Способ разделения субчастиц 70 s рибосом

Номер патента: 1601120

Авторы: Агаларов, Юсупов

ZIP архив

Текст

15 их нативности. Второй этап предусматривает концентрацию и очистку фракции 50 Б субчастиц при повторной хроматографии на той же колонке, но в, других ионных условиях, которые оп ределяют адсорбцию 508 субчастиц на1;, носителе. Способ позволяет получить807-ный выход продукта - препаратовнативных 30 и 508 субчастиц 708 1 Орибосом.П р и м е р. 708 рибосомы,(в количестве 150-200 мг), находящиесяв буфере содержащем 50 мМ .трис-НС 1(рН 8,0), 500 мМ цитрата натрия,300 мМ МКС 1 , 1 мМ ДТТ, наносят наколонку (6 = 2,5 см, с 7 = 60 мл)сгидрофобной смолой бутил-Тоеперл 650 Б,уравновешенной этим же буфером, Далееколонку промываютстартовым буФером 20,до тех пор; пока значение оптическойплотности регистрируемого материалане выходило на плато (близкое к базовой линии). Врезультате этого рибо,сомные 308 субчастицы, отличающиеся 25по гидрофобным свойствам от 508субчастиц, в основном адсорбировались на колонке, а последние оказывались в промывных водах. Далее 308субчастицы элюируют с колонки разбавленным в 5 раз стартовым буфером. Ак промывным водам, содержащим восновном 508 субчастицы (около 903),, добавляют сухой (МН) БОдо концентрации 0,5 М, при этом увеличив кон 35центрацию М 8 С 1 до 0,5 М, и наносятна ту же колонку, уравновешеннуюбуфером, содержащим 50 мМ трис-НС 1(рН 7,5), 1 М (МН) БО, 50 мМ МяС 1,150 мМ МНС,1, 1 мМ ДТТ. Элюцию 508субчастиц проводят обратным градиентом сульфата аммония (0,8-0,25 М) натом же буфере.,Фракции основногопика оптической плотности, соответствующие 508 субчастицам, собирались. 45Для успешного осуществления предлагаемого способа необходимо строгособлюдать следующие параметры: концентрации солей цитрата натрия,хлористого магния и сульфата аммония;допустимый интервал температурш 4506 СТаким образом, предлагаемый способобеспечивает сохранение нативностиконечных продуктов - 30 и 50 Б рибо 55 сомных субчастиц и увеличение их выхода до 802. Использование для реализации данного метода стандартного хроматографического оборудования су" щественно удешевляет и облегчает по" лучение рибосомных субчастиц в нативном состоянии по сравнению с известным способом их получения - центрифугированием в градиенте концентра" ции сахарозы. Кроме того, использование предлагаемого способа позволяет снять ограничения и в количестве раз" деляемого материала, что достигается . увеличением объема колонки, например 300 мм новителя достаточно для хроматографии 1 г 708 рибосом. Все перечисленное позволяет охарактеризировать предлагаемый способ как простой, экономичный и высокоэффективный.Предлагаемый способ целесообразно использовать в молекулярно-биологических исследованиях и при решении задач прикладной биохимии для крупномасштабного выделения рибосомных,субчастиц. Предлагемый способ может также найти применение и в области биотехнологии для биосинтеза биологи- ческих препаратов белковой природы различного назначенияФормула изобретенияСпособ разделения субчастиц 70 Брибосом, включающий хроматографию нагидрофобном носителе, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью сохране"ния нативности субчастиц и повышенияих выхода, в качестве гидрофобногоносителя используют бутил-Тоеперл 6508,а хроматографическое разделениеосуществляют в 2 этапа - сначала через колонку пропускают рибосомы вбуферном растворе, содержащем цитратИа в концентрации 500 мМоль и МяС 1в концентрации 300 мМоль и элюируютадсорбированные 308- субчастицы темже буферным раствором, разбавленнымв 5 раз, прошедший через колонкураствор подвергают повторному хроматографированию в присутствии 150 мМольМ 8 С 1 и 1 моль сульфата аммония иэлюируют адсорбированные на колонке508-субчастицы обратным градиентомконцентрации сульфата аммония,

Смотреть

Заявка

4402254, 04.04.1988

ИНСТИТУТ БЕЛКА АН СССР

АГАЛАРОВ СУЛТАН ЧИНГИЗОВИЧ, ЮСУПОВ МАРАТ МИРАТОВИЧ

МПК / Метки

МПК: C07K 1/16

Метки: разделения, рибосом, субчастиц

Опубликовано: 23.10.1990

Код ссылки

<a href="https://patents.su/2-1601120-sposob-razdeleniya-subchastic-70-s-ribosom.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ разделения субчастиц 70 s рибосом</a>

Похожие патенты