Способ прогнозирования течения реконвалесцентного периода острого вирусного гепатита в у детей

Номер патента: 1802324

Авторы: Шестакова, Станевич, Учайкин, Блюгер, Векслер

Скачать ZIP архив.

Текст

(я)5 6 01 М 33/53 ИЕ ИЗОБРЕТЕНИ Изобрете сается облас вопросов диа ковалесценц та Ь (ОВГВ). Целью яв новоти диагнос Способ осрмен ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(71) Рижский медицинский институт(56) Приказ МЗ СССР М 752 от 1981 г, полечению и диспансеризации детей ВГВ.(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕН)Я РЕКОНВАЛЕСЦЕНТНОГО ПЕРИОДАОСТРОГО ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА В УДЕТЕЙ(57) Изобретение относится к медицине, вчастности к гепатологии, и может быть использовано для прогнозирования теченияреконвалесцентного периода острого гепатита у детей, Цель - повышение точностиспОсоба, Для этого в первые 3 - 6 месяцапериода реконвалесценции определяют вение относится к медицине, кати гепатологии, в частности ностики течения периода реии острого вирусного гепатиляется повышение специфичтики.уществляется следующим об раЭом,Методика постановки имм ного анализа В лунки платы в ного в фосфатно-сол 7,4 липопротеида пе инкубируют 10 - 16 ча Отклеивают пла антигена ФСБ рН 7,4носят 100 мл разведеневом буфере (ФСБ) рН цени человека (ЛПЧ) и сов при +4 - +100 С, ту от несвязавшегося ; Во всех последующих личину титров антител 9 М класса к липопротеиду печени человека, при этом посадку липопротеида на полистироловые планшеты проводят в фосфатно-солевом буфере рН 7,4, при получении первичного комплекса антиген-антитело сыворотку больного раститровывают с шагом 1/3, инкубируют 10 - 14 ч при температуре 4 - 10 С, отмывку проводят фосфатно-солевцм буфером рН 7,4, в качестве конъюгата используют иммуноглобулины класса 9 М, меченные пероксидаэой, связывание конъюгата с антителами проводят в 1 растворе овечьего сывороточного альбумина, приготовленного на фосфатно-солевом буфере рН 7,4, при титрах антител 1,3600 - 1:10800 диагностируют благоприятное течение реконвалесценции, а при титрах 1:400-1:1200 диагностируют неблагоприятное течение реконвалесценции вирусного гепатита В,тадиях отмывку проводят тем же реагеом. В лунки платы помещают по 100 мл предварительно разведенной в ФСБ рН 7,4 от 1:400 до 1:10800 (с шагом 1/3) исследуемой сыворотки больного и отрицательного контроля (пул сывороток здоровых доноров). Инкубируют 10 - 16 ч при 4 - 10 С.Удаляют избыток образцов из лунок, Плату отмывают.В лунки вносят 100 мкл конъюгата (иммуноглобулинов; меченных пероксидазой), разведенного в растворе 170 бычьего сывороточного альбумина (БСА), приготовленного на ФСБ рН 7,4. Инкубируют 1 при 37 С.Удаляют избыток конъюгата из лунок, плату отмывают.Помещают в лунки по 100 мкл субстратной смеси (перекиси водорода и 5-аминосалициловой кислоты). Инкубируют плату 1 чпри комнатной температуре.Результаты определяют на фотометрепри длине волны 450 мм, Если титр антителснижается ниже 1:3600 (1:1200, 1;400, меньше 1;400) это показатель неблагоприятноготечения реконвалесцентного периода. Еслититр повышается выше 1:3600 (1:10800,1;32400) - это указывает на благоприятноетечение периода реконвалесценции ОВГВ,Положительный эффект, достигаемый. при использовании изобретения, заключается в повышении достоверности диагностики благоприятного и неблагоприятноготечения периода реконвалесценции приОВГВ у детей,Было обследовано 33 ребенка больныхВГВ, у которых в результате диспансерногонаблюдения по совокупности общепринятых клинико-биохимическим критериям, выявили благоприятный (21 ребенок) инеблагоприятный (12 детей) течение периода реконвалесценции ВГВ,Как следует из данных, ложноположительное повышение показателей активностиАлАТ при благоприятной реконвалесценцииотмечается в 9 из 21 случая, т.