Способ получения пептидов

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Севетскнк Соцнаннстнческнх РеспубликС 07 С 103/52//А 61 К 37/02 Государствеиый комитет СССР по делам изобретений и открытий(088, 8) Опубликовано 300780.Бюллетень ЧЪ 28 дата опубликования описания 300780(72) Авторы изобретения ИностранцыЭдвард Ли Смитвик-младший (США), Роберт Теодор Шуман (США)и Роберт Куртис Артур Фредериксон (Канада) Иностранная Фирма(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ ИЛИ ИХ СОЛЕ 1(Ц О (О)О В ОййЗ- СН - С -Н-СН-С-МН-СН-С- Сн- С СК- т,1 Г5 1сНВ 5 В Сне СНъЮ ОСНт - С - йН21: й т - независимо водород или метил,Оили их солей, заключающийся Н(СН 5)5, ЗО что в соединении формулыо Н 13 скз, - ОсНс Изобретение относится к способу получения пептидов или их солей новых соединений, обладающих биологической активностью, которые могут найти применение в медицине.В пептидной химии широко используют метод получения пептидов путем деслокирования соответствующих защищенных пептидов в безводной кислой среде 1,Цель предлагаемого изобретения - получение новых пептидов, обладающих фармакологическими свойствами, с использованием известных методов пептидной химии,Поставленная цель достигается описываемым способом получения нептидов общей формулы5 0 15 20 25 ЗО 35 40 45 50 55 60 Б 5 распределяют между эфиром и водой.рН водного слоя повышают до 8,0.Органический слой отделяют и отбрасывают. Водный слой подкисляют дорН 2,0 холодной разбавленной соляной кислотой и экстрагируют холодным этилацетатом. Этилацетатную фазупромывают водой, сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме.Полученный остаток растворяют вэфире и к раствору добавляют 66,8 мл(0,336 моль) дициклогексиламина.Полученный осадок перекристаллизовывают из этилацетата и получают32,8 г (23 от теории) целевогосоединения, т.пл. 156-159 фС; о(С = 1, метанол),Найдено,%: С 61,37, Н 9,98й 6,26.С иН йй 045 (430 фб)Вычислено,%: С 61,36, Н 9,83;М 6,51Б. й -Еутилоксикарбонил-М-метил-этилцистеиниламид.К 50 мл безводного тетрагидрофурана добавляют 18,58 г (74,3 моль)Мф-бутилоксикарбонил-этил-С-цистеина (приготовлен при нейтрализации продукта, описанного в части А, и экстракции этилацетатом).Полученную смесь по каплям в течение 30 мин добавляют к перемешиваемой суспенэии 42,45 г гидрида калия(22,1 КН в минеральном масле0,234 моль КН) в 375 мл тетрагидрофурана при 0 С и содержащей 0,35 г18-кроун-б-эфира. Затем по каплямв течение 15-20 мин добавляют йодистый метил (9,25 мл, 0,149 моль)в 20 мл тетрагидрофурана. Смесь перемешивают при ОфС 1,5 час, к нейпо каплям добавляют 7.,5 мл уксуснойкислоты в 7,5 мл тетрагидрофурана, азатем 5 мл этанола. Полученную реакционную смесь выливают на лед и устанавливают рН 9 смеси при добавлении2 М раствора гидроокиси натрия. Полученный водный раствор экстрагируютэфиром, рН 3 водного слоя устанавливают при добавлении твердой лимоннойкислоты, затем экстрагируют эфиром(Зх 300 мл), Эфирные экстракты обьеди-,няют, промывают водой, сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Полученный остаток растворяютв 200 мл эфира и к раствору добавляют9,56 мл (74,3 моль) д-(+)-Ы;метилбензиламина. К охлажденной смеси добавляют 500 мл петролейного эфира.Раствор концентрируют в вакууме иостаток вновь растворяют в петролейном эфире. Затем смесь охлаждают до(2,74 г). Маточный раствор концентрируют в вакууме и остаток растворяют в эфире. Эфирный раствор промывают 1 И лимонной кислотой, водой исушат над сульфатом магния, концентрируют в вакУУме. ПолУчают 6,56 г(С = 1, этанол);ЯМР ( СОС 21 ), б 2,90, М СН ,1,45 арра -бутил, д 4,9-4,5 СН,Продукт (6,5 г, 0,025 моль)растворяют в 80 мл диметнлформамидаи раствор охлаждают до -15 фС. Затемдобавляют к нему изобутиловый эфирхлормуравьиной кислоты (3,6 мл,0,027 моль) и М-метилморфолин(2,99 мл, 0,027 моль), Реакционнуюсмесь перемешивают 10 мнн при -15 фС,а затем через нее пропускают газообразный безводный аммиак в течение1 ч. Смесь дополнительно перемешивают 4 ч при -15 ОС, а затем вливаютв смесь льда и 1 М раствора бикарбо.ната натрия, Холодный водный слойэкстрагируют эфиром, эфирный экстракт промывают холодной 0,75 й лимонной кислотой и водой, сушат надсульфатом магния и концентрируют ввакууме, Получают остаток, которыйкристаллизуют из смеси эфира и петролейного эфира и получают 1,7 г(26) целевого соединения,т.пл. 56-59 С,с) -127,6 (С0,5, хлороформ).ЯМР (СНСЕ ): СГ 2,80, М-СНб 1,46 прего -бутил; б 4,9-4,5;Ю-СН Найдено,%: С 50,56; Н 7,93; М 10,51.С 44 Н 24 М т 0 3 5 ( 261, 36 ).Вычислено,Ъ: С 50,55; Н 8,10; М 10,72.В. Мф-врал-Бутилоксикарбонил -фенилаланил-М-метил-этил- -цистеиниламид.К 20 мл ледяной уксусной кислоты, содержащей 1 мл триэтилсилана и 4 мл анизола, добавляют 2,5 г (9,5 моль) МР-трет-бутилоксикарбонил-й-метил-этил-С-цистеиниламнда, Через полученную смесь в течение 30 мин пропускают сухой хлористый водород, затем добавляют фир и получают осадок в виде хлористоводороцной соли (1,8 г). Осадок растворяют в 25 .мл диметилформамида,раствор охлаждают до 0 С и нейтрализуют 1,31 мл триэтиламина.ДобавЛяют М-ереа-бутилоксикарбонил-С-фенилаланин (2,65 г, 0,01 моль); 1,35 г (0,01 моль) оксибензотиазола и 2,06 г (0,01 моль) дициклогексилкарбодиимида. Полученную смесь перемешивают при 0 С 2 ч и при комнатной температуре 24 ч. Затем ее охлаждают да С С и отфильтровывают образовавшийся осадок. Фильтрат концентрируют в вакууме и полученный остаток растворяют в этилацетате. Раствор экстрагируют 1 М раствором бикарбоната натрия, водой, 0,75 М лимонной кислотой и водой. Затем смесь сушат над сульфатом магния, растворитель45 упаривают в вакууме, полученный сироп растворяют в хлороформе и раствор вносят в колонку (Зх 45 см),содержащую силикагель сорта 62 фирмы"Грэйс и Давидсон". Элюирование ведут смесью хлороформа и метанола при-лаурет-бутилоксикарбонил-С-тирозил-О-аланилглицина.46,80 г продукта, полученного пригидрогенолизе (способом, описанным 20в части Д примера 1), бензил М-щрел- -бутилоксикарбонил-бензил-С-тирозил-О-.аланилглицината, растворяютв 150 мл изопропилового спирта и краствору добавляют 16 мл (0,081 моль) р 5дициклогексиламина, и эфир, доведяобъем раствора до 1,5 л, упариваютполутвердую массу, обрабатывают дозатвердения растиранием и полученныйосадок сушат. Получают 46,04 г (98 Ъ)твердого вещества; т.пл. 194,5-197 С.