Способ получения лейкоцитов из крови
Формула | Описание | Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Формула
Способ получения лейкоцитов из крови путем обработки пробы крови или ее фракций осадителем, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, обработку пробы проводят 0,12 0,15%-ной метилцеллюлозой в соотношении 1 2,5 3,0 при температуре 25 30oС.
Описание
Цель изобретения повышение выхода жизнеспособных лейкоцитов за счет обработки крови или ее фракций 0,12-0,15%-ным раствором метилцеллюлозы в соотношении 1:2,5-3,0 при 25-30oС.
Примеры реализации способа.
Пример 1. Приготавливают 6 л 0,12%-ного раствора водорастворимой метилцеллюлозы на 0,9%-ном растворе хлористого натрия. Раствор стерилизуют в автоклаве при 0,5-0,6 атм в течение 30-35 мин и охлаждают до (26
1)oС.Донорскую кровь в объеме 4 л во флаконах центрифугируют при 1500 об/мин в течение 20 мин. Отсасывают плазму, а осадки крови в объеме 2 л переносят в бутыль и добавляют 6 л водорастворимой метилцеллюлозы. Соотношение крови с осадителем 1:3,0. Все перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 30-40 мин.
После отстоя надосадочную, содержащую взвесь лейкоцитов жидкость отсасывают и центрифугируют при 1500-2000 об/мин в течение 20-25 мин. Недостаточную жидкость сливают, а осадок лейкоцитов суспендируют средой 199 с гепарином и ведут подсчет выхода лейкоцитов, количество эритроцитов на один лейкоцит. Выход лейкоцитов в данном примере составляет 88% а количество эритроцитов 4 на 1 лейкоцит, что позволяет считать лейкоциты чистыми и не требует использования гемолитика.
Пример 2. Приготавливают 5 л 15%-ного раствора водорастворимой метилцеллюлозы на 0,9% растворе хлористого натрия. Раствор стерилизуют в автоклаве при 0,5-0,6 атм в течение 30-35 мин и охлаждают до (29
1)oС.Донорскую кровь в объеме 4 л во флаконах центрифугируют при 1500 об/мин в течение 20 мин. Отсасывают плазму, а осадки крови в объеме 2 л переносят в бутыль и добавляют 5 л раствора метилцеллюлозы (соотношение крови с осадителем 1:2,5), перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 30-40 мин. После отстоя надосадочную жидкость, содержащую взвесь лейкоцитов, отсасывают и центрифугируют при 1500-2000 об/мин в течение 20-25 мин. Надосадочную жидкость сливают, а осадок лейкоцитов суспендируют средой 199 с гепарином и ведут подсчет выхода лейкоцитов и количество эритроцитов на один лейкоцит. Выход лейкоцитов в данном примере составил 90% а количество эритроцитов на один лейкоцит не превышало 5. Интерферон, получаемый на лейкоцитах, выделенных из донорской крови или ее фракций, полностью соответствует всем требованиям, предъявляемым к человеческому лейкоцитарному интерферону.
Выход лейкоцитов: по предлагаемому способу 86-90% по известному способу 35-40%
Количество оставшихся эритроцитов на 1 лейкоцит: по предлагаемому 2-6, по известному способу 6-8.
Для повышения выхода жизнеспособности лейкоцитов осадок крови после отделения плазмы обрабатывают 0,12-0,15%-ным раствором метилцеллюлозы на 0,9%-ном растворе хлористого натрия в соотношении 1:2,5-3 при температуре 25-30oС. Выход лейкоцитов 86-90%, количество оставшихся эритроцитов на 1 лейкоцит 2-6.
Заявка
4064195/14, 17.02.1986
Уфимский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова
Кулагин В. Ф, Юсупов В. Г, Галеева Э. Г
МПК / Метки
МПК: A61K 35/14
Метки: крови, лейкоцитов
Опубликовано: 20.11.1996
Код ссылки
<a href="https://patents.su/0-1361757-sposob-polucheniya-lejjkocitov-iz-krovi.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ получения лейкоцитов из крови</a>
Способ определения миграционной способности лейкоцитов периферической крови
Номер патента: 1076090
Опубликовано: 28.02.1984
Авторы: Арион, Каргина, Москвина
МПК: A61B 10/00
Метки: крови, лейкоцитов, миграционной, периферической, способности
...диаметром 2 см по 1 мл полученного 1 агара концентрацией сыворотки 10. Высота агара в камерах 3 мм. После застывания агара камеры переворачивают вверх дном и ставят в эксикатор с 5-ным содержанием СО. Эксикатор помещают в холодную камеру (14 С) . 1Эксперимент проводят на свежей 55 крови одного донора, собранной в про бирку с консервантом гепаринов.Кровь выдерживают при комнатной теь- пературе 30-40 мин, чтобы осели эритроциты. Плазму, содержащую лейкоци ты отбирают и центрифугируют приУо1000 об/мин 5 мин при 4 С.Осадок, содержащий лейкоциты, трижды отмывают средой 199. осадок лейкоцитов после заключительной отмывки ресуспендируют в среде 199, подсчитываютконцентрацию клеток и доводят еедо 3 10 клетокмл.В охлажденных агаровых блоках...
