Способ идентификации породы тутового шелкопряда

УДАРСТЭЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ. СКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Московский ордена Леордена Трудового Красногогосударственный педагогичститут им. В.И.Ленина(56) Авторское свидетельство СССРУ 293, 1962.(54)(57) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ПОРОДЫТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА, включающий определение характеристик идентифицируемой породы на стадии яйца, сравнительный анализ полученных характеристик с аналогичными характеристиками известных пород и оценку породной принадлежности, о т л и ч а ю -щ и й с я тем, что, с целью повышения точности и сокращения времениидентификации, а также снижения трудоемкости, в качестве определяемойхарактеристики используют белковыеформулы, полученные путем сравнениябелкового спектра эталона с белковымспектром идентифицируемой породы,при этом белки разделяют по иэоэлектрическим точкам, а эталоном служитсуммарный белковый спектр всех белковых зон, выявленных у известныхпород тутового шелкопряда методомизоэлектрофокусирования, причемоценку породной принадлежности осуществляют по совпадению белковогоспектра исследуемой породы с однимиз белковых спектров известных пород.1186 79 5 10 20 25 30 35 40 45 ВНИИПИ Заказ 6461/5 Тираж 742 Подписное филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4 Изобретение относится к биохимии и селекции хозяйственно-ценного вида насекомых - тутового шелкопряда и может быть использовано для определения породы, а также гибридов тутового шелкопряда на фазе яйца.Цель изобретения - повышение точности и сокращение времени идентификации породы тутового шелкопряда, а также снижение трудоемкости способа.Предложенный способ осуществляется следующим образом.Для выделения растворимых белков навеску грены (100 мг) заливают 1 мл О, 15 М раствора хлорида натрия и растирают в фарфоровой ступке при 0 С в течение 15 мин. Полученный экстракт центрифугируют при 19 .000 8 в течение 30 мин, осадок отбрасывают, а супернатант фильтруют через двойной слой капроновой ткани, определяют в нем концентрацию белка и используют для дальнейшей работы. Фракционирование белков осуществляют методом изоэлектрофокусирования в" тонком слое полиакриламидного геля в диапазоне рН 4,0-6,5. Для получения спектра растворимых белков достаточно 200 мкг белка иэ одного образца грены. По окончании изоэпектрофокусирования гелевые пластины фиксируют в смеси, состоящей из 150 мл этилового спирта и 350 мл дистиллированной воды с растворенными в ней 17,5 сульфосалициловой кислоты и 57,5 г трихлоруксусной кислоты. Фракцию проводят в течение 45 мин, после чего белки на пластине окрашивают 0,1 Е-ным раствором кумаси К, который готовят на смеси;этанол - уксусная кислота - вода (в соотношении 3:1:8). Окрашивание ведут при 60 С в течение 15 мин,оПосле окрашивания избыток красителя отмывают смесью этанола, уксусной кислоты и воды (3:1:8) в течение 18 ч, Отмытую пластину заливают на 1,5 ч предохраняющим раствором, содержащим глицерин и отмывочную смесь в соотношении 1:10, и далее высушивают при комнатной температуре втечение 14 ч,Полученная таким образом электрофореграмма может храниться при комнатной температуре по крайней мерев течение 1 года,. Электрофореграмму растворимыхбелков идентифицируемой породысопоставляют с эталонной электрофореграммой. Эталоном является суммарный белковый спектр всех белковых зон, выявленных у различных пород тутового шелкопряда методом изоэлектрофокусирования.Для составления формул растворимых белков грены белковые фракции, выявленные на электрофореграмме, обозначают соответствующими номерами: 1-й номер - у белковой эоны с наивысшей изоэлектрической точкой(р 1), а последний (24-й)номер - убелковой зоны с наименьшей величиной р 1, Степень выраженности белковых зон обозначают черточкой под номером (интенсивная зона) или над номером (слабая зона). Очень слабые эоны обозначают двумя черточками над номером, а двойные эоны - двумя точками. Каждая порода тутового шелкопряда характеризуется неповторимым белковым спектром и соответствующей формулой.На протеинограммах выявлены характерные белковые спектры двух пород. По эталонному спектру находим,что этим неизвестным породам соответствуют белковые формулы: 1, 2, 3 4, в , в , 7, 8, 9, 10, в , в , 13, 14,16, 17, 18, 19, 20, 2 1, 22, 2324 и 1, в , 3, 4, в , в , 7, 8,13, 14, в , 16, 17, в , 19, 20,21, 22, 23, 24 Полученные белковые формулы сопоставляют с белковыми формулами известных пород тутовогЬ шелкопряда и делают заключение о принадлежности исследуемой грены к породам Калхида и САНИИШ.