Штамм продуцент биомассы

Союз Советскик Социалистических Республик(22) Заявлено 10.1177 (21) 2541411/28-13 с присоединением заявки Ио -Государственный комитет СССР по аелам нзобретений и открытий(71) Заявитель Институт ботаники им, Н,Г,Холодного ордена Ленина АН,Украинской ССР.54) 11)ТАММ Р 1 апапц 11 па Фе 1 а 11 рев ИВКОВПРОДУЦЕНБИОИАССЦИзобретение относятся к техникеМорфологические признаки, Мляпкаполучения нового штамма путем куль- . гриба 0,5-3.,0 см в диаметре, желтовативирования мицелия штаммов безидио- то-бурая, с тонким краем, выпукломицетов на жидких питательных средах, илиплоскораспростертая; Ножка гриба используемого для приготовления пище. длиной 3,0-7,0 см, .толщиной 0,1- вой или кормовой биомассы,8,0 см, плотная, полая внутри. Споры К"Известны различные штаммы иэ рода гладкие, бесцветные, размер 7,0- Г 1 алпц 1 Ыа че 1 цс 1 рез, способные . 10,0 х 3,0-6,0 мк, Гифы бесцветные,расти на жидких средах в поверхност-.разветвленные, септйрованные, толщиной и глубинной куль-уре (1), .1 О ной 2,0-4,5 мк с многочисленнымиВыход сухого мицелия известного . пряжками, Участки гиф распадаются штамма составляет около 30-40 г нана оидии.100 г использованной глюкозы, при : Культуральные признаки. На сусло- этом культуральный мицелий не облада- агаре колонии белые, войлочные с ет грибным ароматом. : "5 грибным запахом, При старении местаЦелью изобретения является полу- . ми буреют, наблюдается развитие плочение штамма, обладающего специфи довых тел со зрелыми базидиоспорами. ЧЕСКИМ ГРибным ароматом и обеспечИ- , На поверхности жидкого пивного вающего высокий выход культуральногб сусла .(4 о по Баллингу) пушистая воймицелия при культивировании надеше.лочная мицелиальная пленка с приятвых и простых по составу жидкихным грибным ароматом, При длительном питательных средах,выращивании.мицелий местами буреет,Предлагаемый штамм ИБКРвыде- . на поверхности образуются зрелые лен из плодовых тел Г 1 апппц 11 па че 1 и плодовые тела.с 1 рев (зимнего опенка), которые были 25 Ори глубинном вырав 1 ивании на среЬ собраны на пнях листвейных пород в . дах с Пептоибм,минеральной среде с .окрестностях г,Киева, Культура хоа- глюкозойили мелассой И дрожжевым нится на нейтральном сусло-агаре " экстрактом растет в виде мицелиальпри 4 С в коллекции института ботани- иыХ шариков. Толщина гиф 2,0-4,0 мк. ки им, Н,Г,Холодног АН УССР.30 Иицелий обладает грибным ароматом,Ф" азот, пептон, аспарагин, мочевину,Рост в культуре стимулируется , 10добавками растительного происхождения; отвары, кормовых растений, дубо"вой коры и др,Штамм обнаруживает положительнуюреакцию на экстрацеллюларные оксидаэы, отмечено образование протеолитических ферментов.Антагонистические свойства, Проявляет антагонистические свойства-по отношению к штаммам дрожжей Сап- щ 0сна а 1 Ысапя.Штамм Г 1 авгпц 11 п а че 1 цТ 1 ревИБКГиспытан с лабораторных условиях на различных жидких сРедахследующего состава:сусло пивное (4 по Баллингу)при РН 9;среда с пептоном, г/л глюкоза 30,0,пептон 3,0; КНРО+ 2,0; КС 1 1,2;МяБО 4 7 Н О 0,25; вода водопроводная1 л йри РН 9; ЗОминеральная среда с мелассой, г/л:меласса 25,0; (НН, ) ЯО 4 3,0; К ЙРО 41,2; дрожжевой экстракт 2,0; водаводопроводная 1 л при РН 9,0;"йкнеральная среда с глюкозой, г/л: 35гдюкоза Зор ЫН 4 С 1 2 ГО КН 2 РО 4 2,01КС 1 1,2; МАЗО 7 НО 0,25; вода водопроводная 1 л при РН среда 9,0.Гриб Культивируютповерхностнов матрацах и колбах Эрленмейера различной емкости, глубинно - в пробирках на качалке при 200 об/мин и вколбах Эрленмейера на 250-500 мл -"на круговой качалке пои 150 об/мин,Температура инкубации 2 бС, Посевной материал выращивают в колбахна 500 мл с 50 мл среды, На дно колбнасыпают фарфоровые бусы, с помощью"которых"перед посевом измельчают мицелиальную.