е. в 43 ч= 11 ф ,а ложноотрицательные показатели активности АлАТ при неблагоприятной реконвалесценции отмечается в 5 из 12 случаев,т.е. ЗЗ + 14 . Следовательно правильныйответ с помощью способа-прототипа былполучен в 20 из 33 случаев, т,е. 60 .ф. 9 .С помощью нового способа, правильныйответ был достигнут в диагностике благоприятного варианта реконвалесцентногопериода в 20 случаев, т.е, в 95;4, а в диагностике неблагоприятного варианта в 11 случаев, т.е, 91 . Таким образом, с помощью нового способа правильный диагноз основных вариантов реконвалесцентного периода был установлен в 31 случаев, т,е, в 93+ 3.В процессе разработки нового способа экспериментально были исследованы следующие этапы его осуществления:Оптимальные условия связывания антигена путем "пассивной" адсорбции были достигнуты при использовании фосфатносолевого буфера (ФСБ) рН 7,4, Инкубация при+4 - +10 С в течение 10-14 часов сведений к минимуму колебания в содержании связанного антигена, что дает хорошую воспроизводимость результатов;при использовании физиологического раствора с добавкой 0,05; твинсвязы 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 вания антигена с подложкой не происходило,Применение 0,01 М карбонатного буфера рН 9,5 требовало большего, чем в случаес ФСБ количества антигена (в 2,5 раза), чтоприводило к увеличению числа ложноположительных результатов, появлению фона.Таким образом, оптимальных результатов при связывании антигена с поверхностью платы можно достигнуть лишь прииспользовании ФСБ рН 7,4.После сорбции для отмывки от избыткаантигена наиболее приемлемым оказалсяФСБ рН 7,4. Использование в качестве добавки к нему твинили замена его физиологическим раствором приводили кчастичному снятию антигена с подложки,что приводило к увеличению фона и снижению воспроизводимости анализов.Предварительное разведение исследуемых образцов до 1:400 с последующим шагом титрования позволяет надежнопроводить инситирование антител в подходящем диагнозе концентраций с достаточной точностью определения.Шаг титрования 1/2 не позволяет с достаточной степенью точности проводитьдифференцию образцов,Шаг титрования 1/5 приводит к сужению возможности точного определенияпрогностически значимых титров,Исследуемые образцы инкубировали10 - 14 часов при +4 - +10 С что позволилоснизить уровень неспецифического связывания увеличить чувствительность метода,П р и м е р 1. Ребенок П., 4-х лет,М дисп,карты 1721, с диагнозом вирусногогепатита В, В периоде реконвалесценциижалобы отсутствуют, размеры печени в пределах нормы, При определении титра антител к протеидному антигену печени класса9 М, он был равен 1:3600, что послужилообоснованием для диагноза благоприятного варианта течения реконвалесценциибольной. Однако активность аланинаминотрансферазы (АлАТ) выявилось 70усл,ед. (норма до 50 усл.ед,), что бы далооснование предполагать неблагоприятный вариант течения реконвалесценции.Последующим диспансерным наблюдением в течение полугода установлено отсутствие субъективных и объективных проявленийналичия патологического процесса печени, вчастности нормализовалась АлАТ, тимоловаяи сулемовая пробы, Ребенок признан здоровым. Тем самым подтверждена правильностьдиагноза благоприятного варианта рекон- .валесценции после перенесенного вирусного гепатита В.1802324 С поьдиаглесц12 де ощью способа-прототипа правильныйоз благоприятного варианта реконвантного периода ВГВ был установлен уей, из 21 ребенка, т.е, только 57 й 11% 40 Составитель Г.Крюкова Редактор В,Трубченко Техред М.