Штамм вируса baculovirus роlyнеdrоsis lохоsтеgе sтiстiсаlis l. для получения препарата против лугового мотылька

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК ООБАЗ 01 й 63/00 М 700 ГЯСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН УЕ 8 ТВ- ТЦцрц г;,511 уР, м,) т ЕНТУ кробиоло- икробиотений от ение 1 е 9 е биль- луго- ениц о луго поц во(56) Интегрированная защита растений отвредителей. Новосибирск. 1987, с.65 - 70.(54) ШТАММ ВИРУСА,. ВАС 010 Ч 1803 РО 1.УНЕОЯОЯЯ 1.0 ХОЯТЕСЕ ЯТ 1 СТ 1 СА 1 13 1,ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВЛУГОВОГО МОТЫЛЬКА(57) Использование: микробиологическаяп)омышленность, производство микробиологических средств защиты растений от Изобретение относится к ми гии, в частности к производству м лОгических средств защиты рас вредных чешуекрылых насекомых.Целью изобретения является получ штамма энтомопатоге нного ви Васо 1 оч 1 гцз Ро 1 у 1)ебгоз 1 з 1 охов з 1 с 11 са 11 з 1., обладающего высокой ста ностью инфекционных свойств против вОго мотылька, действующего на гус лугового мотылька любого возраста.Поставленная цель достигается тем известную природную популяцию ВЯП вого мотылька пассируют (проводят 5- следовательных заражений гусен вОзраста лабораторной культуры луго вредных чешуекрылых насекомых, и касается получения нового штамма вируса для производства препарата против лугового мотылька, Сущность изобретения; штамм вируса Васо 1 оч 1 гоз ро 1 у 1)ебгоз 1 з 1 охозте 9 е з 11 с 11 са 11 з 1 выделен из трупов гусениц насекомых, погибших от полиэдроза. Депонирован в коллекции ВИЗР под И. 12, Для приготовления энтомопатоген ного ппепарата на основе вышеуказанного штамма готовят водную суспенэию полэдров, содержащую выше 1,28 10 пол/мл, затем заражают гусениц лугового мотылька и выдерживают до их гибели. Эффективность препарата 50 - 100 ф достигается при титре випуснои инфекции у,2 б 1 О".1 10 пол/ма, 2 1 й табл,1 ОО мотылька) через гусениц лугового мотылька.: 6 д Для этого отбирают гусениц через 24 часа; ( после линьки на 3 возраст (вес 8,35 4. 1,2 мг),С) выдерживают без корма в течение 18-24 часа, чтобы кишочнг 1 к полностью осеобо. ГЛ дипел от пищи,.Затем е чашку Петри ломе.щают 15 гусениц лугового мотылька и предлагают им 1 г искусстаенного корма, смешанного с 0,3 мл рабочей суспензии ВЯП с титром 1 10 пол/глл. Чашки с гусе ницами ставят в термостат, где поддерживаюттемпературу 26+ 2 Сиосвещенность 6 часов, Через 24 часа в чашках Патри меняют корм, Гибель насекомых, как правило, начинается на 4-5 сутки после инфицирования, 1836005Погибших насекомых микроскопируют для установления причины гибели,Для выделения ВЯП лугового мотылька к трупам гусениц насекомых, погибших от полиэдроза добавляют водопроводную воду в соотношении 1:2 и помещают в термостат при температуре 30 С на 6-7 дней. За зто время происходит активное бактериальное разложение остатков тканей насекомого и освобождение полиздров, После этого трупы гусениц тщательно измельчают в гомогенизаторе, разводят в 2 раза водой и фильтруют через 4 слоя марли. Полученный фильтрат центрифугируют 4-5 раз при 3000 об/мин 20 мин для очистки вирусных включений от тканевого детрита, Полученный осадок состоит из полиэдров, Экспериментальный штамм ВЯП лугового мотылька хранится в форме леофилизирован ого порошка в запаянных ампулах у авторов и в коллекции депонированных вирусных штаммов Всесоюзного научно-исследовательского института защиты растений под М 12,Предложенный штамм энтомопатогенного вируса имеет следующие морфологические и физико-биохимические признаки. Белковые включения (полиэдры) вируса в основном треугольной формы. Размер полиэдров 1,2 ф.0,18-2,1 +0,23 мк. Внутри полиэдров содержится до 360 виринов палочковидной формы размеров 246+ 14 х 51 3 нм, Молекулярная масса ДНК 70,10 дальтонов.