидом и извлекают структуры внутреннего уха лишь после постфиксацйи и обезвоживания пирамид височных костей.