Способ исследования гистоцитологических препаратов

(54) СПОСО ТОЛОГИЧЕС (57) Изобрет трофотомет цине. Цель повышение ном характе по спаду пок не 500 - 600 тере тканево люми несцен 3 ил,.Г.Каюк и агностики вшкола, 1988,пр ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ПИСАНИЕ ИЗО АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(56) Мияновский А,И.Методы донкогинекологии. Киев; Выщас.33 - 43.Авторское свидетельство СМ 465118, кл. 6 01 й 1/28, 197 Изобретение относится к области спектрофотометрических исследований и может быть использовано при изучении и функциональной диагностике предраковых и раковых состояний в онкологии (в частности, онкогинекологии) и других областях медицины.Цель - упрощение и повышение зксессности способа.На фиг,1 изображен спектр гуморального образца; на фиг.2 - спектр тканевогЬ образца; на фиг,3 - устройство для реализации способа.Устройство содержит источники коротковолнового 1 (водородная лампа ДВС) и длинноволнового 2 (лампа накаливания ЛН) излучений, монохроматор, включающий плоское зеркало 3, диспергирующую призму 4, зеркальный объектив 5, выходную регулирующую щель 6, перемещающийся кварцевый объектив 7 коллимирующую трубку 8, поляризатор 9, полость 10 термоизоляции, наполненную композитным асбестосиликатным составом, полость 11 термостатирования, полость 12 интегриро 1681204 А 1(я) 5 О 01 й 21/35, 33/52 ИССЛЕДОВАНИЯ ГИСТОЦИКИХ ПРЕПАРАТОВение относится к области спекических исследований в меди- изобретения - упрощение и кспрессности, О злокачественре гуморального образца судят азателя поглощения в диапаэонм, а о злокачественном харако - по появлению антистоксовой ции в диапазоне 700 - 900 нм,вания облучающего пучка (измерительная полость), прозрачное кварцевое стекло 13, фланец 14, соединяющий по диагональной плоскости две полусферы шарового фото- метра, манипуляционный механизм, в котором визир 15 для отсчета угла поворота кюветы с образцом, лимб 16, шток 17, ручка 18, втулка 19, эажимная гайка 20, соединяющая манипуляционный механизм с внешней сферой фотометра, тефлоновый поршень 21, изолирующая керамическая трубка 22, блок эталонов, в котором эталон 23 абсолютного отражения с нанесенным, однородным внутренней поверхности интегрирующей полости, отражающим слоем, модель абсолютно черного тела 24(диафрагменная поглощающая полость), специальная кювета 25 с фиксаторами образца и съемным колпачком, патрубки 26 полости термостатирования (входные и выходные), светорассеивающее кварцевое стекло 27, вращаемый на фиксированное значение угла анализатор 28, приемники коротковолнового 29 (Ф,Э.У. - 100) и длинноволнового 30 (Ф,Э,У. - 62) излучений, регистрирующийприбор 31 типа В 7-21, зрительная труба 32 для контроля за юстировкой облучающего пучка, источник ЗЗ (И В Н) стабилизированного питания Ф.Э,Укриогенная система, в которой компрессор 34 и дьюар 35 с охлаждающей жидкостью, калорифер 36, в котором вентилятор 37, нагревательный элемент 38, теплоизолирующая кварцевая труба 39, регулятор 40 напряжения типа РН, отградуированный по температуре потенциометра 41, медь-константановая термопара 42,Кроме того, используются салазки, при помощи которых крепятся и передвигаются эталоны, блок фотоэлементов и зрительная труба. В качестве рассеивающей светопропускающей пластины используют кварцевое матовое стекло, а нап ра вля ющий поршень манипуляционного механизма изготовлен из тефлона с коэффициентом теплопроводности 0,1 Вт/(м гра Объектив коррекции пучка выполнен кварцевым, а изолирующая трубка манипуляционного механизма - керамической.