Вещество растворяют в 100 мл кипящего метанола и добавляют 500 млизопропилового спирта. Раствор упаривают до " 150 мл, продувая черезнего азот. После охлаждения продуктвыпадает в осадок, осадок отделяют,сушат и получают 41,44 г (88) целевого соединения;.т.пл. 198-200,5 С,сА 3, + 17,9 (С = 1,метанол).Найдено,Ъ: С 62,95; Н 8,77; 40й 9,20.СэлнзоМО (590,8).Вычислено, С 63,03; Н 8,53;й 9,48.3. М - йрещ-Бутилоксикарбонил-С-тирозил-О-аланилглицил-С-фенилаланил-М -метил-этилцистеиниламид.бК 20 мл ледяной уксусной кислоты,содержащей 3 мл анизола и 3 мл триэтилсилана, добавляют 2,5 г 50(6,1 моль) продукта, описанного вчасти В. Через реакционную смесьбарботируют сухой хлористый водородв течение 25 мин.Добавляют эфир,смесь охлаждают, отфильтровывают осадок и получают 1,9 г (5,5 моль) хлористоводородной соли. Соль растворяют в 25 мл диметилформамида, растворохлаждают и добавляют к нему 3,2 г-тирозил-О-аланилглицина.Полученную смесь перемешивают при 0 С10 мин, Затем добавляют оксибензотиазол (0,74 г, 5,5 моль) и дицикпагексилкарбодиимид (2,1 г, 5,5 моль) 65 и смесь перемешивают при ОфС 2 ч ипри 4 С - 48 ч.Образовавшийся осадокОотфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток растворяютв этилацетате и раствор промывают1 М раствором бикарбоната натрия,водой, 0,75 й лимонной кислотой и,водой. Органическую фазу сушат надсульфатом магния и упаривают в вакууме. Получают 3,5 г сырого цеЛевого соединения, Продукт растворяютв хлороформе и вносят в колонкуразмерами Зх 45 см с силикагелемсорта 62 Фирмы "Грейс и Давидсон"и элюирование ведут при ступенчатомградиенте смесью хлороформ-метанолСНСе - СЯСЬ: СН 1 ОН (9: 1)1. Фракциикомбинируют на основании результатов анализа хроматографией в тонкомслое, упаривают в вакууме. Получают2,4 г (62) чистого целевого соединения; Ы 1 - 30,7 о(С = 0,5,метанол).Найдено,Ъ:С 58,14; Н 6,96й 11,94.СНДМ О5 ( 700, 86).Вычислено,Ъ: С 58,27; Н 6,90;М 11,99.Анализ аминокислоты: Найдейо Туг1,01; АВа 1,00; Оу 1,00; РЬе0,98; Мнз 1 09Е. Ацетат -тирозил-О-аланилглицилфенилаланил-(.-й-метил-этилцистеиниламида.К 20 мл ледяной уксусной кислоты,содержащей 2 мл анизола и 2 мп триэтилсилана, добавляют 2,2 г(3 моль) продукта, описанного вчасти Д. Через реакционную смесьбарботируют в течение 25 мин сухойхлористый водород. Добавляют эфири смесь охлаждают. Полученный осадокотфильтровывают и сушат (2,0 г).Осадок (1,2 г) растворяют в достаточном количестве буфера (1 пиридина и 0,05 уксусной кислоты в воде)для достижения объема 10 мл.Растворвносят в колонку размерами 2,5 х 99 см,заполненную диэтиламиноэтил - сефадексом А 25 (ацетат), предварительноуравновешенную с тем же буфером.Определенные фракции комбинируют и лиоФилизируют. При повторной диофилизации иэ 10-ной уксусной кислоты ипоследующей лиофилизации из смесиводы и ацетонитрила (75:25) полчают0,59 г целевого соединения, -.1 +9,9А. Йф-юрва -Бутилоксикарбонил-й(- -метиллейцина в Форме д-(+)-д-метилбензиламиновой соли.К 20 мл эфира добавляют 12,5 г(0,05 моль) гидрата йф-щрев-бутилоксикарбонил-(.-лейцина и смесь сушат 5над сульфатом магния и концентрируютв вакууме. Остаток растворяют в 75 млтетрагидрофурана и раствор по каплямпри перемешивании добавляют в течение 35 мин к охлажденной суспензии(ООС) 27,9 гидрида калия (22,1 Ъ-наясуспензия в минеральном масле,0,154 моль КН) в 200 мл тетрагидроФурана, содержащего 0,25 г 18-кроун-б-эфира. Затем в течение 15 мин покаплям добавляют йодистый метил(6,4 г) в 10 мл тетрагидрофуране.Смесь выдерживают при ООС в течение3 ч, затем в нее по каплям вносят5 мл уксусной кислоты в 5 мл тетрагидрофурана и 5 мл этанола. Полученную смесь выливают на 500 млльда при добавлении 1 й растворагидроокиси натрия устанавливают рН 9.Водный раствор экстрагируют эфироми подкисляют до рН 3 при добавлении 25твердой лимонной кислоты, Подкисленную водную суспензию зкстрагируютэфиром Объединенные эфирные экстракты промывают. водой, сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме. 30Получают 13,2 г (107 Ъ от теории)сырого продукта, Анализ методом хроматографии в тонком слое показалприсутствие в полученном продуктенекоторого количества непрореагировавшего исходного продукта. Полученный продукт растворяют в эфире ик раствору добавляют 5,25 мл(0,05 моль) тетрабутиламина.Эфирныйраствор разбавляют петролейным эфи Ором и охлаждают в течение, ночи.Образовавшийся осадок отфильтровывают ифильтрат промывают 1 й лимонной кислотой, а затем водой. Органическуюфазу сушат над сульфатом магния 45и концентрируют в вакууме. Остаток(приготовлен при нейтрализации продукта, описанного в части А,лимоннойкислотой с последующей экстракцией 65 эфиром) охлаждают до -15 фС и добавляют к ней изобутиловый эфир хлормуравьиной кислоты (6,7 мл, 0,052 моль)и й-метилморфолин (5,7 мл, 0,052 моль).Смесь перемешивают 10 мин при -15 Си в течение 1 ч и через нее барботируют безводный аммиак. Перемешивание продолжают еще 4 ч при -15 С.Затем реакционную смесь вливают всмесь 1 Й раствора бикарбоната натрияи льда. Охлажденную смесь экстрагируют эфиром, эфирный слой промывают0,75 й лимонной кислотой и водой,сушат над сульфатом магния и упаривают в вакууме. Остаток кристаллизуют из смеси эфира и петролейногоэфира и получают 5,5 г (48 Ъ) целевого соединения т,пл. 127-128 С;101- 42,2 ф (С = 1, метанол).Йайдено,Ъ: С 59,17; Н 9,66;й 11,21.С 1 Нйй 03 (244,3)Вычислено,%: С 58 99 Н 9)90й 11,47,В. Йф-п)рев-Вутилоксикарбонил -фенилаланил-йф-метиллейциламин,К 30 мл ледяной уксусной кислоты, содержащей 3 мл анизола и 3 мл триэтилсилана, добавляют 5,0 г (0,02 моль) продукта, описанного в части В, и через смесь барботируют сухой хлористый водород в течение 25 мин, Затем добавляют эфир и смесь охлаждают, Образовавшийся осадок сушат (3,6 г), Собранную хлористо- водородную соль растворяют в 60 мл диметилформамида, Раствор охлаждают до 0 С и добавляют к нему 3,99 мл (0,02 моль) дициклогексиламина, Смесь перемешивают при 0 С 10 мин, добавляют 5,3 г (0,02 моль) йф - ъ"1-бутилоксикарбонилфенилаланина, а затем 2,7 г (0,02 моль) оксибензотиазола и 4,12 г (0,02 моль) дициклогексилкарбодиимида. Реакционную смесь перемешивают 2 ч при ОС, затем при комнатной температуре 24 ч. После охлаждения до ООС смесь фильтруют и фильтрат .