Способ получения экзотоксина а pseudomonas aeruginosa
Формула | Описание | Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Номер патента: 1596770
Авторы: Кузнецова, Михайлова, Шаймухаметов
Формула
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭКЗОТОКСИНА А PSEUDOMONAS AERUGINOSA, включающий культивирование продуцента на полусинтетической питательной среде с добавлением 7,5% дрожжевого диализата с последующим осветлением бактериальной суспензии, очисткой и концентрированием экзотоксина ультрафильтрацией, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и повышения степени очистки целевого продукта, перед культивированием питательную среду подвергают ультрафильтрации на полых волокнах с порогом отсечения 15 кДа, осветление бактериальной суспензии проводят микрофильтрацией на капроновых мембранах, а очистку и концентрирование ультрафильтрацией осуществляют на тех же полых волокнах в режиме диафильтрации.
Описание
Цель изобретения упрощение способа получения экзотоксина А синегнойной палочки и повышение степени очистки целевого продукта.
Изобретение заключается в том, что предварительная очистка питательной среды, а также очистка и концентрирование токсинсодержащей жидкости осуществляются с применением баромембранных методов.
П р и м е р 1. Полусинтетическую питательную среду, имеющую следующий состав: 0,3% KH2PO4, 0,2% (NH4)H2PO4, 0,3% цитрата натрия, 0,4% цитрата аммония, 0,0001% FeSO4.7H2O, 1% молочной кислоты, 0,001% лактата кальция, 7,5% диализата дрожжей, 0,2% глюкозы, содержание белка 280 мкг/мл, объем 10,5 л, при помощи перистальтического насоса подают в ультрафильтрационный разделительный аппарат АР-2, давление на входе 0,1-0,15 МПа, и собирают пермеат, который используют в качестве питательной среды для культивирования, содержание белка в среде 220 мкг/мл, объем 10 л.
Полученную после культивирования токсинсодержащую культуральную жидкость осветляют методом микрофильтрации на плоскокамерных разделительных аппаратах, заправленных микропористыми капроновыми мембранами "Мифил" с диаметром пор 0,2 мкм.
Осветленную токсинсодержащую жидкость при помощи перистальтического насоса подают в ультрафильтрационный разделительный аппарат АР-2, заправленный полыми волокнами ВПУ-15 с порогом пропускания 15 кДа. Рабочее давление в аппарате не должно превышать 0,2 МПа, полученный пермеат отбрасывают, а концентрат (объем 1 л, белок 3000 мкг/мл) подвергают двухкратной диафильтрации на этих же аппаратах диафильтрации на этих же аппаратах с пятикратным объемом физиологического раствора, полученный пермеат отбрасывается, а концентрат представляет собой очищенный концентрированный экзотоксин А синегнойной палочки в объеме 1 л с содержанием белка 1100 мкг/мл. Поэтапная характеристика способа представлена в таблице.
Выбор мембран с порогом отсечения 15 кДа объясняется строением молекулы экзотоксина А, которая состоит из двух субъединиц с молекулярной массой 42 и 25 кДа, соединенных дисульфидной связью. Поскольку в процессе очистки эта молекула может легко разрушиться из-за непрочности дисульфидной связи, применять мембраны с большим размером пор нецелесообразно ввиду возможных потерь целевого продукта.
Таким образом, предлагаемый способ является менее трудоемким за счет использования процесса ультрафильтрации для очистки питательной среды и открывает возможность ограничиться применением баромембранных методов разделения для очистки и концентрирования препарата, позволяет получить максимальное количество экзотоксина А без содержания компонентов питательной среды и сокращает время очистки. Выход целевого продукта составляет 84,2% от исходного, что свидетельствует о высокой степени очистки экзотоксина А.
Изобретение относится к микробиологии и касается способа получения экзотоксина А Pseudomonas aeruginosa. Цель изобретения - упрощение способа и повышение степени очистки целевого продукта. Способ включает проведение процесса на полусинтетической питательной среде с добавлением 7,5% дрожжевого диализата. Среду предварительно очищают от высокомолекулярных компонентов ультрафильтрацией на полых волокнах ВПУ-15. Культивирование проводят в ферментере в условиях аэрации и перемешивания. Полученную после культивирования токсинсодержащую культуральную жидкость осветляют методом микрофильтрации на микропористых капроновых мембранах с диаметром пор 0,2 мкм. Осветленную токсинсодержащую жидкость подвергают очистке и концентрированию в режиме ультра-диафильтрации с применением тех же волокон. Степень очистки экзотоксина от балластных примесей питательной среды 99,9%, выход целевого продукта составляет 84,2% от исходного. Способ технологичен и воспроизводим в производственных условиях. 1 табл.