На внутреннюю поверхность интегрирующей полости, а также эталона абсолютного отражения наносят окись магния до толщины 1 мм (метод осаждения окиси при сгорании стружек металлического магния), Указанная толщина нанесенного слоя окиси магния обеспечивает коэффициент отражения 98;во всем интервале длин волн и температуры (200 - 1200 нм и 77 - 473 К), Измерение проводят при вынутой из шарового фотометра кювете с образцом по укаэанной методике. В этом случае устанавливают эталон абсолютного отражения, внутренняя поверхность которого дополняет внутреннюю поверхность интегрирующей полости,На диафрагменную полость модели абсолютно черного тела наносят скипидаровую колоть (сажа), что обеспечивает коэффициент поглощения ее 99 , который измеряют аналогично коэффициенту отражения интегрирующей полости, однако в этом случае в качестве эталона устанавливают модель абсолютно черного тела.Полость термоизоляции заполняют композитным асбестосиликатным составом с коэффициентом теплопроводности 0,1 - 0,2 Вт 4 м гра,ф во всем заданном интервале температур, В качестве охлаждающей жидкости применяют жидкий азот. что позволяет понижать температуру образца до 77 К, В качестве нагревающего вещества используют горячий воздух из калорифера, конструкция последнего позволяет повышать температуру образца до 473 К. Для термопары применяют медьконстантан с чувствительностью 40 мкВ/К в интервале 77- 473 К, Температурное равновесие в измерительной (интегрирующей) полости наступает через 10 мин после начала5 термостатирования с градиентом температур между образцом и внутренней поверхностью среды в 1,Отношение площади входного и выходного отверстий к площади внутренней по 10 верхности (0,08 м ) интегрирующей полостигшарового фотометра 0,3,"Светосила" интегрирующей полости,представляющая собой отношение потока, принимаемого приемником, к потоку,15 отраженному образцом, колеблется от 5 оьпри Л = 200 нм до 10 при Л = 1100 нм,Для спектрофотометрических исследований со спектральным разрешениемМ= 1 нм указанные характеристики и при 20 меняемые материалы обеспечивают высокую эффективность работы устройства.Кювета 25 с твердым образцом выставляется в положение, указанное на фиг.З, а сжидким или порошкообразным образцом25 при помощи ручки 18 манипуляционного механизма по показаниям визира 15 на лимбе16 поворачивается на 90 относительно первоначального положения,С помощью системы терморегуляции30 образец нагревается или охлаждается донеобходимой температуры вследствиераспространения температурного поля изполости 11 термостатирования в интегрирующую полость 12, в центре которой нахо 35 дится образец, Контроль за состояниемтемпературы осуществляется при помощитермопары 42, установленной вместе с образцом в кювете 25, по показаниям отградуированного потенциометра 41,40 Передвигая салазки, против входногоотверстия монохроматора фиксируются источники 1 либо 2 с необходимой областьюспектрального излучения. Вставив с помощью салазок оптическую трубу 22 для на 45 блюдения эа юстировкой пучка напротиввыходного отверстия шарового фотометра,раскрыв выходную щель 6 монохроматора,обьективом 7 фокусируют входной пучок наобразце, после чего выходную щель 6 за 50 крывают, а напротив выходного отверстияшарового фотометра 11 фиксируется в салазках соответствующий выбранной спектральной области источника излучения 1 или2 фотоэлектронный умножитель (ФЭУ) 2955 или 30, на который подается стабилизированное питание от источника 33.При помощи салазок также устанавливается выбранный эталон 23 или 24,При измерении спектральных коэффициентовотражения, зеркальной отражающей отражения, пропускания, рассеяния и поглощения используется эталон 23 абсолютногоотражения, а при измерении коэффициентапрозрачности выставляется "под пучок" модель 24 абсолютно черного тела,При необходимости проведения измерений в поляризованном свете в гнезда,находящиеся на оптических входе и выходешарового фотометра 11, устанавливают поляризатор 9 и анализатор 28 соответственно, причем анализатор 28 поворотом по осификсируется с помощью ручки в заданномположении угла, На монохроматоре 1 задается необходимая длина волны света, излучаемого источником 1 или 2,После такой подготовки и выведенияспектрофотометра в режим работы кюветас образцом при помощи манипуляционногомеханизма выдвигается из центра интегрирующей полости 12 и монохроматическийпучок заданной длины волны благодаряпостепенному раскрытию выходной щели6 монохроматора попадает через объектив 7коррекции пучка в интегрирующую полость 2512 на соответствующий эталон 23 или 24,многократно отражаясь ст стенок сферы, интегрируется и результирующий световой сигнал поступает на фотокатод выставленногоФЭУ 29 или 30, от которого электрический 30сигнал регистрируется измерительным прибором 31, В этом положении, регулируя ширину выходной щели 6 монохроматора,добиваются наибольшего значения на измерительном приборе 31. 