Способ окраски полутонких аралдитных срезов

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИРЕСПУБЛИН 09) 111 048вательский инстиой медицины АМН ектронная микроая школа, 1984,ОНКИХ АРАЛ эт ится к ме дицине истоло г тся выявл ю изобретения явл ких клеточных и т евыха светоние икроско морф овнях,м е р. Проводится исследование кусо терии больного Н, ремя операции аор ирования. Немедле сочек фиксируют в фиксаторе Карновс к а корокое й а и получено-коронарво нно послемодифици" кого,содерацию форида (2 и ,1 М како- добавлением трации, в е трехкратго шуятия анном ОСУДАРСТВЕННЫг 1 НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГННТ СССР(21) 4245012/28-14(57) Изобретение о Изобретение относитсяожет быть использовано труктур для исследовани птическом и электронножащем половинную концен мальдегида к глютаральд 2,57. соответственно) на дипатном буфере рН 7,4 сахарозы до 0,15 М конц течение 2 ч при 4 С, По цине и может быть использовано в гистологии. Целью изобретения является выявление тонких клеточных и тканевых структур для исследования на светооптическом и электронио-микроскопическом уровнях, Способ окраски полутонких аралдитных средств заключа" ется в использовании комплексного красителя, содержащего метиленовый синий, азур 11, спирт, глицерин,этиловый спирт, дистиллированную воду с последующей для ференцировкой в растворе маленковой кислоты в 5 ОХ-номаноле,ной промывки образца в 0,1 М какоди-, латном буфере рН 7,4 с 0,15 М саха- Е розой при 4 С в течение 0,5 ч выполняют постфиксацию 13"ным раствором четырехокиси осмия на том же буфере с сахарозой 2 ч при 4 С.Дегидратацию в спиртах и окиси пропилена, заключение в аралдит выполняют общепринятым способом, Полу- тонкие и ультратонкие срезы образцовполучают при резке блоков на ультра- томе, Полутонкие срезы окрашивают по предлагаемому способу, ультратонкие срезы после нанесения на сетки контрастируют цитратом свинца по Рейнольдсу и насыщенным раствором маейуранилацетата в 707-ном спирте, Просмотр и фотографирование полутонких срезов проводят на установке Ахоша 1 (фирма Ор 1 оп, ФРГ), ультра- тонких - на трансмиссионном электрон1532839 микроскопическое исследование параллельных ультратонких срезов, котороеподтвердило присутствие промежуточных клеточных форм плазмоцитарногоряда и зрелых плазматических клеток,выявило фрагментацию и лизис коллаФгеновых и эластических волокон в местах скопления этих клеток в бляшке,установило наличие лимфоцитарно-макрофагальных и лимфоцитарно-гладкомышечных контактов, Все эти ультраструктурные изменения дополняют иподтверждают диагноз, поставленныйбольному на основании изучения полу"тонких аралдитных срезов, окрашенныхпо предлагаемому способу, В соответствии с уточненным клииико-морфологическим диагнозом больному в послеоперационном периоде рекомендованыиммуномодуляторы,Формула из обретения Составитель А.ЧирковТехред М.,Цидык Редактор Т,Парфенова Корректор М.Шароши Заказ 8092/49 Тираж 789 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб. д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 ном микросКопе ЕМВ при ускоряю 1 ем напряжении 75 кВ,Полутонкие срезы окрашивают 30 св растворе красителя следующего сос 5тава, мас.7.:Метиленовый синий 0,2Толуидиновый синий 0,2Азур 11 0,2Бикарбонат натрия 3,0Глицерин 20,0Этиловый спирт 30,0Дистиллированнаявода 46,4и дифференцируют 1 О"15 с (или до мо" 15мента отхождения голубого облачка)0,2%-ным раствором малеиновой кислоты в 503-ном этаноле,Результаты окрашивания, Микроскопическое исследование окрашенных полутонких срезов показало, что биоп, тат коронарной артерии представляетсобой липидно-фиброзную бляшку, Цитоплазма основных клеточных элемен"тов бляшки - пенистых клеток - приобретает голубой цвет, ядро - синий,ядрьппки и хроматин ядра - темно-си"ний. На фоне голубой цитоплазмы отчетливо выделяются крупные серо-коричневые липидные капли, мелкие си" 30не-зеленые липидные вакуоли, темнокрасные лизосомы. Кроме пенистых клеток хорошо видны сохранившиеся эн"дотелиальные и гладкомышечные клетки, бледно-голубые кристаллы холестерина в центральной зоне бляшки, мета 35хромазия межуточного вещества,связан ная, по-видимому, с накоплением кислых гликозаминогликанов. В бляшкеприсутствует большое число средних40и малых лимфоцитов, а также клетокплазмоцитарного ряда, что не является частой находкой в атеросклеротических поражениях, Обнаруженныеособенности бляшки могут свидетель- ,45ствовать об аутоиммунном компоненте в патогейезе атеросклероза у дан"ного больного. Для уточнения этогопредположения проводится электронно-Способ окраски полутонких аралдитных срезов путем их обработки,красителем, содержащим раствор толуидинового синего в щелочной среде, с последующей дифференцировкой, о т - л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью выявления тонких клеточных и тканевых структур для исследования на светооптическом и электронно-микроскопическом уровнях, в состав красителя дополнительно введены метиленовый синий, азур 11, этиловый спирт; бикарбонат натрия и глицерин при следуюцем соотношении компонентов, мас,7.:Метиленовый синий 0,1-0,2 Толуидиновый синий 0,.1-0,2 Азур 11 0,1-0,2 Бикарбонат натрия 2,5-3,0 Глицерин 10-20 Этиловый спирт 25-30 Дистиллированная вода Остальное а последующее диФференцирование проводят 0,1 - 0,23-ным раствором малеи-, новой кислоты в 503-ном этаноле,