Противовирусное средство при гриппозной инфекции

(5 Ц Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам Е ИЗОБРЕТЕНИ ВСЕСОИЪХЕИЯЮ- ТЕХ "тъРИО ментальной медицины РАМН(54) ПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО ПРИГРИППОЗНОИ ИНФЕКЦИИ(57) Изобретение относится к медицине, в частности к лечению вирусной (гриппозной) инфекцииЦель - создание химиотерапевтичесю)го средстваобладающего противогриппозным ле ебным действием. Для этого предлагается использовать сукцинат - 3-5-диамино,4-тиадназоц у котороговыявлена проп 1 вогриппозная акгизность. 1 табл,(21) 471 71 18/14(71) Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины АМН СССР; Военно-медицинская академия им.С.М,КироваИзобретение относится к медицине, а именно к лекарственным препаратам, и может найти применение для профилактики и лечении вирусных заболеваний, в первую очередь гриппозной этиологии.Борьба с вирусными заболеваниями крайне затруднена в связи с особенностями биологии этих возбудителей, их облигатным внутриклеточным паразитизмом. Одним иэ самых распространенных возбудителей вирусных заболеваний современного человечества, вызывающих регулярные эпидемии и даже пандемии, является вирус гриппа. До настоящего времени не существует эффективных и надежных средств профилактики и лечения гриппозной инфекции.Широким антивирусным спектром действия обладают различные интерфероны. Имеются сведения об их противогриппозном эффекте. Трудность производства этих биологических препаратов ограничивает возможность их широкого применения, кроме того изучением системы интерферонов показало, что они является гормоноподобными веществами, что служит существенным показанием для ограничения их применения в качестве противовирусных средств. Наиболее широко применяемым средством профилактики гриппа являются живые и убитые вакцины, Однако главным недостатком вакцин является необходимость регулярного приготовления новых вакцинных штаммов вируса по мере возникновения в циркуляции новых антигенных вариантов вируса.Другим специфическим противогриппоэным средством является ремантадин. Этот препарат обладает в основном профилактическим действием в отношении гриппа А, в связи с чем остается актуальной проблем поиска лечебных противовирусных средств.Целью изобретения является использование в качестве противовирусного средства сукцината 3,5-динамино-2,4-тиадиазола,3,5-Диамино,2,4-тиадиазол (амтиэол) описан в химической литературе в качестве промежуточного продукта органического синтеза, Известны радиопротекторная активность амтизола и его и-толуолсульфоната, а также антигипоксическое действие амтизола, Амтизол разрешен для клинического изучения в качестве антигипоксического средства.Иэ антигипоксических свойств амтизола никак не вытекает обнаруженная противогриппоэная активность, тем более, что известен очень широкий круг антигипоксантов, однако ни у одного из них ан 1 ивирусная активность не выявлена. Противогриппоз 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 ная активность амтизола обнаружена в экспериментах. посвященных поиску средств предотвращения постстрессорного усугубления гриппозной инфекции у мышей. Обнаруженное антигриппозное свойство амтизола послужило основанием для проведения целенаправленного исследования, которое наиболее полно выполнено с использованием его солисукцината 3,5-диамино,2,4-тиадиаэола, названного сунамолом. Это вещество получено смешиванием эквимолярных количеств амтизола и янтарной кислоты.Эксперименты выполнены на беспородных белых мышах самцах, массой 16-18 г, полученных из питомника "Рапполово". В работе использован патогенный для мышей вирус гриппа А/РВ/8/34 с антигенной структурой Н 181,Вирус получали заражением развивающихся 10-дневных куриных эмбрионов (КЭ), Инфекционную активность вируса определяли стандартным титрованием 10-кратных разведений вируссодержащего материала на развивающихся КЭ и рассчитывали по известной методике и выражали вц эмбриональных инфицирующих доз (ц ЭИДзо). Определение летальной для мышей дозы аллантоисного вируса проводили путем их интраназального заражения под легких эфирным наркозом соответствующими разведениями вируссодержащего материала (в объеме 0,05 мл), используя на каждую точку определения не менее" 10 мышей. За одну летальную дозу принимали разведение вируссодержащего материала, обеспечивающее гибель 50 животных (1 О,о),В соответствии с поставленными задачами экспериментальную гриппозную инфекцию моделировали интраназальным заражением мышей известными дозами вируса гриппа, обеспечивающими заданный уровень гибели животных. Для оценки эффективности противовирусной защиты исследуемого препарата использовали метод математического планирования эксперимента с последующей обработкой на ЭВМ по разработанной программе.