35После этого кювета 25 с образцом устанавливается в центре сферы "под пучок" ирегистрируется на измерительном приборе31 другое показание. Отношение его к первоначальному дает абсолютное значение 40того или иного спектрального показателя,При измерении спектральных коэффициентов пропускания, поглощения, прозрачности, рассеяния светонепроницаемыйколпачок снимается из кюветы 25, Измеряя 45относительные значения оптических параметров, необходимо возле исследуемогообразца в кювете 25 устанавливать эталонированное вещество, по отношению к которому исследуется образец, 50Таким образом, изменяя длину волны монохроматического излучения, температуруобразца, устанавливая необходимый эталон, манипулируя кюветой с образцом вцентре сферы, поляризуя и анализируя свет 55под разным углом падения и рассеяния, добиваются определенной экспериментальной ситуации, позволяющей всестороннеизучать как формальные, так и сущностные оптические характеристики исследуемых обьектов.Методика получения спектров поглощения онкотканей по измеренным оптическим параметрам сводится к представлению совокупности этих параметров (в частности, коэффициента диффузного отражения Всо онкопробы) в виде графической функции типаа= 1(Т, 1) или щ, = ЦТ,1), где а= =1 -В оо - объемный коэффициент поглоще 1ния, а гп = -- п(1 - а) - истинный спектрральный показатель поглощения, где- толщина образца в см; Я - длина волны, Т - температура, Причем спектр а определяется для сплошных образцов, а П 1 - для жидких и порошкообразных,Анализ этих спекров показывает существенные отличия в поглощении онкотканей по сравнению с нормальными в видимой и ближней инфракрасной области (250 - 1200 нм) и при воздействии пониженных и повышенных температур в диапазоне 193 - 353 К, а именно:жидкие гуморальные системы - у онкобольных понижение поглощательной способности по сравнению с донорскими в спектральной области 500 - 600 нм (Т = 310 К) (по крайней мере, до 0,3 см ), вызванное повышенным содержанием лейкоцитарных фракций в связи с иммунной реакцией на наличие патологического отклонения в организме (см.фиг,1); опухоли - отличие доброкачественного новообразования от злокачественного в области 700 - 900 нм, в которой явно проявляется эффект "отрицательного" поглощения злокачественной ткани в температурном интервале 273 - 343 К, вызванный так называемой антистоксовой люминесценцией хроматина и фосфолипидов в цитоплазме атипических (раковых) клеток (см.фиг,2).Для сравнения представлены спектры поглощения плазм крови донора Д-ч А,Г,. А/11/, ВЬ+, М 1682, и онкобольной Г-к М.П А/11/, РЬ+, и.б, 1 Ф 293 с диагнозом: рак тела матки - инфильтративная форма - 11, Из анализа сравнительных характеристик следует, что поглощательная способность второй во всей спектральной области (250 - 1200 нм) меньше по сравнению с донорской, Особенно проявляется сниженное содержание глюкозидов (300 - 350 нм), а также оксигемоглобинового фактора в области 500 - 600 нм, причиной чему служит образовавшаяся злокачественная опухоль эндометрия,Для сравнения предложены спектры поглощения ткани доброкачественной опухоли (б-я Ф-о, А/11/,ЯЬ +, и.б, М 401) и злокачественной (б-я О-к, А/11/,ЯЬ +,Дпинп Фиг 1 авитель Н. Назароваед М.Моргентал Редактор О. Спесивых Техр Корректор М. Максимишине Заказ 3307 ТиражВНИИПИ Государственного комитета и113035, Москва, ЖПроизводственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарин 3 ЬПодписноеобретениям и открытиям при ГКНТ ССРаушская наб., 4/5