Упаривают в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и полученный раствор промывают 1 й раствором бикарбоната натрия, водой, 0,75 й лимонной кислотой и водой. Затем раствор. высушивают над сульфатом магния и упаривают в вакууме. Полученный остаток растворяют в хлороформе и раствор переносят в колонку размерами 3 х 45 см с силикагелем. Элюирование проводят при градиенте хлороФорм-метанол СНСВу - СНСГ .СНЪОН (9:1) . Фракций комбинируют на основании результатов анализа методом хроматографии в тонком слое и после упаривания растворителя получают 5,7 г (73 Ъ) целевого соединения, б -49,5 О(С = 0,5,метанол), 2728753358Безводный хлористый водород барботируют через раствор 1,3 г30(О, 027 моль) продукта, описанного вчасти А, в 40 мл ледяной уксуснойкислоты, 4 мл аниэола и 4 мл триэтилсилана. Через 20 мин к смеси добавляют эфир, образовавшийся осадок собирают и высушивают (1,1 г). Хлористонодородную соль растворяют в 10 мл диметилформамида и смесь охлаждают до ОоС. Затем добавляют триэтиламин(0,34 мл, 0,0026 моль) и через 10 мин 1,06 г (0,0026 моль) Мф-прещ-бутил оксикарбонилтирозил-О-аланилглицина, 0,35 г (0,00 б моль) оксибенэотиазола и 0,536 г (0,0026 моль) дициклогексилкарбодиимида. Реакционную смесь перемешивают при ООС 2 ч и при 4 ОС - 72 ч. Полученный осадок собирают и фильтрат концентрируют н вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и раствор промывают 1 М раствором бикарбоната натрия, водой,50 О, 75 М лимонной кислотой и нодой. Экстракт высушивают над сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Остаток растворяют. в этилацетате и чистят хроматографированием на силикагеле. Фракции комбинируют по результатам анализа, концентрируют и получают 1,1 г (52) целевого соединения после кристаллизации из небольшого объема этилацетата;Ь - 4,3 (СО0,5, диметилсульфоксид).Найдено,: С 59,95, Н 6,24;М 10,53.С уу Ну М 05 (778,9).Вычислено,%; С 60,14; Н 6,47; М 10,79. 65 бО нилфенилаланина и 1,62 (0,012 моль) оксибензотиазола, Смесь перемешивают 10 мин при 0 С и добавляют 2,47 г (0,012 моль) дициклогексилкарбодиимида. Через 2 ч перемешивания при ОС реакционную смесь еще 24 ч перемешивают при комнатной температуре, затем вновь охлаждают до ОфС и отфильтровывают полученный осадок. Фильтрат концентрируют в вакууме и остаток растворяют в н-бутиловом спирте. Раствор промывают 1 М раствором бикарбоната натрия и водой, затем высушивают над сульфатом магния и упаринают в вакууме. Полученный остаток кристаллизуют из этанола и получают 4,95 г 15 (85) целевого соединения,т.пл. 175- 178 С; Ж- 35,1 (С = О, 5, диметилформамид)Найдено,: С 61,78; Н 6,78; М 8,28. 20СЖНььМь ОБ 5 (4876)Вычислено,:С 61,581 Н 6,82; М 8,62.Б, М -трет-Бутилоксикарбонил- .-тирозил-О-аланилглицилфенилаланил- п-метоксибензилцистеиниламид. Анализ аминокислоты: Найдено ТугО 98; АВа 1,03, СР у 1,01 РЬе О 98;МН 1 0,99.Г. Хлоргидрат -тирозил-аланилглицилфенилаланил-и-метоксибензилцистеиниламида.К 20 мл ледяной уксусной кислоты,содержащей 0,5 мл анизола, добавляют0,90 г (0,0012 моль) продукта, описанного в части В, Безводный хлористыйводород барботируют через растворн течение 30 мин. Затем смесь лиофилизируют и получают 0,862 г (100)целевого соединения;Ф + 2,6(С = 0,5, 1 МНСЕ )Найдено,: С 56,85; Н 6,06,М 11,48, СР 5,21,Сьд Нь М0 7 5 (715,2)Вычислено,%: С 57,09; Н 6,06; И 11,75С 1 4,96.Анализ аминокислоты: Найдено Туг0,99; АРа 1,01; СРу 1,01; РЬе 0,98,МН 3 Оф 99П р и м е р 9, Приготовление ацетата -тирозил-О-аланилглицилфенилаланин-Мф-метилметиониламида,А, Соль М -тРвп-бутилоксикарбонил-Мф-метилметионина и д(+)д-метилбензиламина,Суспензию дициклогексиламиновойсоли М -щрет-бутилоксикарбонилметионина (86,13 г, 0,2 моль) в600 мл холодного эфира промывают4 раза порциями по 100 мл холодной1,5 М лимонной кислотой и водой.Отделенную органическую фазу высушивают над сульфатом магния и концентрируют н вакууме, Остаток растворяют в 150 мл тетрагидрофурана ираствор по каплям в течение 30 миндобавляют к перемешинаемой суспензии0,6 моль гидрида калия в 1000 млбезводного тетрагидрофурана (ООС),содержавшего 1,0 г 18 - кроун-б-эфира. К реакционной смеси добавляютпо каплям в течение 15 минут йодистый метил (25 мл, 0,4 моль). Через2 ч снова по каплям добавляютсмесь 20 мл уксусной кислоты и 20 млтетрагидрофурана, а затем 40 мл этанола. Смесь перемешивают н течение30 мин и выливают на 2 .л льда, Придобавлении 2 М раствора гидроокисикалия устанавлинают рН 7 воднойсмеси и продукт экстрагируют эфиром (Зх 400 мл), затем подкисляютдо рН 3 твердой лимонной кислотой.Смесь зкстрагируют эфиром (Зх 500 мл).Эфирные экстракты объединяют, промывают и сушат над сульфатом магния,упаривают в вакууме до получениясиропа (44,76 г, 84 от теории).Сироп растноряют в 450 мл этилацетатаи добавляют 25,78 мл (0,2 моль)б-(+)-д-метилбензиламина, Охлаждают,выпавший в осадок продукт отфильтровывают, получают 51,05 г (66) целевого соединения; т,пл. 131-134 С;Гсй -18,9(С = 1, этанол).Найдено,Ъ: С 59,15, Н 8,12)й 7,29.снй,04 5 (з 84,54).Вычислено,Ъ: С 59,35; Н 8,39,М 7,29,Б. Й -щрРщ-Бутилоксикарбонил-М -метилметиониламид.й -вред-Бутилоксикарбонил-М -меЫ Ытилметионин (33,3 г, 0,127 моль),полученный при подкислении солид-(+)-д-метилбензиламина, описаннойв части А,растворяют в 160 мл диметилФормамида и экстрагируют эфиром.Раствор охлаждают до -15 оС и добавляют к нему 18,3 мл (0,14 моль)изобутилхлорформиата (15,4 мл,0,14 моль) М-метилморфолина. Смесьперемешивают 10 мин при -150 С ичерез нее барботируют безводныйаммиак в течение 1 ч, Перемешивание при -15 С продолжают в течение4 ч, затем реакционную смесь выливают.в 300 мл холодного раствора1 М бикарбоната натрия. Водную суспензию экстрагируют эфиром, Эфирныйэкстракт промывают водой, холодной0,75 М лимонной кислотой и водой,сушат над сульфатом магния и упаривают в вакууме до сиропа. Сироп кристаллиэуют из смеси эфира и петролейного эфира и получают 16 г (48)целевого соединения; т.пл. 75-77 оС;ы 1 - 177,3 (С = 0,5, хлороформ).Найдено,: С 50,63, Н 8,57;М 10,45.