пленку путем энергичноговстряхивания. Среду инокулируют по- , 0лученной мицелиальной вэвесью в количестве 10-20 объем Ъ,Данные накопления биомассы Г 1 авшц 11 па че 1 Ш 1 рея на минеральной среде с глюкозой при различных начальных значениях РН среды (г/л сухогомицелия) в поверхностной культуреприведены в табл,1,Даннце роста Г 1 апппц 11 па че 1 ит.1 реяна минеральной среде с различными Щисточниками углерода, % к весу мицелия на среде с глюкозой, приведеныб .2е:.мфгиЫЫ" .-(в та л.2,Данные роста Г 1 апппц 11 па че 1 ц 1 реяна минеральной среде с различными 5 источниками азота, % к весу сухогомицелия на среде с БН 4 С 1, приведеныв табл,3.Показатели влияния концентрацииглюкозы на рост гриба Г 1 апппц 11 паче 1 ц 1 рев при гЛубинном культивировании его на минеральной среде приведены в табл,4,Данные роста Г 1 апппц 11 па че 1 ц 1 ревв глубинной культуре при различномсодержании пептона в среде приведеныв табл.5.Данные роста Г 1 ащвц 11 па че 1 ц 1 ревна пивном сусле при различном соотношении объемов среды и суспензиипосевного мицелия, г/л сухого мицелия на 7 сутки культивирования, приведены в табл.б.Показатели влияния СаСОэ на ростГ 1 апппц 11 па че 1 а 1 рев в глубинной культуре поиведены в табл,7..Так как многие высшие грибы приросте на минеральных средах испытывают потребность в витаминах и естественных стимуляторах, таких какэкстракты растений, почвы и т.п.,проведены исследования роста Г 1 авюц 11 па че 1 ц 1 рея на водных (1:1)отварах некоторых, кормовых растений,исходя из того, что применение сельскохозяйственных отходов в средахдля промышленного культивированиягрибов может оказаться достаточноэффективным и более экономичным, чемдобазление чистых витаминов и аминокислот.Данные роста Г 1 апппц 11 па че 1 ц 1 ревна отварах кормовых растений с добавлением .15 г/л.глюкоэы представлены в табл,8.Данные о накоплении биомассы опенка в поверхностной культуре на средес различнымсбдержанием отвара люцерны приведены в табл,9,Исследбвантакже рост штамма зимнего опенка на комплексных средах,где в качестве субстратов используютдешевые отходы пищевой промышленности,а Также гидролизат синеэеленых водо-рослей, При выращивании пбверхностнымметодом максимальный урожай сухогомицелия на 7 сутки культивированиясоставляет 15,2 г/л на среде с послеспиртовой бардой; .8,5 г/л с мелассойи 2,7 г/л"с-гйдролизатом синеэеленыхводорослей.Таким образом, предлагаемый штаммсъедобного гриба Г 1 апппц 11 па че 1 ц 1 рев(опенок зимний) обнаруживает хорошийрост при культивированйи на жидкихсредах, содержап(их недооогие и доступ-ные источники "углеродного, азотногои минерального питания.На этйХбраздах при оптимальномдля роста РН среды 9,0 получен следующий максимальный урожай сухогокультуральйого мицелия: на пивномсусле (4 ф по Баллингу) на 7 суткикультивирования до 13,4 г/л в поверх7276 87 Мицелиальная биомасса имеет приятный грибной аромат, белок содержитвсе основные незаменимые аминокислоты,Кроме того, штамм образует;в культуре на лотных и жидкихсредах плодовые тела со зрелыми спорами, чтоможет быть использовано для селекционных работ,4,75 Я4,19 сл, 3,93 2,39 Таблица 1 1,0 2,0 3 0 4,0 50 6,0 70 80 9,0 10 0 = ф Исходное рН среды Биомасса мицелия, г/л посухому весу 4,0 4,1 4,2 4,2 4,7 5,1 Таблица 2 ФГлюкоза Галактоза Раффиноэа Маннит Сахароза Маль- Крахмал Ксилоза ЛактозатозаШ.