C12N 15/27 — факторы, стимулирующие рост колоний

Номер патента: 1801118

Опубликовано: 07.03.1993

Авторы: Кеннет, Родни, Эдвард

МПК: C12N 15/27

Метки: человеческого, эритропоэтина

...и ТАСАСТААСТТСТТОлигонуклеотиды метят в 5-конце Р, ис 32 пользуя полинуклеотидную киназу и гаммаР-АТР, Удельная активность олигонуклеотидов варьирует между 1000 и 3000 дюйм /ммол олигонуклеотида. Геномную ДНК-библиотеку человека в бактериофаге лямбда подвергают скринингу. Приблизительно 3,5 х 10 фага высевают с плотностью 6000 фага на 150 мм чашку Петри со средой К 2 СУМ и инкубируют при 37 С до тех пор, пока пятна не станут видными, однако маленькими (приблизительно 0,5 мм), После охлаждения при 4 С в течение 1 ч дупликатные реплики переносят на найлоновые мембраны и инкубируют в течение ночи при 37 С на чашках со свежими средами М 2 СУМ, Затем фильтры денатурируют и нейтрализуют в течение 10 мин каждого на тонкой пленке 0,5 Н...