Рисунки
Заявка
4654142/13, 22.02.1989
Уфимский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова
Михайлова Н. А, Шаймухаметов Ф. А, Кузнецова Т. Н
МПК / Метки
МПК: C12P 1/04
Метки: aeruginosa, pseudomonas, экзотоксина
Опубликовано: 09.06.1995
Код ссылки
<a href="https://patents.su/0-1596770-sposob-polucheniya-ehkzotoksina-a-pseudomonas-aeruginosa.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ получения экзотоксина а pseudomonas aeruginosa</a>
Способ предварительной обработки культуральных жидкостей мицерина и колимицина
Номер патента: 202470
Опубликовано: 01.01.1967
Авторы: Гвоздев, Душкин, Жуковска, Рабинович, Скворцова
МПК: C12P 19/54
Метки: жидкостей, колимицина, культуральных, мицерина, предварительной
...местных и полостпых средств для лечения пагноительных процессов, Этот способ заключается в обработке культуральных жидкостей алюмокалиевыми квасцами.Оп не обеспечивает достаточно эффективной коагуляции примесей, затрудняющих фильтрование культур альной жидкости, вследствие чего скорость фильтрования невелика. В то же время большое количество коагулянта приводит к увеличению неактивных примесей в фильтрате и значительным потерям антибиотиков на стадии ионообменной сорбции,Предложено для увеличения скорости фильтрования и выхода целевого продукта в культуральную жидкость кроме алюмокалиевых квасцов вносить также тринатрийфосфат или смесь фосфорной кислоты и соды. Это снижает стоимость производства антибиотиков мицерина и колимицина...
Способ очистки органических жидкостей
Номер патента: 666178
Опубликовано: 05.06.1979
Авторы: Андрианов, Дмитриев, Лапковская, Макарова, Меломед, Семенова
МПК: C07F 7/20
Метки: жидкостей, органических
...признаком предлагаемого спо. соба является использование в качестве ионообменной смолы ЗИ восстановительного типа, содержащего висмут или медь в нулевой валентнос 15 ти. Очищенные жидкости содержат сй ектральныеколичества указанных примесей металлов.После проскока в фильтрат очищаемого метал. эОла может быть проведена регенерация образца ЭИобработкой химическими восстановителями и(или) промывкой органическими растворителями,Для достижения максимального эффекта очистки важно обеспечить возможно более полный контакт очищаемой жидкости с активной фазой ЭИ,Такой контакт облегчается благодаря следующимприемам: обезвоживание ЭИ обычными методами(этот прием является обязательным при очисткежидкостей, не смешивающихся с...
Способ дренирования жидкости
Номер патента: 515775
Опубликовано: 30.05.1976
Автор: Усольцев
МПК: C10G 33/06
Метки: дренирования, жидкости
...клапаном 6, Приямок 4 соединентрубопроводом 7 с пространством гыше уровня раздела фаз.Дренирование жидкости по предлагаемомуспособу осуществляется следующим образом.15 В исходном состоянии, тарельчатый клапан6 открыт, а запорный орган 3 на дренажнойтрубе 2 закрыт, и разделительная диафрагма5 находится в крайнем нижнем положении.Дренируемая жидкость, осаждаясь на дне ем 20 кости, поступает через клапан 6 в приямок 4и вытесняет целевой продукт за счет разностиплотностей по трубопроводу 7 в пространствовыше уровня раздела фаз.При наполнении приямка 4 дренируемой25 жидкостью разделительная диафрагма 5 занимает крайнее верхнее положение. При этомоткрывают запорный орган 3 на дренажнойтрубе 2, чем сообщают приямок с...
Способ очистки жидкостей от взвешенных частиц
Номер патента: 595900
Опубликовано: 28.02.1978
Авторы: Воротынцев, Гусев, Девятых
МПК: B01D 3/00
Метки: взвешенных, жидкостей, частиц
...вестны т дениц в ющих а Пример осуществления способа.Дистилляции подвергают изоиропило вый спирт, ацетон и бензол с частицамигермания размсром 0,02 - 1 мкм. 11 сходнос содержание дисперсной твердой фазы составляет 10гмл.11 а чертеже изображена схема установки, осуществляющей предлагаемый способ.Пар, образукнцийся в кубе 1, подвергают воздействик тсмпературного градиента между;вумя концентрическими, вертикаль ио расположенными поверхностями, образо ваииымп трубкой 2 с диаметром 30 мм иПродукт Изоиропиловьй спирт Условия проведения процесса.20,1 1 с 10 5 0,5 0,5 0,6 0,05 0,05 0,08 3трубкой 3 с диаметром 26 мм прп высоте, равной 120 мм. Одна пз поверхностей имеет температуру на 1 - 3 С ниже температуры кипения, а другая - на 140 - 300 С...
Способ очистки жидкости
Номер патента: 623564
Опубликовано: 15.09.1978
Авторы: Колесников, Носова, Половников, Соколова
МПК: B01D 37/00, C02F 1/00
Метки: жидкости
...л/час(соответственно линейная скоростьо3-15 м/час) прн температуре до 100 С.Обезжелезиванию подвергали конденсат с содержанием железа 280-1100 мкг/кг. Содеуьжание железа в паровом конденсате определяли сульфосалицилатным методом нафотокалориметре ФЭКс точностью до в 0,14 мкг/кг,ды. Использование антрацита раэм 0,5-1,2 мй, кокса (Ор 8 1, 5 мм ) тивированного углем или сульфоуг позволяет снизить содержание же паровом конденсате только на 40 скорости фильтрации 10-12 м/ча Более глубокая очистка кондея елеза (до 50 мкг/кг) возможна ользовании в качестве фильтрующз 62356териала целлюлозы в виде слоя толщиной30-50 мм. Эффективность обезжелеэивання при этом составляет 50-70% присодержании железа в исходном конденсате не менее 500 мкг/кг,1100...
Предыдущий патент: Способ изготовления концевого режущего инструмента
Следующий патент: Дренажная система размещенного на самолете бака с криогенным веществом
Случайный патент: Запоминающее устройство с блокировкой неисправных элементов памяти