Способ диагностики аспириновой бронхиальной астмы

(53) 616.07(0 (56) Авторско Мр 233209, кл. 8)видетельство С 61 В 10/00, 19 ед с изо фич ато теля ери циты, мываю т, их центрифуги Тироде, затемванием в растуспензию лейкобавляют 0,3 мл 10%латины, инкубируютазму, центрифугир00), затем сливаюжидкость, ресуспендв 3,0 мл раствора ТКС 1 0,2 г/л, СаС 10,01 г/л, ИаНР 04 01,0 г/л, глюкоза 1,вновь центрифугирую ного раствора же45 мин, отбираютуют 10 мин (д=т надосадочнуюируют лейкоцитыироде (ЯаС 1 8 г/л0,2 г/л, МИС 1,005 г/л, ИаНСО0 г/л/ рН 7,4),т 10 мин, сливапл =3 ронхиальнои астм ляется повыскорение спозобретени ель шение специфичност соба. Спо разом, следующим обб осуществля т 3,0 мл гей крови, доследования беованной веноз Дл аринизГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГННТ СССР А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АСПИРИНОВОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ (57) Изобретение относится к области ины, а именно к диагностике иновой бронхиальной астмы. Целью етения является повышение специ сти за счет использования более енетически обоснованного показа регистрации лейкотриенов и уско способа. Для этого выделяют из ерической крови больного лейкоподсчитывают число клеток, отИзобретение относится к медицинименно к диагностике аспириновой 2цитов инкубируют с 0,01%-ным раствором индометацина в течение 30 мин при 37 С со встряхиванием. После инкубации лейкоциты осаждают центрифугированием, а из надосадочной жидкости экстрагируют органическую фазу добавлением изопропанола, муравьиной кислоты и спустя 5 мин этилового эфира, к органической фазе добавляют 25%- ный раствор аммиака и высушивают под вакуумом. Осадок после высушивания растворяют в смеси ацетонитрил-вода- уксусная кислота (50:50:0,1 по объему). Лейкотриены определяют на жид. костном высокоэффективном хроматографе в системе ацетонитрил - вода - ук- д сусная кислота (50:50:0,1, рН 3,7) со скоростью патока 1,5 мл/мнн на колон- Я ках 4,6 х 250 мм с сорбентом ОДС С по оптической плотности при длине С волны 280 нм. При этих условиях лейкотриен (ЛТ) С определяется на 8-й мин, а ЛТД - на 22-й мин. При наличии лейкотриенов диагностируют аспириновую бронхиальную астму. Способ С,О позволяет установить диагноз в 100% еслучаев, а также сократить время исследования в 2 раза.ют надосадочную жидкость, осадок ресуспендируют в 1,0 мл укаэанного раст вора. После этого 0,02 мл полученной суспензии растворяют в 0,4 мл З .-ной уксусной кислоты и производят подсчет клеток в камере Горяева. К 1,0 мл исследуемой суспензии лейкоцитов добавляют 0,01 мл 0,01 "ного раствора индометацина, Инкубируют, встряхивая 1 О 30 мин при 37 С. После этого центрифугируют 1 О мин (я=900), надосадочную жидкость сливают и к ней добавляют 0,5 мл изопропанола, 0,03 мл муравьиной кислоты, через 5 мин - 1,5 мл этилового эфира, Верхнюю (органическую) фазу отбирают, к ней добавляют 0,022 мл 25 .-ного раствора аммиака и высушивают под вакуумом. Экстракцию лейкотриенов проводят по С 1 апзу" 20 Нця 1 у. Осадок растворяют в 0,025 мл раствора ацетонитрил - вода - уксусная кислота (50:50:0,1 по объему); лейкотриены определяют на жидкостном высокоэффективном хроматографе в системе ацетонитрил - вода - уксусная кислота (50:50:0,1, рН 3,7) со скоростью потока 1,5 мл/мин на колонках 4,6 х 250 мм с сорбентом ОДС С; размер частиц 5 мкм. Чувствительность 30 УФ детектора 0,02 ед, на шкалу при длине волны 280 нм (Резега с соавт.). . При этих условиях лейкотриен (ЛТ) С 4 определяется на 8-й мин, ЛТ Д 4 - на 22-й мин, Расчет количества ЛТ про водят относительно определенного количества простагландина В, используемого в качестве внутреннего стандарта. Появление этих пиков на хроматограмме свидетельствует о неперено симости больными нестероидных противовоспалительных препаратов и наличие у низ аспириновой бронхиальной астмы. В норме указанные пики в исследуемом материале отсутствуют. 45П р и м е р 1, Больная К., 4 года, поступила с диагнозом бронхиальная астма, атопическая, средне-тяжелое течение, межприступный период. За год до поступления в клинику при 50 респираторной инфекции родители давали ребенку амидопирин, анальгин, реакции не отмечалось. При аллергологическом обследовании в отделенииотмечена высокая степень,сенсибили зации к аллергену из домашней пыли,начата специфическая гипосенсибилизация. Во время пребывания ребенкав отделении для снятия зубной болибыли применены местно анальгин и аспирин, после чего появилась сыпь,сухие свистящие хрипы. Стал вопросо наличии у ребенка аспириновой аст"мы на фоне атопии, причем проведениепровокационного теста было признанонецелесообразным иэ-за опасности развития приступа удушья, При инкубации1,5 х 10 лейкоцитов с 0,01 -ным раствором индометацина в супернатанте выявлено 3,46 х 10г/мл лейкотриенаС 4/С 4 (2,3 х 10 на 10 лейкоцитов),что свидетельствует о непереносимостибольной препаратов иэ группы НСППи подтверждает наличие у нее аспириновой бронхиальной астмы. Таким образом, полученные данные позволилидать рекомендации о необходимостиизбегать назначения для больной препаратов из группы НСПП и пищевых п 1 одуктов, в которых они содержатся,что позволит избежать дальнейшегообострения заболевания,Положительный эффект предлагаемого способа состоит в том, что он позволяет повысить специфичность диагностики путем использования более пато-. гномичного показателя, значение которого у больных в среднем в 28 раз выше, по сравнению с контролем. Ускорение диагностики в 2 раза достигается путем сокращения времени анализа с 6 ч в прототипе до 3 ч предлагаемым способом.Формула изобретенияСпособ диагностики аспириновой бронхиальной астмы путем высокоэффективной жидкостной хроматографии, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью повышения специфичности и ускорения способа, в надосадочной жидкости отмытых лейкоцитов периферической крови, обрабстанных 0,01%-ным раствором индометацина, определяют содержание лейкотриенов С 4, Д 4, Е 4 и при их наличии диагностируют аспириновую бронхиальную астму.