СПНйл 50 Э (262, 17)Вычислено,Ъ: С 50,36; Н 8,45;й 10 78В. М -атрее-БутилоксикарбонилФенилаланин-йф-метил-Е-метиониламид,Через смесь 70 мл ледяной уксусной кислоты, 5 мл анизола, 7 мл триэтилсилана и 13,15 г (0,05 моль)продукта, описанного в части Б,барботируют безводный хлористый водород в течение 25 минут и выливают еев эфир. Образовавшийся осадок (9,9 г)сушат. Хлоргидрат растворяют в200 мл диметилформамида. Смесь охлаждают до ООС и добавляют 9,9 мл(О, 05 моль) дициклогексиламина,После10 мин перемешивания вносят 6,8 г(0,05 моль) дициклогексилкарбодиимидаПолученную смесь перемешивают 2 чпри ОС и 48 ч при комнатной температуре. После охлаждения до 0 С смесьОФильтруют и фильтрат концентрируютв вакууме. Полученное масло растворяют в этилацетате и раствор промывают последовательно 1 й раствором бикарбоната натрия, водой,0,75 Млимонной кислотой и водой, Этилацетатный раствор сушат над сульфатом магния, упаривают в вакууме и получают остаток, который кристаллизуютиз эфира и получают 16,4 г (80) це 6065 лоты. Соль растворяют в достаточномобъеме водного буфера, содержащего1 пиридина и 0,05 уксусной кислоты, чтобы довести общий объем до60 мл.Раствор переносят в колоику-тирозил-О-аланилглицил-(.-фенилаланил-М -метил-(.-метиониламид.6К смеси 20 мл ледяной уксуснойкислоты, 2 мл анизола и 2 мл триэтилсилана добавляют 3,5 г (8,56 моль)продукта, описанного в части В, ичерез смесь барботируют безводныйхлористый водород в течение 25 мин.Затем добавляют эфир, осажденныйхлоргидрат отфильтровывают и фильтрат сушат в вакууме. Раствор 5,0 г(8,47 . моль) соли М -ерем-бутилоксиОкарбонилтирозил-О-аланилглицина20 и дициклогексиламина в 40 мл диметилформамида охлаждают до 00 С и к раствору добавляют ранее полученную хлористоводородную соль, После перемешивания при ОС в течение несколькихминут добавляют 1,1 г (8,47, моль)оксибенэотиазола и 1,7 г (8,47 моль).дициклогексилкарбодиимида. Смесьперемешивают в течение 24 ч при 4 С.Полученный нерастворимый продуктотфильтровывают и фильтрат упариваютв вакууме, Остаток растворяют в этилацетате и раствор промывают последовательно 1 й водным раствором бикарбоната натрия, водой, холодной0,75 й лимонной кислотой и водой,Раствор сушат над сульфатом магнияи упаривают в вакууме. Остаток хроматографируют, как описано в предыдущих примерах, получают 4,1 г (69)целевого соединения;1 Ы), -13,1 О140 (С = 0,5, метанол).Найдено,Ъ: С 58,05; Н 6,62;й 11,73.СцН( й Оз 5 (700,86)Вычислено,: С 58,27; Н 6,90;45 й 11,99.Анализ аминокислоты:Найдено Туг1,00; АЕа 1,01; 0 у 0,99; РЬе 1,00;МНЪ 1,01.Д. Ацетат -тирозил-О-аланилглицилфенилаланил-М-метилметиониламида.Смесь иэ 15 мл тиоанизола, 8,3 г(0,012 моль) продукта, описан.ого вчасти Г, охлаждают до 0 С и добаволяют к ней 50 мп холодной трифторуксусной кислоты. Смесь перемешивают при 00 С 30 мин, затем разбавляют несколькими объемами эфира.Полученный осадок. сушат, получают8 г сырой соли трифторуксусной кисезависимо род л или их солей о т л и ч а ю щ о в соединении ФоО Вгп -бутилоксикарбонил,И имеют указанные Я= В= В - вИ = -СН2 од или метиО 06. 77 при Ч: -СНСН )о ОСНОВ,- СНгСНЗники информации,о внимание при экспертизеедер, К, Любке, Пептиды,1967, с. 112,Составитель В. ВолковаРедактор Л. Герасимова Техред М. Келемеш Корректор Н. С Тираж 495 аказ 5230/1 Подписноемитета СССРткрытийя наб д, 4 ЦНИИПИ Государственного к по делам изобретений и113035, Москва, Ж, Раушск Филиал Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,дексом А(ацетатная форма), предварительно уравновешенным тем же буфером. ,Ориентируясь на поглоще" ние Уф при 280 и собирают продукт, элюированный в промежутке от 1270 до 1850 пе. Элюат лиофилиэируют. Остаток растворяют примерно в 200 мл 1 й уксусной кислоты и раствор лиофилизируют вновь, После окончательной лиофилизации иэ смеси воды и ацетонитрила (3:1) получают 6,64 г (83) целевого соединения; гЦ," + 21,7(С = 1, 1 й НСВ )(в)Н- СН - С -М - СН - С -МН- СНгСн, )гф где Вц -Н, о -щрВ-й 2 ивыше значения,отщепляют .защитные группы в безводной кислой среде.2. Способ по п.1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что процесс проводят в трифторуксусной или ледяной уксусной кислоте с газообразным хлористым водородом или в 98-ной муравьиной кислоте.Приоритет по признакам:27.09.76 при й" =В 2=В - водородВ 4 - С, - С 4 - алкил; Найдено, В: С 56, 50 Н 6, 46,й 12,62,О 19,25.СрНцйО в 5 ( 660, 79 ).Вычислено, : С 56, 35, Н 6, 71,й 12,72, О 19,37.Анализ аминокислоты: Найдено Туг1,00, Айа 1,01, Лу 1,00, РЬе0,99; йНЯ 1,03. 2.Способ получения пептидов общей Формулыдпочтительно пГоводятной или ледяной уксусгазообразным хлористымв 98-ной муравьиной Найдено,З: С 58, 9; Н 6,06; й 3,82.С 47 Н 1 М 055 (351,42)Вйчислено,Ъ: С 58,10;Н 6,02; й 3,99.Б. Бензил й -юру-бутилоксикарбо нил-О-бензилтирозил-О-алинат.К 200 мл безводного М,М-диметилФормамида добавляют 35,1 г (0,1 моль продукта части, А, Полученную смесь охлаждают при перемешивании до 0 С и добавляют 11,2 г (0,1 моль) диазабкциклооктана. Перемешивание продоло жают еще в течение 10 мин при 0 С и добавляют 37,1 г (0,1 моль) й -тРФт-бутилоксикарбонил-О-бензил-(.- -тирозина, затем 13,5 г (0,1 моль) 1-оксибенэотриазола и 20,6 г (О, 1 моль) й,й-дициклогексилкарбодимида. ешиваютмиат нойхлаящаютуют,вакуумацет аттвором0,75 М Полученную смесь перем 3 ч при ОфС, затем при к температуре 24 ч. Вновь до 0 С и суспензию фильт Фильтрат концентрируют в Остаток растворяют в эти и тщательно промывают ра карбоната натрия, водой,е. е би где Н - й,б-ореот.бутилоксикарбонил;ки-к , Е и я имеют указанныетвыше значения,отщепляют защитные группы в без- водной кислой среде.Процесс прев трифторуксусной кислоте сводородом иликислоте.П р и м е р 1. Приготовление хлор гидрата -тирозил-О-аланилглицил -Фенилаланил-Фметиониламида.А, Бензил-О-алинат-и-толуолсульфонат. К смеси 100 мл бензилового спирта и 200 мл бенэола, содержащего 55,1 г (0,29 моль) моногидрата и-толуолсульфокислоты добавляют 25 г (0,281 моль) О-аланина. Смесь доводят до кипения с обратным холодильником и воду удаляют с помощью прибора Дина-Старка. Смесь нагревают 15 ч, затем охлаждают до комнатной температуры и разбавляют эфиром.Образовавшийся осадок собирают и перекристаллизовывают из смеси метанола и эфира. Получают 55,3 г (56) целевого соединения, т.пл, 112-115 С.оС,НМ ОВычисле Н 6,8й 6,63.Г. Бензил й -эре-бутилоксинил-О-бензилтироэил-О-аланицниат,Смесь из 70 мл безводного дтилформамида, 6,74 г (0,02 молсоли бензилглицината и и-толуоФокислоты охлаждают до 0 С и доляют 2,24 г (0,020 моль) диазациклооктана, Смесь перемешиваюнесколько минут и добавляют к8,84 г (О, 020 моль) продукта чти В, а затем 2,7 г (0,020 мол1-оксибензотриаэола н 4,12(0,020 моль) дициклогексилкарбимида. Реакционную смесь перем2 ч при Оос, а затем 24 чатной темпер е. Суспензают до ОоС льтруют и карб лгли и лсулобавбинейась) оди- ешиприию филь ваюткомнохлажд атур Фихолодной лимонной кислотой и вновьводой. Органический слой отделяют,высушивают над сульфатом магния,фильтруют и Фильтрат концентрируютв вакууме. Остаток растворяют в горячем этаноле. При охлаждении израствора выпадают кристаллы, послеперекристаллизации которых из этанола получают 41,5 г (80) чистогоцелевого соединения т.