Вирус ядерного полиэдроза лугового мотылька размножается на живых насекомых (гусеницы лугового мотылька) в условиях, подходящих для развития насекомого-хозяина.Экспериментальный штамм ВЯП лугового мотылька активен против гусениц лугового мотылька любого возраста при заражении суспензией попиэдров с титром 1,28,10" пол/мл и выше, Биологическая эффективность ВЯП от 50% (титр суспензии 1,28.1 пол/мл) до 100(титр суспензии1,5,10 пол/мп).Пример конкретного использования экспериментального штамма.Штамм вируса ядерного полиздроза используют для заражения от 1,10 до 1,108 пол/мл, добавляют в искусственный корм в количестве 0,3 мл на 1 г искусственной питательной среды (ИПС), которую скармливаот гусеницам лугового мотылька 3 возраста. Гусениц содержат в чашках Петри по 15 штук в каждой чашке с 1 г ИПС, Для каждой концентрации вируса берут пять повторностей. После поедания зараженного корма(через 24 часа) гусеницам лугового мотылька дают чистый корм (ИПС). Гусеницу считают погибшей от полиэдроза, если в ее тканях при микроскопировании обнаруживают по пиэдры. Гибель насекомых фиксировали втечение 10 суток, Результаты опыта представлены в табл.1.Далее определяют ЛК 8 о по формуле: 9 ЛК 5 о = 9 См - о( Х-0,5), где1 О См - максимальная из испытанных концентрацийд- логарифм кратности разведениясуспечзии- гибель гусениц в долях смертности,вычисляемвя по формулеПо Пк-П, гдеКПо - количество мертвых гусениц в опыте- концентрация (сумма 5 повторностей) шт,П, - количество мертвых гусениц в кон 25 тропе, шт,й - количество тест-гусениц, испытанных в 5 повторностях (равно 75) шт,В приведенном примере9 Л Кво=910 - 910(1+0,973+0,853+30 +0346+0226 05)=8 28983(9 Л К 8 о Ф 5,102ЛК 80=1,28,10 пол/млОпыты показывают, что ВЯП луговогомотылька патогенен для гусениц луговогомотылька Л К 8 о равна 1,28,10 пол/мл.Определение энтомопатогенной активности ВЯП лугового мотылька проводят путем скармливания гусеницам 3 возрастаИПС с добавлением водной суспензии полиэдров лугового мотылька, содержащей от1,10 до 1.10 пол/мл на корм помещаютгусениц, Насекомых содержат по 15 в чашках Петри с ИПС, Через 24 часа гусеницамменяют корм и далее кормят чистым кор 45 мом. Учет погибших насекомых проводятежесуточно в течение 15 суток. Погибшихличинок микроскопируют для установленияпричины гибели.Подсчет попиэдров в водной взвеси50 (титр вирусной суспензии) осуществляют вкамере Горяева,Установлено, что при концентрации полиэдров в суспензии от 1,28,10 в мл и вышегибнет 50 - 100 гусениц лугового мотылька.Для приготовления энтомопатогенногопрепарата на основе предложенного вирусаготовят водную суспензию полиэдров, содержащую выше 1,28.10 пол/мл. Титр полиэдров в суспензии подсчитывают с1836005 Таблица 1 Результаты заражения гусениц лугового мотылька 3 возраста ВЯП лугового мотылька ( экспериментальный штамм)помощьо камеры Горяева. Для получения массы полиэдров, гусениц лугового мотылька заражают суспензией полиэдров с титром 1,28.10 пол/мл и выше в лабораторных условиях при температуре 26 чС.По данным смертности определяют величины ЛК 50.Для природного штамма ВЯП лугового мотылькацЛ К 5 О-(010 -910)0,68+0,653+ +,453+0,4+0,386-0,5)=5,928ЛК 50=0,85.10 пол/мл,Предложенный штамм активен противгусениц лугового мотылька любого возраста при пероральном заражении суспензией полиэдров с титром 1,28,10 пол/мл и выше.55 Биологическая эффективность от 50 до100 фдостигается при титре вирусной суспензии 1,28,10 до 1.10 пол/мл,Формула изобретения Штамм вируса Васоочгаз РоуЬебгозз 10охозтеде заестса 3ВИЗР М 12 для получения препарата против лугового мотылька.1836005 Таблица 2 Гибель гусениц лугового мотылька 3 возраста. 10 суток после заражения (по повторностям). Керецма едактор аз 2987 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СС 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 изводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Га