В результате проведенных исследований установлен наряду с профилактическим и лечебный эффект сунамола с отношении гриппа мышей, Отработаны оптимальные дозы и схема введения препарата.Схема получения и физико-химические свойства сунамона. П р и м е р 1. Амтизол получается в результате окисления 2-амидннотиомочевины перекисью водорода идентичен по свойствам известному.40 1 О г амтизола и 10 г янтарной кислоты в измельченном состоянии смешивают с 80 г безводного этилового спирта, кипятят с обратным холодильником 10 мин и выпаривают под вакуумом досуха, Получают с почти количественным выходом сукцинат 3,5-диамино,2,4-тиадиаэола о виде блестящих белых кристаллов, т.пл, 150 С. Строение заявляемого соединения подтверждено данными элементарного анализа и ПМР- спектром.Найдено,: С 30,61; Н 4,19; й 23,97, СбН 10 МОл 5.Вычислено, : С 30,77; Н 4,30; й 23,92,Спектр ПМР, 100 Мгц, д, м.дв Д 20: 3,93 с (И Н), с ДМ ФА: с 3 7 8,26 с (М Н), 10,00 с (ИН),Результаты биологического исследования сунамола.Критерием оценки противогриппозного действия препарата служило снижение гибели животных (мышей) при гриппозной инфекции. В результате проделанной работы установили противогриппоэное действие сунамола, выражающееся в снижении гибели мышей при гриппе. С помощью метода математического планирования эксперимента найдены оптимальная доза и схема введения препарата, Показано, что максимальный защитный эффект сунамола при гриппе мышей развивается при его использовании в диапазоне 3 - 13 мг/кг массы мышей в случае как профилактического, так и лечебного применения сунамола,В таблице представлены данные нескольких типичных опытов, иллюстрирующие профилактическое и лечебное противогриппоэное действие сунамола при внутрибрюшинном и пероральном способах введения препарата.Установлено, что использование суна- мола оказывает выраженйый защитный эффект - снижает гибель животных при 5 10 15 20 25 30 35 гриппозной инфекции на 30-607, (см, тИлица. графа 6).Наибольшего внимания эаслуживаю 1 два экспериментальных факта. Во-первых, сведения о наличии лечебного эФФекта у исследуемого препарата, поскольку о настоящее время не существует химио 1 ерапевтических противогриппозных средств, обладающих лечебными свойствами. Вооторых, существенно, чго способность суна- мола снижать гибель мышей при гриппе проявляется независимо от способа введения препарата интроперитонеально или перорально. Последнее является ценным свойством при разработке о дальнейшем широкодоступных и удобных лечебных форм,Сведения о токсичности сунамола, Определение токсичности сунамола при внутрибрюшинном введении проводили по Беренсу, ВеличинаОщ составила 160 мг/кг, ЕОю сунамола при пероральном введении беспородным белым мышам составила 1120 мг/кг. Данный показатель определяли по методике Проэоровского,По сравнению с известными противогрип по э н ьили средствами предлагаемое имеет ряд существенных преимуществ,Основное достоинство сунамола заключается в том, что в отличие от известных противогриппозных средств, он является единственным химиотерапевтическим препаратом лечебного действия. По сравнению с протигриппоэными препаратами биологической природы, какими являются интерфероны и вакцины, сунамол как синтетический продукт более доступен для промышленного производства и стабилен при хранении,(56) М,Д.Машковский, Лекарс 1 ленные средства, М.: 1988, ч. 2, с, 380.К,51 гаиоп ес а. - псегп Л,Рапмоп В оо 9, 1962, ч. 5, р, 105 - 121.2000786 Снижение гибели беспородных мышей при гриппозной инфекции под влиянием сунамола ы:1 - по еся в графах та одерж вый номер эксп русом парата ема); й груп ейвка Применение сукцината3,5 диамино,2,4 тиадиазола в качестве противовирусногосредства при гриппозной инфекции,екмар тенПРИ я ГРИПСоставитель Л Техред М.Мор толяровантал Корректор С.Ш кт Тираж Подписное НПО "Поиск" Роспатента113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Заказ 309 роизаодственно.издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагдн 11 э О Доза препарата 5 мг/кгпероральноПримечание. Сведения, сриме нта;2 - группа зараженных ви3 и 4 способ введения преная или проифлактическая сх5- гибель мышей в каждо6- разница в гибели мышгруппами животных.Формула и зоб реПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВОНОИ ИкфЕКЦИИ/кг, соответственно при введенци внутрибрюшинно животных нелеченных (контроль) и леченных (опыт); , соответственно, внутрибрюшинно или перораль(леч е животных на 14-е сут. после заражения, ;ждом отдельном опыте между контрольной или опытнФ