Моргентал, Корректор А.ОбручарЗаказ 847 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 П р и м е р 2, Ребенок В., 3 года,1 Ф диспансерной карты 2114, с диагнозомвируного гепатита В, период реконвалесценцйи,Ребенок, кроме ускоренной усталости, 5жалобы не предъявлял, печень - нижнийкрай Ье выступал на 0,5 см, по правой сосковой л нии.:ри определении титра антител к протеидому антигену класса М, он оказался 10повышенным, равным 1:10000, На этом основании был выставлен диагноз - благоприятный вариант течения реконвалесцентногопери да болезни,днако активность АлАТ - 190 усл,ед. 15(норМа до 50 усл,ед.), Это дало повод предположить диагноз неблагоприятного варианта влечения периода реконвалесценции.Последующим диспансерным наблюденим в течение 7 месяцев была отмечена нормализация активности АлАТ принормальном содержании проведенныхколлдидно-осадочных проб и билирубина,на фФне отсутствия субъективных и объективных данных патологического процесса. 25Таким образом, была подтверждена достоверность диагноза благоприятного вариантарековалесцентного периода у ребенка после перенесенного ВГВ, поставленного спомоцью нового способа. 30Гоказано, что диагноз благоприятногдрековалесцентного периода ВГВ был подтвержден в результате длительности 6 - 8месяцев диспансеризации детей с учетомотсутствия клиника-биохимических признаков активности патологического процесса,случаев, у которых активность АлАт находилась в пределах нормы, У остальных 9 реконвалесцентов активность АиАТ находилась выше нормы (65 - 195 усл,ед.). При учете титра антител к протеидному антигену печени класса 1 дМ, правильный ответ получен в 15 иэ 21 случая, 14,4%, т,е. Р0,5. Только при использовании нового способа путем определения антител к протеидному белку печени класса 1 дМ в 20 случаев был правильно диагностирован благоприятный вариант реконвалесценции ВГВ.Формула изобретения Сгтособ прогнозирования течения реконвалесцентного периода острого вирусного гепатита В у детей путем исследования сывороток крови больных, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности способа, в первые 3 - 6 месяцев периода реконвалесценции определяют величину титров антител 1 дМ класса к липопротеиду печени человека с помощью иммуноферментного анализа, при этом посадку липопротеида на полистироловые планшеты проводят в фосфатно-солевом буфере с рН 7,4, сыворотку больного рэститровыванную с шагом 1/3, инкубируют 10 - 14 ч при температуре 4 - 10 С, отмывают фосфатно-солевым буфером с рН,4, в качестве коньюгата испол ьзуют иммуноглобулин ы класса д М, меченные пероксидазой и связывание коньюгэта с антителами проводят в 1%-ном растворе бычьего сывороточного альбумина, приготовленного на фосфатно-солевом буфере с рН 7,4, и при титрах антител 1;3600 - 1:10800 прогнозируют благоприятное течение реконвалесценции, а при титрах 1:400 - 1:1200 прогнозируют неблагоприятное течение реконвэлесценции вирусного гепатита В.

Смотреть

Заявка

4829043, 25.05.1990

РИЖСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

БЛЮГЕР АНАТОЛИЙ ФЕДОРОВИЧ, ВЕКСЛЕР ХАЦКЕЛЬ МОЗУСЕВИЧ, УЧАЙКИН ВАСИЛИЙ ФЕДОРОВИЧ, СТАНЕВИЧ ВАЛДА АВГУСТОВНА, ШЕСТАКОВА ИРИНА КОНСТАНТИНОВНА

МПК / Метки

МПК: G01N 33/53

Метки: гепатита, острого, детей, прогнозирования, реконвалесцентного, вирусного, периода, течения

Опубликовано: 15.03.1993

Код ссылки

<a href="http://patents.su/3-1802324-sposob-prognozirovaniya-techeniya-rekonvalescentnogo-perioda-ostrogo-virusnogo-gepatita-v-u-detejj.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ прогнозирования течения реконвалесцентного периода острого вирусного гепатита в у детей</a>

Похожие патенты