пл. 121-123 СНайдено,%: С 68,99, Н 6,75;20 М 5,17.Сф М 06 (520,63)Вычйслено,%: С 69,21, Н 6,97;М 5,38.В. Мф-терев-Бутилоксикарбонил-О 25 -бензилтИрозил-О-аланин,К смеси 200 мл тетрагидрофуранаи 20 мл воды добавляют 31,2 г(0,06 моль) продукта части Б.Равор охлаждают до ОоС и к нему мленно добавляют 13,2 мл (1,1 эк5 М раствора гндроокиси натрия,При перемешивании смесь медленнонагревают до комнатной температуры.Через 5 ч смесь распределяют между35 водой и эфиром. Водный слой отделяюохлаждают и устанавливают рН 2 придобавлении лимонной кислоты. Затемпродукт экстрагируют этилацетатом,Экстракт промывают водой, сушат надсульфатом магния, фильтруют и раз 40 бавляют эфиром, Образовавшийсядок отфильтровывают, получают 1рат концентрируют в вакууме. Остатокрастворяют в этилацетате. Промывают последовательно 1 М растворомбикарбоната натрия, водой, холодной0,75 М лимонной кислотой и водой.Органическую фазу отделяют, высушивают над сульфатом магния, фильтруюти фильтрат концентрируют в вакууме.Остаток кристаллизуют из этанола,получают 10,8 г (92 Ъ) чистого целевого соединения, т,пл. 145-147 С.Найдено,Ъ: С 67,32; Н 6,83;М 6,91,СзФзфМз От (589, 69).Вычислено,%: С 67,22; Н 6,67;М 1,13.Д. М -прещ -Бутилоксикарбонилтирозил-О -аланилглицин.К 60 мл диметилформамида добавляют 10,5 г (0,018 моль) продукта,полученного как описано в части Г,затем 2,5 г 5 Ъ-ного палладия на углев виде суспензии в диметилформамиде.Полученную смесь продувают азотом,водород вводят по трубке при атмосферном давлении и комнатной температуре. Через 3,5 ч подачу водородапрекращают и фильтрованием удаляюткатализатор. Фильтрат концентрируютв вакууме. При обработке остаткаэфиром получают 5,4 г (75 Ъ) целевогосоединения в виде аморфного твердоговещества.Найдено,Ъ: С 70,08, Н 5,82;М 6,16.СьНЕИ О (446,65),Вычислено,%: С 69,94; Н 5,87;М 6,27,Дс 4Е. М -мреп-Бутилоксикарбонил-М(17,2 г, 0,04 моль) распределяютмежду этилацетатом и холодной0,75 М лимонной кислотой. Органическую фазу отделяют, промывают водой,сушат над сульфатом магния, фильтруюти концентрируют в вакууме до маслообразного остатка. Остаток растворяют в смеси 80 мл безводного тетрагидрофурана и 10 мл диметилформамидаи добавляют 0,5 г 18-кроун-б-эфира.Суспензию гидрида калия (эквивалент О, 12 моль) при перемешиваниидобавляют по каплям к полученнойхолодной смеси в течение 30 мин.Затем вводят йодистый метил (2,49 мл;0,04 моль) и смесь перемешивают 24 чпри комнатной температуре. Охлажденную реакционную смесь подкисляют0,75 М лимонной кислотой до рП 3 ираспределяют между водой и эфиром.Эфирный слой промывают несколько разводой и экстрагируют 1 М растворомбикарбоната натрия. Водные экстракты объединяют, подкисляют до рН 2и экстрагируют этилацетатом. Экстрактсушат над сульфатом магния, фильтруют5 а 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 и упаривают в вакууме. Получают 8,4 гпродукта, имеющего спектр ЯМР,соот"ветствуеций желаемому М-метилированному продукту: Ю 2,92, М - СН, б 2,11,5-СНЪ, б -1,6, С(СНъ )3 .Масло (8,4 г примерно 0,034 моль)растворяют в 60 мл диметилформамида.Раствор охлаждают до 0 С и добавляют4,69 г (0,035 моль) оксибензотиазопаи 7,0 г (0,034 моль) дициклогексилкарбодимида. Смесь перемешивают 2 чпри 0 С и барботируют через нее беэ"оводный аммиак в течение 45 мин.Затемреакционную смесь фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме. Остатоквводят в колонку с силикагелем(0,076-0,252 мм) размерами 3 х 50 см,Для злюирования используют хлороформ,смесь (9,75:0,25) хлороформа и метанола, Фракции, полученные прихроматографировании объединяют наоснове результатов анализа хроматографией в тонком слое и концентрируютв вакууме, получают после двойнойперекристаллизации (из смеси эфираи петролейного эфира) целевой продукт-Фенилаланил-Иф-метилметиониламид.Через смесь из 20 мл ледяной уксусной кислоты, 2 мп анизола, 2 млтриэтилсилана и 3,6 г (0,0144 моль)продукта, полученного в условиях,описанных в части Е, барботируют безводный хлористый водород в течение30 мин, Затем смесь разбавляют эфиром. Образовавшийся осадок отфильтровывают, сушат (2,9 г) и вновь растворяют в 40 мл диметилформамида.Раствор охлаждают до 0 С и добавляютк нему 2,9 мл (0,0146 моль) дициклогексиламина, а затем 1,97 г(0,0146 моль) дициклогексилакарбодиимида. Полученную смесь перемешивают 2 ч при ООС, а затем 24прикомнатной температуре. Вновь охлаждают до 0 С, фильтруют, Фильтрат коноцентрируют в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и раствор промывают последовательно 1 М растворомбикарбоната натрия, водой, 0,75 Млимонной кислотой и водой. Этилацетатный раствор сушат над сульфатом магния, упаривают в вакууме, получаютмасло, которое не кристаллизуется иэпетролейного эфира. Остаток вводятв колонку (Зх 50 см), заполненную си20 40 ликагелем и продукт элюируют хлороформом, смесью хлороформа и метанола (9,8 : 0,2). Из Фракций, объ.единенных в соответствии с резуль"татом анализа методом хроматограФии в тонком слое, после упаривания получают остаток, который послеперекристаллизации из смеси эфира ипетролейного эфира дает 3,1 г(52,5 Ъ) целевого соединения,т,пл. 99-103 С.ОНайдено,Ъ: С 59,74", Н 7,47;й, 10,45.СНЗ М 04 5 (409,55).Вычислено,%: С 58,65, Н 7,63;й 10,26.3. й -горев-Бутилоксикарбонил-С-тироэил-О-аланилглицил-(.-фенилаланил-йф-метил-(.-метиониламид.К смеси 20 мл ледяной уксуснойкислоты, 3 мл анизола и 3 мл триэтилсилана добавляют 2,2 г(5,37 моль) продукта, полученногов условиях, описанных в части Ж.Через смесь пропускают в течение30 мин безводный хлористый водород.Затем добавляют эфир, выпавший осадок отфильтровывают и сушат в вакууме.Твердое вещество (1,75 г,5 моль)растворяют в 30 мл безводного диметилформамида и смесь охлаждают до0 С. Хлористоводородную соль нейтралиэуют при добавлении 0,99 мл(5 моль) дициклогексилкарбодиимида.Смесь перемешивают 24 ч при 4 фС.Полученный нерастворимый продуктотфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток растворяютв этилацетате, раствор промываютпоследовательно 1 й, водным растворомбикарбоната натрия, холодной0,75 М лимонной кислотой и водой.