й 115 115 62 73 77 96 100 ИН 4 С 1 ИаИО 3 (ИН+)ЯОф аблица 4 Исходное содержание глюкозы в среде,Продолжительностьопыта, сутки 7 3 5 7 3 5 3 5 Использованиелюкозы,70 76 806 803 83,3 84 873 87,3 8 1 Вес сухого мицели я, г/л 54 б 6 81 5,8 60 75 56 б 0 7,3 ностной культуре, до 21; 3 г/л в глубинной и до 25-27 г/л при добавлении0,1 СаСОэ, При поверхностном выращивании на среде с пептоном гриб образовал до 7,6 г/л сухого мицелия на7 сутки роста, на минеральной средес глюкозой и отваром люцерны до7,0 г/л на 10 сутки и 13 г/л на 14сутки роста, на среде с бардой15,2 г/л, на мелассе 8,5 г/л, Максимальный выход биомассы составлялоколо 62 г на 100 г поглощенной иэсреды глюкозы,Содержание сырого протеина(х 6,25) в биомассе предлагаемого штамма составляет 28,4-36,0 насухой вес, в зависимости от составасреды и возврата мицелия. Содержаниеаминокислот в образцах мицелия, выращенного поверхностно на пивном сусле,к общему белку, следующее:Лизин 4,05 ТреонинГисти- Аланиндин 1,60 фенилАргинин 3,94 аланииАспара- Валингиновая Метионинкислота 4,19 Лейцин Серин ,2,51 Изолейцин 3,35 Глицин 11,02Глутаминоваякислота 5,59Сырая мицелиальная масса, выращенная глубинно и поверхностно на укаэанных средах, обладает сильным грибным ароматом, Мицелий, высушенныйопри 40 С, сохраняет аромат в течение нескольких месяцев.Описываемый штамм Г 1 авпю 11 па чеХц 1 рез ИБКРимеет выход мицелиальнойбномассы в различных углеводных средах, включая дешевые отходы сельского хозяйства и пищевой промьпаленности, 62 по глюкозе, что выше, чем у описанных штампов этого вида.727687 Та.блица 5 Содержаниепептона всреде, г/л Вес сухого мицелия, г/лна 3 сутки 5 сут суткики 5,3 5 6 . Ь,4 48 58 71 9 1 . 8Та блица 6 1 Среда-инокулюм 7:3 . Ь:4 Поверхностный рост 11,0 11,2 13,4 не исследовалиГлубинный рост 15,3 18,4 14,113,7"(без СаСО, ) 0,01 0,1 Ъ 19,9 Биомасса: г/л 7 сутки 18,4 25,0 105. Ф к контролю 133 Таблица 8 Биомасса,к контролю. Вика Люпин Горох Фасоль .Люцерна Кукуруза Клевер 100 135 109 , 117 1 Ь 5 Та блица 9 Содержание отвара в среде, В.тюитавтю иваивиииишитвюииаютиваю ииивтюиа и Заказ 1076/26 Тираж 522 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, 3-35, Раущская наб., д. 4/5Филиал ППП Патентф, г.ужгород, ул.Проектная,4 М Штамм Г 1 апппц 11 па че 1 цс 1 резИБКГ- продуцент биомассы, Хранится в коллекции института ботаники им. Н,Г.Холодного АН УССР,Морфологические признаки,Шяпка 5:гриба 0,5-3,0 см в диаметре, желтовато-бурая, с тонким краем, выпуклоили плоскораспростертая, Ножка грибадлиной 3,0-7,0 см, толщиной 0,1"0,8 см,плотная, полая внутри, Споры гладкие, 1 Обесцветные, размер 7,0-10,03,06;0 мк, Гифы бесцветные, разветвленные, септированные, толщинсй 2,04,5 мк с многочисленными пряжками.Участки гиф распадаются на оидии. 15Культуральные признаки. На суслоагаре колонии белые, войлочные с грибным запахом. При старении местамибуреют, Наблюдается развитие плбдовыхтел со зрелыми базйдиоспорами, . 2 цНа поверхности жидкого пивногосусла 40 Баллинга) пушистая войлоч-ная мицелиальная пленка с приятнымгрибным ароматом. При длительномвыращивании мицелий местами буреет,на р 5поверхностИ образуются зрелые плодовые тела,При глубинном выращивании на средах с пептоном, минеральной "реде с глюкозой или мелассой и дрожжевымэкстрактом, растет в виде мицелиалььных шариков, Толщина гиф 2,0-4,0 мк.Мицелий обладает грибным ароматом.Физиологические признаки. Аэроб.Оптимум роста при 26 фС, ОптимальныйрН 9,0,Отношение к источникам углерода:ассимилирует глюкозу, галактозу, рафи- й-нозу, сахароэу, мальтозу, ксилозу,лактозу, маннит, крахмал, лигнини целлюлозу.Отношение к источникам азота: используЕт нюитраатяйся й аммонййнюый азот,:аспарагин, мочевину.Рост в культуре стимулируется до- бавками растительного происхождения:отвары кормовых растений, дубовойкоры и дрШтамм обнаруживает положительнуюреакцию на экстрацеллюларные бксидазы, "отмечено образование протеолитическихферментов.Антагонистические свойства, Проявляет антагонйстические свойствапо отношению к штаммам дрожжей СапЫба а 1 Ысапэ,Источники информациипринятые во внимание при экспертизе1, Журнал Арр 11 ес 1 М 1 сгоЬ 1 о 1 оду,1954, т,12,.9 1, с.170-172,