Способ определения активности иммунных сывороток к ооцитам

,801215 цц 4 С 01 И 33/5 ННЫЙ КОМИТЕТ СССЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ ГОСУДАРС ПО ДЕЛАМ 3(71) Всесоюзный ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт животноводства (72) А,Д. Субботин и И.И, Соколовская (53) 578.085.2(088.8)(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ИММУННЫХ СЫВОРОТОК К ООЦИТАМ, включающий инкубацию ооцитов в исследуемой сыворотке, отмывание их, воздействие на ооциты протеолитическими ферментами и микроскопирование целостности ооцитов, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью количественного определения активности иммунных сывороток, перед инкубацией делают разведения иммунных сывороток и ооциты инкубируют в каждом из разведений сыворотки, а об активности сыворотки судят по наивысшему ее разведению, которое обеспечивает целостность ооцитов при использовании в качестве протеолитического фермента 1,9-2,17-ного раствора трипсина и времени воздействия его на ооциты д в течение 3-4 ч,ф1215026 В растворах трипсина 1,9-2,1 максимальное разведение иммунных сывороток к ооцитам (титр сывороток), прикоторых прозрачная зона сохраняласьне менее 3 ч, была для сывороткйморской свинки 2 512, свинки 3 64 исвинки 4 128 раз,Таким образом, оптимальной концентрацией раствора трипсина для выявления титра иммунных сывороток кооцитам млекопитающих является концентрация 1,9-2,1 .ть И, ТарееваКастелевич Корректор В. Синицкая Редактор Л. Огар Заказ 902/52 Тираж 778 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Изобретение относится к биологии,в частности к иммунологии, и можетбыть использовано в научных исследованиях для количественного определения активности антител в иммунныхсыворотках к ооцитам яйцеклеткам)в условиях эксперимента или в нормальных сыворотках и естесТвенных жидкостях организма животных и человека,Цель изобретения - количественное 10определение активности иммунных сывороток к ооцитам,Прозрачная зона ооцитов послеконтакта ее с антителами к ооцитамдлительное время сохраняет свою 15целостность в растворах протеолитических ферментов (трипсина или (папаина), которые при прочих условияхвызывают ее полное переваривание втечение 30-60 мин. 20Время сохранения прозрачной зонойустойчивости к переваривающему действию протеолитических ферментовзависит от концентрации антител в испытуемой иммунной сыворотке и может 25составлять от 60 мин до несколькихнедель.Для определения активности иммунной сыворотки к ооцитам делают рядпоследовательных разведений ее 17.-ным 30раствором хлористого натра и про-.водят во всех разведениях инкубациюоооцитов при 37 С во влажной камере) того вида животных, ооцитыкоторого использованы для иммунизации животного - продуцента сывороткиили ооцитов, наличие антител к которым предполагается в исследуемойсыворотке.Инкубацию (в каждом варианте неменее трех ооцитов) проводят в течение 1 ч, после чего отмывают ооциты от сыворотки 17-ным растворомхлористого натрия и помещают их дляинкубации в 2 Е-ный раствор трипсинаво влажную камеру при 37 С. В продолжение инкубации с интервалом30 мин проводят периодическое микроскопирование ооцитов с целью определения целостности прозрачной зоны.СоставитеТехред Ж. Титром иммунной сыворотки к ооцитам считают то ее максимальное разведение после инкубации в котором обеспечивается сохранность целостности прозрачной зоны в 2 Е-ном растворе трипсина не менее 3 ч.П р и м е р. Проводили определение титра иммунной сыворотки, Исследовали активность иммунных сывороток взятых от морских свинок 2, 3 и 4, к ооцитам крупного рогатого скота. Приготовили ряд разведений этих сывороток; 2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256, 512 и 1024 раза, В каждом разведении проинкубировали по 9 ооцитов,Для выявления степени приобретенной после такойинкубации устойчивости прозрачной зоны ооцитов к действию протеолитических ферментов применили следующие разведения трипсина: 1, 1,5, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,5 и ЗЖ.Микроскопическую проверку проводили через каждые 30 мин инкубации в трипсине.В растворах трипсина с концентрацией выше 2,17 во всех вариантах прозрачная зона ооцитов разрушалась менее, чем за 3 ч, В растворах с концентрацией менее 1,97 целостность прозрачной зоны ооцитов сохранялась после инкубации в иммунных сыворотках от морских свинок 2 и 4 при всех разведениях, включая и 1024 раза, а в сыворотке от морской свинки 3 при всех разведениях, кроме 512 и 1024 раза.