Раствор сушат над сульфатом магния,вносят в колонку (Зх 50 см) с силикагелем и продукт элюируют хлороформом, а затем смесью хлороформа и метанола (9:1). Фракции объединяют, анализируют методом хроматографии в тонком слое, упаривают, получают две порции сырого продукта весом 0,80 и 1,2 г. Первую порцию дополнительно чистят хроматографией в тонком слое силикагеля (хлороформ метанол 9:1) и получают 0,62 г целевого соединения в виде аморфного твердого вещества.Найдено,Ъ: С 58,48, Н 6,64; М 11,97. 60С 4 Н 4 М 6 065 ( 700, 86 ).Вычислено,Ъ: С 58,27, Н 6,90, М 11,99.Анализ аминокислоты: Найдено Туг 0,99, АЮа 1,00; 6 С у 1, 00; РЬе 1, 00. 65 Вторую порцию продукта дваждыхроматографируют тем же методом иполучают 0,74 г целевого продукта,имевшего приведенный элементарныйанализ и анализ айинокислоты.И. Хлоргидрат С-тирозил-аланилглицил-(.-фенилаланил-й -метил-м-метиониламида.К 5 мл ледяной уксусной кислоты,содержавшей 0,2 мл анизола, добавляют 0,72 г (1,03 моль) целевогосоединения части 3; Через смесь в течение 20 мин пропускают безводныйхлористый водород, смесь сушат лиоФилизацией, получают 0,74 г целевого соединения В" 0,3,Аналитический образец продуктасушат в вакууме при температуре 100 С.Найдено,Ъ: С 54,36, Н 6,19;й 13,00.Срф М 6065 СЮ (637,20),Вычислено,Ъ: С 54,56; Н 6,49;й 13,19.Анализ аминокислоты: Найдено Туг1,01; АВа 0,99; Ы у 1,00; РЬе 1,00.П р и м е р 2. Приготовление моноацетата полуторного хлоргидратаС-тирозил-лейцилглицилфенилаланил-М -метил-С-метиониламида.АА. Бензил-лейцинат-и-толилсульфонат,Соединение получают в условиях,описанных в части А примера 1,дляприготовления производного О-алината.Выход 73 Ъ; т.пл. 155-156 С.Найдено,Ъ: С 61,17; Н 6,68;М 3,81.С Нт,йу 5 (393,50)Вычислено,Ъ: С 61,05; Н 6,92;М 3,56,Б. Бензил-й в .гореп-бутилоксикарбонил-О-бензилтирозил-О-лейцинат.К 50 мл диметилформамида добавляют 7,86 г (0,020 моль) продукта,полученного в условиях, описанных в части А. Смесь охлаждаютдо ОоС и добавляют 2,24 г (0,020 моль)ОА 8 СО. Смесь перемешивают 5 минут идобавляют 7,42 г (0,020 моль)йф-тРев-бутилоксикарбонил-бензилтирозина, а затем 2,7 г (0,020 моль)оксибензотиазола и 4,12 г (0,02 моль)дициклогексилкарбодиимида, Смесьперемешивают 2 ч при ОС и 24 чпри комнатной температуре. Затемсмесь вновь охлаждают до 0 С,полученоную суспензию фильтруют и фильтратконцентрируют в вакууме. Полученныйостаток растворяют в этилацетате,раствор промывают последовательно1 М раствором бикарбоната натрия,водой,холодной 0,75 й лимонной кислотой и водой. Органическую фазу сушатнад сульфатом магния, Фильтруют иФильтрат концентрируют в вакууме.Остаток кристаллизуют из горячего этанола и получают 9,0 г (78 Ъ) целевогосоединения, т.пл. 100-103 С.,Найдено,Ъ;С 58,79; Н 7,48;М 9,39.СН, М07 (4 51, 52 ).Вычислено,%: С 58,52; Н 7,37,20 И 9,31.Е. М -п 1 регл-Бутилоксикарбонил - -тирозил - О-лейцилглицил-(.-фенилаланил-Мф-метилметиониламид.К 10 мл безводного диметилформамида добавляют 0,692 г (0,002 моль)солянокислой соли -фенилаланил-М -метилметиониламида (приготовлен"Ьной, как описано в части 3 примера1) и 0,903 г (0,002 моль) продукта,приготовление которого описано вчасти Д. Полученную смесь охлаждаютдо ООС и добавляют 0;28 мл(0,002 моль) тризтиламина и через10 мин 0,27 г (0,002 моль) оксибензотиазола и 0,412 г (0,002 моль)дициклогексилкарбодиимида. Смесьперемешивают 2 ч при ООС и 24 чпри 4 оС. Полученный осадок отфильтровывают и фильтрат концентрируютв вакууме до образования .остатка,который растворяют в этилацетате.Раствор промывают последовательно1 М водным. раствором бикарбонатанатрия, водой, холодной 0,75 М лимонной кислотой и водой. Органическую фазу отделяют, сушат над сульфатом магния, фильтруюти фильтратконцентрируют в вакууме. Хроматографируют в тонком слое и с пластинкипродукт элюируют смесью хлороформаи метанола (9,25:0,75), Из каждойпластинки вырезают основную УФ-положительную полосу и продукт элюируютс силикагелем смесью хлороформа иметанола. После удаления рас.ворителя в вакууме получают 1,2 г (81)целевого соединения в виде аморфного твердого вещества,ав -31,5 О,. М 11,15.СЗу Н р Ма Оэ 5 (742, 93),Ьычислено,Ъ: С 59,88, Н 7,06;Ю 1115,Г. Бензил-М-ъреЪ-Бутилоксикарбонил-бензилтирозил-лейцилглицинат,К смеси 3,37 г (0,010 моль) солибензиглицината и и-толуолсульфокислоты и 1,12 г (0,010 моль) АВСО в25 мл безводного диметилформамида 40добавляют 4,84 г (0,010 моль) соединения,полученного в условиях, описанных в части В. Смесь охлаждаютдо ОоС и добавляют к ней 1,35 г(0,010 моль) оксибензотиазола и2,06 г (0,010 моль) дициклогексилкарбодиимида. Полученную смесь перемешивают 2 ч при 0 С и 24 ч прикомнатной температуре, После охлаждения до ОоС смесь фильтруют и50фильтрат концентрируют в вакууме.Остаток растворяют в этилацетатеи раствор промывают последовательно1 М водным раствором бикарбоната натрия, водой, холодной .0,75 М лимоннойкислотой и водой. После сушки чадсульфатом магния раствор фильтруюти концентрируют в вакууме, Остатоккристаллиэуют из водного этанола,получают 4,0 г (63) целевого соединения; т.пл. 114-116 оС, 60Найдено,Ъ: С 68,17, Н 7,12;М .6,40,СьНМз 07 (631,77).Бйчйслено,Ъ: С 68,44; Н 7,18;М 6,65. 65 Найдено,Ъ: С 71,30; Н 7,15;М 4,79.СрН М О (574.72)Вычйслено,: С 7106 Н 7,37,"М 4,87.В. М -арео -Бутилоксикарбонилбензилтирозил-б-лейцин.К 80 мл тетрагидрофурана добавляют 8,0 г (0,0139 моль) продукта,полученного в условиях, описанныхв части Б, После добавления 20 млводы полученную смесьохлаждают до0 С и медленно добавляют к ней7,25 мл (0,0145 моль) 2 М водногораствора гидроокиси натрия. Смесьперемешивают 30 мин при ОсСи 24 ч при комнатной температуре,затем распределяют между водой иэфиром. Водную фазу отделяют, охлаждают до 0 С, подкисляют 1 М солянойкислотой до рН 2. Продукт экстрагируют этилацетатом. Экстракт промывают водой, сушат над сульфатоммагния, фильтруют и концентрируютв вакууме. Получают сиропообразныйостаток. Этот остаток кристаллизуютиз смеси эфира и петролейного эфираи получают 6,4 г (95 Ъ) целевогосоединения; т.пл. 90-94 С.Найдено,Ъ: С 67,14; Н 7,38;М 5,76.С 7 НьМ 04 ( 4 84, 59 ),Вйчйслено,Ъ: С 66,92; Н 7,49;М 5,78. Д. М -юрещ -Бутилоксикарбонил-(.- -тироэил-О-лейцилглицин.