Способ определения характеристик антисыворотки

(56) 5 саесЬап1949, ч. 51, р,Бюл, У 34государственныиИ,Ленинак, С.Б.Дейч,М,Киселева и В,88,8)1. Апп. Нуасад.660-672,униТи то в СТИК ноло ыбрески сыедес исыенаной ни тГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ К А ВТОРСХОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХАРАКТЕРИ ЛНТИСЫВОРОТКИ(57) Изобретение относится к имму гии, предназначено для определен качественных характеристик анти вороток (константы средства и ко чества мест связывания), Цель из тения - ускорение способа путем лючения стадии взаимодействия ан воротки с 507 связыванием и разв ний меченого антитела и усоверше вования расчета характеристик ан вороток. Определяют качественные рактеристики антисыворотки к норад лину - медиатору симпатической нер системы, используя аналог норадрен на - спин-меченый норадреналин ( роксильным радикалом с парамагнитными свойствами), Для построения кривой разведения двукратно титруют р-р антисыворотки фосфатным буфером рН 7,4 так, чтобы в каждой пробе было по 45 мл р-ра, Затем в каждую пробирку с антисывороткой доливают по 0,05 мл р-ра спин-меченого норадреналина в концентрации 10 М, Инкубируоют смесь 12 ч. при 18-20 С, затем измеряют концентрацию связанного спин- меченого норадреналина (В) и свободного спин-меченого норадреналина (Р) на радиоспектрометре по амплитуде высокопольной компоненты спектра электронного парамагнитного резонанса и калибровочной кривой. Строят графическую зависимость в координатах В 1//Г против Вф 1/Г, где В - концентрация связанного антигена; Г концентрация свободного антигена;- фактор и-кратного разведения (1/и, 1 п ,1 п ). Затем определяют константу сродства антисывороток по тангенсу угла наклона этой зависимости к оси абсцисс, а кол-во мест связывания - по значению точек пересечения этой зависимости оси абсцисс.776 компоненты спектра электронного парамагнитного резонанса и калибровочной кривой. Далее строя графическуюзависимость в координатах В/Г/Гпротив В 1/Г, где В - концентрациясвязанного антигена; 1. - концентрациясвободного антигена Г - фактор иФкратного разведения, равный 1/и, 1/и )О 1/и и т,д,Далее определяют константу сродства антисывороток по тангенсу угланаклона этой зависимости к оси абсП р и м е р, Для определения качественных характеристик антисыворотки к норадреналину - медиатору симпатической нервной системы - используют аналог норадреналина - спин-меченый норадреналин, меченый нитроксильным радикалом, обладающим парамагнитными свойствами, Фиксированное количество спин-меченого норадреналина готовят путем растворения его навески 9,25 млг в 25 мл воды, Для построения кривой разведения осуществляют двухкратное титрование раствора анти- сыворотки фосфатным буфером рН 7,4 таким образом, чтобы в каждой пробе было по 0,45 мп раствора. Затем в каждую пробирку с антисывороткой доливают по 0,05 мл раствора спин-меченого норадреналнна, окончательная концентрация которого в каждой пробирке составляет 10 М, Инкубацию реакционной смеси проводят в течение 12 ч при комнатной температуре, после чего в каждой пробирке производят измерение концентрации связанного спин-меченого норадреналина (8) и концентрации свободного спин-меченого норадреналина (Г) на радиоспектрометре РЭпо амплитуде высокопольной цисс, а количество мест связывания15 по значению точек пересечения этой зависимости оси абсцисс. 0 Способ определения характеристикантисыворотки, включающий взаимодействие фиксированного количества меченого антигена с пробами специфической антисыворотки П -кратного разведения 25 и определение в каждом измеренииконцентрации связанного антигена, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения способа, а каждом измерении дополнительно измеряют кон центрацию свободного антигена, затемстроят графическую зависимость в координатах В 1/Г/Г против В 1/Е, где В - концентрация связанного анти" гена; Г - концентрация свободного антигена; 1 - фактор и -кратного разведения антисыворотки, равный 1/п, 1/и , 1/и , и определяют константу сродства по тангенсу угла.наклона этой зависимости к оси абс О цис, а количество мест связыванияпо значению точки пересечения этой зависимости оси абсцисс. Составитель М.Васильев Техред И,Попович,Заказ 4123/41 Тираж 776 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, 11(-35, Раушская наб д,4/5Производственно-полиграФическое предприятие, г,ужгород, ул.Проектная,4 1 1337Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для определения качественных характеристик антисывороток: константы сродства и количества мест связывания.Целью изобретения является ускорение способа за счет исключения стадии взаимодействия антисыворотки с 507, связыванием и разведений меченого антитела и усовершенствования расчета характеристик антисывороток. Формула изобретения