Способ идентификации микробов

ОПИСАН И Е ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 144961 Союз Советских Социалистических РеспубликЗависимое от авт, сзидетельства-Заявлено 15 Х 111.1959 ( 636694/31 ч. 301 г, 1 присоединением заявкиП 1 с, А 611 с ПриоритетОпубликовано 31 Х,1967. Бюллетень12Дата опубликования описания 4 Л 1 П.196 Комитет по деламбретекий и открцтки Совете Министров ДК 615.45: 576.8,093.1 (088.8) Авторизобретени А. К. Адамов Заявитель 11 ОСОЬ ИДЕНТИФИКА О МИ 1Адсорбционные связи антигенов и антител с различными объектами используются в микробиологии с различной степенью эффективности для идентификации микробов.Предлагаемый способ идентификации микробов обеспечивает значительное упрощение и ускорение исследований. Отличительной особенностью его является использование при идентификации микробов путем агглютинации на стекле иммунных сывороток, адсорбированных на ализариновой суспензии. Иммунные сыворотки должны быть консервированы борной кислотой.Для осуществления способа вначале приготовляют лизариновую суспензию, к которой затем добавляют диагностическую агглютинирующую сыворотку, консервированную борной кислотой. Ализариновые частицы суспензии адсорбируют агглютинины видовой монорецепторной сыворотки (титр не ниже 1: 800), Полученный препарат сохраняют и используют для реакции агплютинацин микробов на стекле.Для приготовления ализариновой суспензии в фарфоровую ступку помещают 1,0 порошка кристаллического ализарина и 3 час растирают его пестиком с 2 - 3 л бидистиллированной воды (рН=7,0 - 7,2). Через 3 час полученную суспензию разводят 18 лгл бидистиллированной воды. При этом образуется равномерная однородная суспензия, которую дважды центрифугируют с декатпрованием надссадочной жидкости и суспендированием получаемых осадков в оидистпллированной воде (20 лг,г первый раз и 90 льг второй). Полученную суспензию переносят в колбочку с фарфоровыми бусами и встряхивают в течение 15 лшн.Крупные частицы удаляют центрифугиро ванием, а надосадочную жидкость фильтруютпод небольшим вакуумом через мембранные фильтры с диаметром пор 3 - 5 лгк, получая в фильтрате преимущественно (свыше 90%) частицьг величиной 1,0 - 1,6 лгк. Получение 15 устойчивой суспензии с такой величиной частиц требует высококачественных реактивов и определенного навыка работы с суспензиями.Для адсорбции агглюти нино в на частицы 20 ализариновой суспензии к 10 льг последнейдобавляют 2 лгл диагностической видовой монорецепторной агглютинирующей сыворотки с титром не ниже 1: 800, разведенной 1:5 или 1; 10 физиологическим раствором, содер жащим 1% борной кислоты. Смесь, периодически перемешивая, выдерживают 2 час при 37 С, затем помещают на 18 час в холодильник (температура +4 - 8), перемешивают и центрифугируют до полного просветления 30 жидкости. Надосадочную жидкость удаляют144961 Предмет изобретения Редактор Т. Н. Караиова Техред Т. П. Курилко Корректоры; М. П, Ромашоваи Т. Д. Чуиаева Заказ 23816 Тираж 535 ПодписноеЦНИИПИ Комитета пс делам изоорстений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Центр, пр. Серова, д. 4 Типография, пр. Сапунова, 2 декантацией, а к осадку добавляют 10 лил физиологического раствора, содержащего 0,5 в/, борной кислоты.Препарат, консервированный 0,5% борной кислоты, в запаянных ампулах при температуре +8 - 12 сохраняет иммунологическую активность и специфичность около 12 месяцев,Для осуществления реакции агломерации на тщательно обезжиренное предметное стек ло наносят каплю препарата и к ней добавляют две капли исследуемой микробной взвеси. Капли перемешивают платиновой петлей и распределяют по предметному стеклу в виде квадрата 20;(20 мм. Контролем служит 15 капля препарата, смешанная с двумя каплями гетерологичных микробов, капля препарата, смешанная с двумя каплями физиологического раствора, и капля адсорбированного на ализариновой суспензии нормального кро личьего глобулина (приготовляется аналогич. но описываемому препарату), смешанная с двумя каплями исследуемой микробной взвеси, При легком покачивании предметного стекла через 5 - 10 иия (в зависимости от концентрации гомологичных микробов в исследуемой взвеси) происходит скучивание частиц ализарина в крупные агломераты с частичным или полным просветлением жидкости, тогда как контрольные капли остаются гомогенньви. Способ идентификации микробов при помощи агглютинации на стекло, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения исследования, применяют иммунные сыворотки, консервированные борной кислотой, адсорбированные на ализариновой суспензии.