Способ выделения лейкоцитов из крови
Номер патента: 1108358
Опубликовано: 15.08.1984
Авторы: Коваленко, Мельников, Олишевский
МПК: G01N 33/48
Метки: выделения, крови, лейкоцитов
...ступенчато из положения наклона под углом 45 до вертикального, а термостатирование проводят 20-40 мин.П р и м е р. У больного забирают из вены 10 мт 1 крови в пластиковый шприц, содержащий гепарин, для достижения конечной концентрации 50 ед/мл. Смесь выливают в стериль.ные пробирки емкостью 20 мл и помещают в термостат при 37 С. Пробиркиоразмещают с наклоном в 45 О на стан 08358 2дартных подставках. Через 30 минпри достижении видимой границыраздела отбирают первую порцию надосадочной жидкости плазмы и центрифугируют ее при 150 в течение10 мин. После отделения клеток ихпомещают в среду 199, плазму выпивают в пробирки, находящиеся в термостате, встряхивают, перемешивая 1 О с имевшимся в них остатком, и размещают в термостате под углом...
Способ выделения лейкоцитов из крови
Номер патента: 1649444
Опубликовано: 15.05.1991
Авторы: Курилова, Моногарова, Слюсарь, Сохин, Талакин
МПК: G01N 33/531
Метки: выделения, крови, лейкоцитов
...в зависимости от задач исследования. Выделенного количества лейкоцитов достаточно1649444 Результаты выделения лейкоцитов из гепаринизированной крови предлагаемым и известным способомИсходное содержание лейкоцитов в 1 мкл кровипредлагаемого известного С - ов С,И,Ю - ов В,П.В, - ев Н,В,П - на Н,П. Б - я И.Н. Б - н В,В. К - ко В.И. П-ло В.С,9800 8200 9400 8600 8200 10500 9800 11000 13900 11500 12900 12000 11400 14000 13100 14100 3200 2100 2500 3100 2000 3500 3000 32 ОО 4 0,01 (0,01 (0,01 ( 0,010,01 ( 0,01 (0,01 (0,01 Составитель Г, КрюковаТехред М.Моргентал Корректор Т. Колб Редактор С,Лисина Заказ 1519 Тираж 420 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5...
Способ определения неспецифической иммунологической активности полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови
Номер патента: 1174855
Опубликовано: 23.08.1985
Авторы: Дратвин, Кочемасова, Лобашевский
МПК: G01N 33/48
Метки: активности, иммунологической, крови, лейкоцитов, неспецифической, периферической, полиморфноядерных
...метиленовым синим 15 мин втермостате при 37 С.4. Промывание в двух порциях дистиллированной воды,5. Вьгсушивание.6. Заключение в полиэтиленгликоль. Мембраны изучают методом световой микроскопии. Клетки, налипшие на обратные стороны мембран, подсчитывают в 10 произвольно выбранных полях зрения. Путем перемножения количества клеток в одном поле на общее их полей зрения количество на всей рабочей поверхности фильтра, получают абсолютное значение. По разнице между количеством полиморфноядерных лейкоцитов, налипших на обратную сторону мембраны с диаметром пор З,О:+ 0,6 мкм, и количеством полиморфноядерных лейкоцитов, налипших на обратную сторону мембраны с диаметром пор 5,0. + 1,0 мкм, определяют количество высокоадгезивных клеток в...
Способ определения величины синтеза днк в лейкоцитах периферической крови
Номер патента: 1718122
Опубликовано: 07.03.1992
Авторы: Васильев, Гиновкер, Дроздов, Кашуба, Немировский
МПК: G01N 33/60
Метки: величины, днк, крови, лейкоцитах, периферической, синтеза
...точности - достигается за счет определения включения Н -тимидина в двух образцах, в первом Н- тимидин добавляют до инкубации, а во второй - после ин кубации. осаждают центрифугированием при 10000 д в течение 5 мин. Осадок суспендируют в 100 мкл 1 н, йаС 1. Солюбизированный хроматин прогревают в течение 15 мин на кипящей водяной бане для депротеинизации ДНК. Денатурировавший белок осаждают центрифугированием в течение 5 мин при 10000 д. Псоле этого к супернатанту добавляют 50 мкл холодного ЗОО-ного раствора ТХУ и оставляют на 30 мин при 0 С для выпадения осадка, содержащего нуклеиновые кислоты, который собирают на стеклянные фильтры фирмы Ватман 6 Е/С. Осадок на фильтрах три раза промывают 2 О/о-ным НС 104, порциями по 2 мл, 96...
Предыдущий патент: Бис-(3, 5-ди-трет-бутил-4-оксифенил)-алкил-сульфиды в качестве термостабилизаторов полиэтилена
Следующий патент: Противоточный ионитный фильтр
Случайный патент: Устройство для стабилизации переменного тока