К 5 мл безводного диметилформамида добавляют 3,9 г (0,006 моль): соединения, полученного в условиях, описаннйх в части Г, и 1,5 г 5-ного палладия на угле. После добавления40 мл этанола смесь продувают азотом и в течение 5 ч вводят в нее водород при атмосферном давлении и комнатной температуре. Катализаторотфильтровывают и Фильтрат упари" вают в вакууме. Остаток кристаллизуютиз смеси эфира и этилацетата, получают 2,3 г (85) целевого соединеАнализ аминокислоты: Найдено ту г 1,01.; ец 1,00; Иу 1,00, Рпе 0,99.(0,004 моль) оксибензотиазола и.0,824 г (0,004 моль) дициклогексилкарбодиимида. Полученную смесь перемешивают 2 ч при ОфС и 48 ч прикомнатной температуре. Вновь охлаждают до О С и Фильтруют, фильтратупаривают в вакууме, Остаток растворяют в бутаноле и раствор промывают последовательно 1 й растворомбикарбоната натрия, водой, холодной0,75 М лимонной кислотой и водой,Органическую Фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме, Остаток растворяютв горячем этаноле и при добавленииэтилацетата получают в виде осадкацелевое соединение (1,1 г 42). р 5Анализ аминокислоты: Найдено РАа1,01; СФу 1,01; Рпе 1,01; МеС 0,98.Д. й-тоета-Бутилоксикарбонил-тирозил -О-аланилглицилфенилаланил - -метиониламид.30К смеси 20 мл ледяной уксуснойкислоты, 2 мл анизола и 2 мл триэтилсилана добавляют 1,0 г(0,0019 моль) продукта, описанногов части Г. С помощью трубки, диспергирующей газ, в смесь вводят в течение 30 мин безводный хлористый водород. Затем к реакционной смеси добавляют эфир и образовавшийся осадокотфильтровывают и высушивают. Получают 0,870 г твердого вещества, которое растворяют в смеси 20 мл холодного (00 С) диметилформамида и О, 38 мл-бутилоксикарбонилтирозина,0,257 г (0,0019 моль) оксибензотазола и 0,391 г (0,0019 моль) дициклогексилкарбодиимида, Перемешиваниепродолжают при 0 С 2 ч и при комнатной температуре 24 ч. После повторного охлаждения смеси до ОС образовавшийся осадок отфильтровывают ифильтрат концентрируют в вакууме.Полученный остаток растворяют в бутаноле и раствор промывают последовательно 1 М раствором бикарбонатанатрия, водой, холодной 0,75 й лимонной кислотой и водой. Органическуюфазу сушат над сульфатом. магния,фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме. При попытках кристаллизоватьостаток из этилапетата или этанолаполучают гель. Остаток растворяютв горячем метаноле и раствор наносятна пластинку для хроматографирования 65 в тонком слое, для элюирования используют смесь хлороформа и мета"иола (9:1). Соответствуацую полосувырезают с пластинки и экстрагируютсмесью хлороформа и метанола. Послевыпаривания растворителя в вакуумеполучают 0,270 г (21) целевого соединения; Р = О, 17.Анализ аминокислоты: Найдено Туг1,00, Ма 1,02, Му 0,99; РЬе 1,02;Ме 0,98,Е. Хлоргидрат -тироэил-аланилглицилфенилаланилметиониламида.К 5 мл ледяной уксусной кислоты,содержащей 0,25 мл анизола, добавляют0,270 г (0,0004 моль) продукта, описанного в части Д. В смесь вводят спомощью диспергирующей трубки хлористый водород в течение 20 мин.Затемреакционную смесь охлаждают и лиофилизируют, получают 0,182 г (75) целевого соединения; Р" = 0,5.Анализ аминокислоты; Найдено Туг0,99; АДа 1,00; СРу 0,99; Рпе 1,01;Ме е 0,91.Этот анализ показал присутствиесульфоксида метионина.П р и м е р 4. Приготовлениетрехводного хлоргидрата -тирозил-аланилглицил-йф-метилаланил - й -метилметиониламида.ЮА. М -ереъ-Бутилоксикарбонил-МФ-метилфенилалинат-й,й-дициклогексиламмония.К 80 мл безводного тетрагидрофурана добавляют 5,3 г (О, 02 моль)М -яре%-бутилоксикарбонил-фенилаланина. Полученный раствор охлаждают примерно до 10 С и добавляют10 мл безводного диметилформамидаи 0,5 г 18-кроун-эфира. Затемк полученной смеси медленно добавляют 10,15 г (содержащей 0,060 мольКН) масляной дисперсии гидрида калия,Полученную смесь охлаждают,до 00 Си добавляют к ней 1,24 мп(0,020 моль) йодистого метила. Перемешивание при комнатной температурепродолжают 24 ч. Затем смесь выливают в дробленный лед и экстрагируюхэфиром. Водную фазу подкисляют дорН 2 лимонной кислотой и продуктэкстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают водой, сушатнад сульфатом магния и концентрируютв вакууме. Получают некристаллиэирующийся сироп, спектр ЯМР которогосоответствует предполагаемому производному.ЯИР 1 СР 2,72, М-СН,; д 1,35,С(СН,),1,Сироп растворяют в эфире и к раствору добавляют 4,0 мл дициклогексиламина. При охлаждении выпадают кристаллы, из которых после кристаллизации из смеси метанол-сложный эфирполучают 6,8 г (74) целевого соединения т.пл. 171"174 С;1 с 1 ф -22,0Найдено,Ъ: С 70,60, Н 9,49; й 6,19.СрН МО (460,66).Вычислено,Ъ: С 70 р 40) Н 9 63 й 6,08.Б. М-трет-Бутилоксикарбонил-й -метил-(.-фенилаланил-й-метилметиониламид.Смесь из 30 мл безводного диметилформамида, содержащего 1,98 г (0,010 моль) хлористоводородной соли йф-метилметиониламида и 4,16 г (.0,010 моль) й-В/ее-бутилоксикарбонил-йф-метил-(.-фенилаланина перемешивают 5 мин, затем охлаждают до 0 С и добавляют оксибензотаэол15 (1,35 г, 0,010 моль) и дициклогексилкарбодиимид (2,06 г, 0,010 моль). Эту смесь перемешивают 2 ч при ОС и 24 ч при комнатной температуре, . Выделившийся осадок отфильтровывают и Фильтрат концентрируют в вакууме до получения сиропа, который растворяют в этилацетате. Этот раствор промывают последовательно 1 И раствором бикарбоната натрия, водой, холодной 0,75 й лимонной кислотой и водой. Органическую Фазу сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме,до сиропа. Сироп растворяют в хлороформе, вносят в колонку (Зх 50 см) с силикагелем и продукт 30 элюируют хлороформом, а затем смесью хлороформа с метанолом (9,75:0,25). Фракции объединяют и после концентрирования в вакууме получают 1,4 г (ЗЗЪ) сиропа, имевшего спектр ЯМР, 95 соответствующий спектру целевого соединения.ЯМР: Д 2,93, И-СНЪРЬе" ,д 2,73; М-СНИес; сР 2,10; 5-СН , б 1, 37 С(СН ) 40В. Мф-Рде-Бутилоксикарбонил -тирозил-Р-аланилглицил-йф-метил -Фенилаланил-йф-метилметиониламид,К смеси 5 мл ледяной уксусной кис лоты 1 мл аниэола и 1 мл триэтилсилана добавляют 1,4 г (0,0033 моль) продукта части Б. Через смесь пропускают безводный хлористый водород в течение 30 мин, затем реакционную смесь разбавляют эфиром. Образовавшийся осадок выделяют и сушат (1,1 г), затем растворяют40 мл диметилформамида. К охлажденной до ОсС реакционной смеси добавляют.1,27 г (0,0031 моль) продукта, получение которого описано в части Д примера 1, 0,420 г (0,0031 моль) оксибенэотиазола и 0,640 г (О, 0031 моль) .