Способ диагностики атопической бронхиальной астмы

/28 з 6 0 АНИЕ БРЕТ ЛЬСТВ нологии СО н и И,Н.Нае клеточных бронхиаль,М 4,с,АТОПИЧЕ ва ГОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР АВТ Р КОМУ СВИ(71) Институт клинической иммуАМН СССР(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИСКОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЬ Изобретение относится к медицине, в частности к аллергологии, и может быть использовано для диагностики атопической (неинфекцион но-аллергической) бронхиальной астмы, не осложненной бронхолегочной инфекцией, и инфекционно-зависимых неспецифических бронхолегочных заболеваний, включающий хронический неаллергический бронхит.Целью изобретения является повышение точности способа за счет дифференциальной диагностики от неспецифических заболеваний.Способ осуществляется следующим образом.Больных с бронхоспатическим синдромом в анамнезе обследуют в период клинической ремиссии. Забирают 2-3 мл венозной крови в пробирку с антикоагулянтом и 0,3 мл в сухую пробирку для получения сыворотки. Из крови выделяют мононуклеарные клетки в градиенте плотности и отмыют общепринятым способом, Готовят(57) Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии. Целью является повышение точности способа. Цель достигается тем, что в крови дополнительно определяют содержание кортизола или тиреоидстимулирующего гормона. Диагностику заболевания проводят по системе расположения точек этих показателей в системе координат, Способ позволяет отдифференцировать атопическую бронхиальную астму от неспецифических заболеваний легких,суспенэию клеток в среде 199 с концентрацией (10-12) 10 кл/мл, окрашивают(конечная концентрация красителя 25 мкм); перемешивают и экспонируют при комнатной температуре в течение 5 мин. Затем каплю суспензии наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом, сверху наносят каплю иммерсионного масла и помещают под объектив микроскопа, Измерение интенсивности флуоресценции красителя в лимфоцитах проводят на люминесцентном микроскопе (например. серии ЛЮМАМ) с фотометрической насадкой. Максимум спектра возбуждения флуоресценции в лимфоцитах 400 - 420 нм, флуоресценции - 520-540 нм. Измеряют интенсивность флуоресценции 50 - 100 лимфоцитов, рассчитывают среднюю величину свечения для данного больного,В сыворотке крови больных параллельно определяют концентрацию кортизола или тиреоидстимулированного гормона или оба вместе радиоиммунным методом..Заказ 2996 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета га изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж-З 5, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина. 101 В системе координа откладывают ве. личины измеренных параметров, наносят точку пересечения на плоскость, Если эта точка лежит ниже заранее обозначенной раницы форм бронхоспзстического синд рома, то диагностируют атопическую бронхиальную астму, а если точка лежит выше границы, то - неспецифическое заболевание.Границу разделе ия форм бронхоспастического синдрома в указанной системе координат строят перед началом применения способа и используют во всей посгедуащей диагностике при неизменном режиме работы приборов,П р и м е р 1. Мононуклеарные клетки выделяют из гепаринизированной (10 ед,/мл) венозной крови больного центрифугированием в градиенте плотности фиколла-верографина при 400 9 в течение 40 мин, затем отмывают трижды в физиологическом растворе с фосфатным буфером (рН 7,4) и один раз в среде 199 при 200 9 по 5-7 мин, Клетки ресуспендируют в среде 199 до нужной концентрации. В стеклянной пробирке к 0,1 мл суспензии добавляют микрошприцом 1 мкл 2,5 м 11 раствора красителя в диметилфо рмамиде.Измерение интенсивности его флуоресценции в лимфоцитах проводят на люм".нес центном микроскопе, Освещение обьекта осуществляют сверху через опэк-иллюминатор и объектив.В качестве стандарта ломинесценции используют эталонную флуоресцирующую пластинку из уранового стекла ЖС 19 толщиной 0,03 мм, входящую в комплект насадки. Эталонную пластинку ставят под объектив,В сыворотке крови концентрация корти- Эола или тиреоидстимулирующего гормона определяют радиоиммунным методом. С помощью калиброво ной кривой, построенной на основании радиоактивности стандартов, рассчитывают значения концентрации гормонов в исследуемых пробах,Для кортизола граница проходит через осьординат в точке, равной 25 мВ, и под углом11 к горизонтальной оси, для тиреоидсти 5 мулирующего гормона - в точке, равной41 мВ, под углом З,Клинический диагноз: бронхиальная астма инфекционного генеза 1 стадии легкоготечения, фаза ремиссии, сенсибилизация к10 аллергену домашней пыли.П р и м е р 2, Больной, 22 г, жалобы наприступы удушья с затрудненным выдохом,кашель с небольшим количеством трудноот- .деляемой мокроты. Более 2 г, клинико-анам 15 нестические данные не позволяли уточнитьдиагноз. При исследовании функции внешнего дыхания выявлена положительная проба с бронхолитиком.При измерении свечение красителя в20 лимфоцитах равно 61,4 мВ, концентрациякортизола в сыворотке 540 нМ/л, гормона1,6 мМЕ/л, Точки пересечения этих координат на плоскостях для соответствующих гормонов расположены выше принятых линий25 деления, следовательно, у больного предполагаюг наличие неспецифического заболевания.Таким образом, предлагаемый способпозволяет выявить хроническую бронхиаль 30 ную инфекцию у больного атопическогобронхиальной астмой, что существенно влияет на дальнейшую тактику лечения,Формула изобретения 35 Способ диагностики атопической бронхиальной астмы путем флуоресцентного исследования лимфоцитов крови, окрашенных З-метоксибензатроном, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности 40 способа, в крови дополнительно определяют содержание кортизола или тиреоидстимулирующего гормона и при значениях кортизола 500 1,7 нМ/л или тиреоидстимулирующего гормона 2,5+ 0,15 мМЕ/л диаг носцируют заболевание,