Способ диагностики аллергии

.Бюл.вскийй меди нина нсти Пирогов алин, Ю ва, Л.унов и н 8)у И.Т , Ашас168. Ье Н. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(54)(57) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АЛЛЕРГИИ путем инкубации лимфоцитов крови.пациентов в присутствии специфического аллергена с последующим подсчетом стимулированных клеток, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью повьдпения точности способа,аллерген используют в концентрации0,01-0,05 мкг/мл, а лимфоциты обрабатывают 0,0005-0,0013-ным раствором хлортетрациклина до и послеинкубации и при, увеличении количества флуоресцирующих клеток на 828% диагностируют специфическую.Котико 17 лет Бронхиальнаастмаатоп,ф. Тимофеев 51 ркисянатнов 8 40 Отри- цатель- ный онх. астма Тимофеевка,Береза Способ относится к медицине и может быть применен при диагностике и лечении бронхиальиой астмы.Целью изобретения является повышение точности способа.Способ осуществляется следующим образом.Обычным образом берут у больного 2-3 мл венозной крови. Забор производят н присутствии 40 ед/мл гепарина. Разводят кровь в 3 раза фосфатным буфером и в градиенте плотности Фиккола-верографина выделяют суспензию чистыхлимфоцитов, Доводят концентрацию клеток в суспензии до 5 10 мл "(среда 199 является средой цпя хранения исследования кпетог 1, В лунки стандартного иммунологнческогд плато разливают по 0,05 мл суспензии лимфоцитов. Добавляют туда 5 мкл исследуемых аллергенов В Одну лунку контрольную 1 вносят 5 мкл физиологического растнора. Помещают плато в термостат и инкубируют при 37 С в течениео60 мин. Затем содержимое лунок пас.теровской пипеткой переносят в центрифужные пробирки, добавляют в каждую пробирку по 5 мл среды 99 и центрифугируют при 180 ях 10 мин. Таким образом .отмывают избыток аллергена, не связавшегося с лимфоцитами, Осадок, который содержит клетки, связавшие аллерген, ресус.пендируют н 0,05 мл бесцветной среды Хенкса. Добавляют в каждую пробирку по 001 мл раствора хлортетрациклина в модифицированной среде Хенкса содержашей 0,6 мИ СаС 1 ь . Концентрация раствора зонда 5 хх 10моль/л. В такой концентрациихлортетрациклин не обладает цитотоксическим действием на лимфоциты.Через 5-10 мин каплю окрашеннойсуспензии лимфоцитов наносят напредметное стекло,.накрывают покровным стеклом и исследуют в люминесцентном микроскопе, Длина волны 10 возбуждающего света 360 нм, светаФлуоресценции 540 нм. В образовавшемся препарате живых окрашенныхлимфоцитов часть клеток ярко флуоресцирует зеленым светом, часть остается неокрашенной. Подсчитываютчисло флуоресцирующих лимфоцитов накаждые 100 клеток в суспензии.При обследовании предлагаемымспособом контрольной группы здоровыхдобровольцев (7 человек) оказалось,что количество Флуоресцирующих лимфоцитов без инкубации их с аллергенами колеблется от 2 до 122, Предварительная инкубация клеток с алаллергенами домашней пыли и растительного происхождения не приводилак достоверному изменению числа светящихся лимфоцитов, У больных сбронхиальной астмой (атопическаяформа) наблюдалась выраженная динамика, которая заключалась в увеличении качества флуоресцирующих лимфоцитов после инкубации их специфическим аллергеном.В табл. 1 приведены результаты.обследования больных бронхиальнойастмой предлагаемым способ и ранееизвестными методами постановки кожных и ингаляционных проб.Таблица 11197640 4Продолжение табл. 40 0 2 2 ДПВ 98Шерсть кошк аро трицательный - +Отрица- Положительный тельныйв Отрицательный -шки, 4 4оушкин ерсть ереза ДП 1 112,Шерсть кошки пошннков 2 Домагин ательный 3 7 7 7 5 Отрица- тельный Тимофеевка, Шерсть кошкиШйтуновскаяСибиров 23 108 Слабоп ожител трица ельный ДП У алигинов Шалимова 10 3 10+ оложиель ный ацма 28 зкоедоров оложиельный 8 7 ДП В ложи- льный Дроздо Б То ж Новик Ефрем Иаврае Иасуев Гервазиев ефмано Здоровая Инкубация с аллергенами без динамикиПредлагаемый способ Аллерген Диагноз Ф,И.О% свет. клеток Кожнаяпроба Ингаляци- онный до инкубации после тест инку- бации 24Риносинусопатия Тимофеевка ЗарайскийРогачева 12Береза,ольха 28ТимофеевкаДП 11 130Эритромицин ГорбуновРазоренов 18 Дерматит 48 14 Филатов 44 12 Новачков Пенициллин Олеандомицин 2 18 ЕвстратоваПоляков Анафилакт,26 Пенициллин шок 32 Этаэол КойловШульман Пенициллин 26 Из табл, 1 видно, что .совпадение результатов ингаляционнога и кожного тестов наблюдаются лишь в 60% случаев (6 из 10). Использование предлагаемого способа показывает, что увеличение количества флуоресцирующих клеток после инкубации с соответствующим аллергеном на 8 и более процентов в 90% случаев (9 из 10) совпадает с положительной реакцией ингаляционной пробы. Незначительные изменения числа светящихся клеток (в сторону увеличения или уменьше- ,ния) соответствуют отрицательному результату в ингаляционном тесте. В случае одновременной постановки ,каждой пробы и предлагаемого способа увеличение количества свеТаким образом, инкубация лимфоцитов с аллергеном, к которому они сенсибилизированы, приводит в 100% тящихся клеток на 8% и болеесоответствует положительной реакциив 11 случаях из 17 (64%). Здесьрасхождение возникает, возможно,из-эа ложно положительных кожныхпроб. Незначительные изменения вчисле флуоресцирующих лимфоцитовв 100% случаев совпадает с отрицательной кожной пробой,В табл. 2 приведены результаты использования предлагаемого способа у больных риносинусопатией, лекарственной аллергией, дерматитами, Видно, что инкубация лимфоцитов со специфическим аллергеном приводит к увеличению количества флуоресцирующих клеток более чем на 8%,случаев к изменению количества светящихся клеток в суспенэии на 8и более процентов, Инкубация лимфо1197640 Составитель П. БонарцевРедактор Т. Иитейко Техред Ж.Кастелевич Корректор. Ие немчик Заказ 7645/4 . Тираж 721 . Подписное ВНИИПИ ГосударственногЬ комитета СССР. по делам изобретений и открытий 113035, Иосква, Ж, Раушская наб., д 4/5,цитов с неспецифическими аллергена-ми не приводит к столь значительнымизменениям числа флуоресцирующихклеток. Лимфоциты крови здоровых доноров не реагируют на инкубациюсо всеми исследованными аллергенами изменением количества флуоресцирующих клеток.