Способ получения реагента r для тестирования компонента с комплемента человека

(рг г, се..гП ОБРЕТЕЕЛЬСТВУ ОПИСАНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ВТОРСКОМУ СИИ(71) Институт прикладной молекулярнойбиологии и Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливаниякрови(56) Козлов Л. В, и др, Модифицированные методы определения функциональнойактивности факторов комплемента Сг, Сз, С 4и С 5. Биоорганическая химия, 1982, т 8,5,с. 652 - 659,Изобретение относится к медицинской иммунологии, конкретно к получению реагентов для определения компонентов системы комплемента человека, а именно реагента Кг и может быть использовано при диагностике аутоиммунных заболеваний, таких как системная красная волчанка, ревматоидный артрит и др. для определения комплементарного состояния организма человека. Реагент может быть использован также в лабораторной практике для определения активности компоненга Сг комплемента человека при его выделении, очистке и изучении свойств.Цель изобретения - повышение чувствительности реагента.За чувствительность реагента принимают то минимальное число эффективных молекул Сг в 1 мкл сыворотки крови, которое определяется с использованием данного реагента Кг. 801503821 А 1 2(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕАГЕНТА К ДЛЯ ТЕСТИРОВАНИЯ КОМПОНЕНТА С КОМПЛЕМЕНТА ЧЕЛОВЕКА(57) Изобретение относится к получению реагентов для определения компонентов системы комплемента человека, а именно для компонента Сг комплемента человека и может быть использовано для диагностики аутоиммунных заболеваний, в лабораторной практике для определения активности Сг при его выделении, очистке и изучении свойств. Для повышения чувствительности реагента Рг сыворотку крови человека после нагревания до температуры 50 С в течение 30 - 40 мин, охлаждают и доводят до рН 6,0 - 7,0, после чего реагент замораживают при - 70 С или лиофольно высушивают и хранят при - 4 С. Эта велич и на соответствует та нген су угла наклона прямолинейного графика зависимости 2 (число так называемых эффективных молекул Сг на один сенсибилизированный эритроцит барана) от количества сыворотки в крови (как источника Сг),Величина Х определяется по формуле Х=1 п 1 Кл - К)/(Кл - А) , где Кл, К и А величины оптической плотности супернаталта после центрифугирования эритроцитов при 412 нм соответственно в контроле на полный лизис эритроцитов, в контроле на оеагент и в опыте.Изобретение поясняется следующими примерами.Пример 1. Сыворотку крови человека (пул от 10 доноров) разливают в тонкостенные пробирки по 2 мл и выдерживают в водяном термостате, контролируя температуру (50 С) внутри пробирок. Инакти1503821 Формула изобретения Составитель Н. ЛитвиненкоРедактор М, Недолуженко Техред И. Верес Корректор Н. БорисоваЗа каз 5170/7 Тираж 643 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР1 3035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5Производственно-издательский комбинат Патент, г. Ужгород, ул. Гагарина,01 вацию проводят 35 мин. Затем пробирки ставят на 5 мин в стакан со льдом для остановки инактивации.Содержимое пробирок сливают вместе и доводят рН до 6,5, добавляя 0,15 М НС 1 и контролируя рН по рН-метру,Полученный таким образом реагент замораживают при -70 С, либо лиофильно высушивают и хранят при -4 С.Полученный реагент имел чувствительность 0,856, тогда как известный реагент обладает чувствительностью 0,5450,081, таким образом чувствительность реагента увеличилась в 1,473+-0,137 раза.Пример 2. Способ осуществляется так же, как и в примере 1, однако рН сыворотки крови составляет 6,0, Чувствительность реагента при этом составляет 0,856 и превышает чувствительность известного реагента в 1,568 раза.Пример 3. Способ осуществляют так же, как в примере 1, однако рН сыворотки крови составляет 7,0. Чувствительность реагента составляет 0,782, а увеличение чув. ствительности реагента по сравнению с известным способом его получения составляет 1,432 раза.Таким образом, чувствительность реагента,полученного по предлагаемому способу, в 1,5 раза выше чувствительности реагента по известному способу, причем значительное увеличение чувствительности реагента достигается за счет простого приема доведения рН до заданного значения. Способ получения реагента К 2 для тес тирования компонента С комплемента человека путем инактивации в сыворотке крови компонента С 2 нагреванием при 50 С в течение 30 - 40 мин, лиофильным высушиванием, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности целевого продукта, после нагревания сыворотку крови охлаждают и доводят до рН 6,0 - 7,0.