дицик-, логексилкарбодиимида. Через 10 мин добавляют 0,43 г (0,0031 моль) три- БО этиламина и перемешивание продолжа" ют при ОфС 2 ч и при 4 фС - 48 ч.Образовавшийся осадок отфильтровывают и Фильтрат концентрируют в вакууме до сиропа, который затем растворяют в 65 этилацетате. Раствор последовательнопромывают 1 И раствором бикарбонатанатрия, водой, холодной 0,75 й лимонной кислотой и водой, а затем сушатнад сульфатом магния, фильтруют ифильтрат концентрируют .в вакууме дополучения 2,0 г сырого продукта.Продукт растворяют в хлороформе,раствор вносят в колонку (Зх 50 см)с силикателем и продукт элюируютхлороформом, а затем смесью хлороформаи метанола (9:1). Фракции, содержащиецелевой продукт, объединяют, концентрируют в вакууме, получают 1,1 г(47 Ъ) некристаллического целевогосоединения.Найдено,%: С 59,01; Н 6,78;й 11,58,СрНщфэ 5 ( 714, 88 ),Вычислено,Ъ: С 68,80; Н 7,05,й 11,76Ж. Трехводный хлоргидрат -тироэил-аланилглицил-йф-метил-Фенилаланил-й-метилметиониламида,К смеси 10 мл ледяной уксуснойкислоты и 0,5 мл аниэола добавляют0,70 г (0,001 моль) продукта, описанного в части В. Через смесь в течение 20 мин пропускают безводный хлористый водород. Затем реакционнуюсмесь охлаждают и лиофилизируют дополучения 0,678 г гигроскопическогоцелевого соединения.Найдено,%: С 51,13; Н 6,.97;М 11,72,С;оНцй 05 СЮЗНО (705,23)Вычйслено,Ъ: С 51,08; Н 7,0;й 11,91,Анализ аминокислот: Найдено ТУГ1,03; АЦа 1,01; Сйу 0,96.П р и м е р 5. Приготовлениямоноацетата,25-хлоргидрата -тирозил-О-аланилаланилФенилаланил-Мф-метилметиониламида.А. Бензил-й-аее -бутилоксикарбонил-бензилтирозил-О-аланил-алината.К раствору 3,19 г (0,010 моль)п-толуолсульфонатной соли бенэилалината в 30 мл безводного диметилформамида добавляют 4,43 г (0,010 моль)продукта описанного в части Б примера 1. Смесь охлаждают до ОС и добавляют к ней 1,12 г (0,010 моль) ОАВСО,а затем через 10 мин.2,135 г(0,010 моль) оксибенэотазола и2,06 г (0,010 моль) дициклогексилкарбодиимида. Полученную смесь перемешивают 2 ч при ОоС и 48 ч при комнатной температуре. Образовавшийсяосадок отфильтровывают и Фильтратупаривают в вакууме до сиропа.Сироп растворяют в этилацетате ираствор промывают последовательно1 М раствором бикарбоната натрия,водой, холодной 0,75 М соляной кислотой и водой. Органическую фазусушат нгд сульфатом магния, фильтруют.60 фильтрат концентрируют в вакууме иполучают остаток, который не кристаллизуется из этанола или эфира.При разбавлении эфирного растворапетролейным эфиром получают гель,который фильтруют и сушат в вакууме.Сырой аморфный продукт (4,0 г) вносят в колонку 350 см с силикагелеми продукт элюируют хлороформом,затем смесью хлороформа и метанола(9,75 : 0,25). Объединяют Фракции,содержащие целевой продукт,элюатупаривают в вакууме, получают сиропообраэный остаток. Этот остатокрастворяют в эфире и при добавлениик раствору петролейного эфира получают 3,0 г (50 Ъ) целевого соединения в виде аморфноготвердоговещества; т.пл. 100-104 С.Найдено,%: С 67,56; Н 6,60;М 7,16.СзАНо МЬ От (603 г 72)Вычислено,Ъ: С 67,64; Н 6,85,М 6,96.Б. М -щреа-Бутилоксикарбонилтирозил-аланил-.-аланил.К 5 мл безводного диметилформамида добавляют 2,9 г (0,0048 моль)продукта, описанного в части А.За-тем к смеси добавляют 1,0 г 5-ногопалладия на угле и 50 мл этанола,В течение б ч в смесь вводят водород при атмосферном давлении и комнатной темпер/туре, Затем реакционный сосуд продувают азотом, отфильтровывают катализатор и фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и раствор разбавляют эфиром. Образовавшийся осадок отфильтровывают и сушат в вакууме, получают 1,5 г (74) целевогосоединения в виЕе аморфного твердого вещества; сь(= 25,9 (С = 5,хлороформ),Найдено,Ъ; С 56,80; Н 9,95;М 9,81,СНМЭ 0( 4 2 34 7 ),Вычислено,Ъ: С 56,73; Н 6,90;М 9,92.В. М -щрегп-Бутилоксикарбоиил-.- )(приготовлен, как описано в части 3примера 1) охлаждают до ООС и добавляют к ней 0,28 мл (0,002 моль)триэтиламина. Реакционную смесь перемешивают 10 мин и .добавляют к ней0,846 г (О, 002 моль) продукта, описанного в части Б, затем 0,270 г(0,002 моль) оксибензотиаэола и0,412 г (0,002 моль) дициклогексилкарбодиимида. Полученную смесь перемешивают 2 ч при ООС и 48 ч прикомнатной температуре. После повторного охлаждения до ОфС смесь фильт 5 О 15 20 25 30 35 40 45 50 руют и Фильтрат концентрируют в ваку"уме. Остаток растворяют в этилацетате и раствор промывают последова"тельно 1 М раствором бикарбонатанатрия, водой, холодной 0,75 М ли"монной кислотой и водой. Органичес"кую Фазу сушат над сульфатом магния,фильтруют и фильтрат концентрируютв вакууме, получают 1,6 г сырогопродукта. Продукт растворяют в хлороформе и помещают на две пластинкидля анализа толстослойной хроматографией, Проявление ведут в смесихлороформ и метанол (9:1), Основныеполосы вырезают из каждой пластиныи продукт выделяют из силикагеля,экстрагируя смесью хлороформа и метанола. Элюат (1,3 г) растворяют,вновь наносят на одинарную пластинкудля толстослойной хроматографии и получают 1,0 г (70) целевого соединения в виде аморфного твердого вещества;с -25,бо (С = 0,5, метанол).Найдено, С 58,60; Н 6,87;М 11,53.СЗН 5 оМ О 85 ( 714, 88),Вычислейо,Ъ: С 58,80, Н 7,05;М 11, 76.Г. Моноацетат хлоргидрата-тироэил-аланилаланил-.-Фенилаланил-М-метил-.-метиониламида.Через смесь иэ 5 мл ледяной уксусной кислоты, содержащей 0,5 мланиэола,и 0,880 г (0,0011 моль) продукта, описанного в части В, барботируют хлористый водород в течение 30 мин, затем реакционную смесьохлаждают и лиофилизируют. Получают0,704 г целевого соединения;с, - 16,2 о (С = 0,5, метанол),Найдено,Ъ: С 53,48; Н 6,47;М 11,62; СР 6,50,СН 40 51, 25 Н СР С тН О.Э (719, 14)Вычйслено,Ъ: С 53,43; Н 6,45;М 11,68; СВ 6,16.Анализ аминокислоты: Найдено Туг1,00; Аа 1,99; РЬе 1,01,П р и м е р б. Приготовлениеацетата .-тирозил-О-аланилглицил-.- -фенилаланил-С-М-метил-этилцистеиниламида.А. Дициклогексиламиновая сольМ -щЕа-бутилоксикарбонил-этилцистеина,К 400 мл диметилформамида добавляют 50 г (0,336 моль) .-(5-этил)- -цистеина, а затем тетраметилгуанидин (44,8 мл, 0,336 моль) и дициклогексиламин (66,8 мл, 0,336 моль).После этого по каплям при перемешивании добавляют горем -бутиловыйэфир азидомуравьиной кислоты (68 мл,0,50 моль). в течение 1 ч и смесьпродолжают перемешивать в течение48 ч при комнатной температуре.Выпавший в осадок аэид дициклогексиламмония отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток