Способ определения генеза желтухи

(71) Нижегородский медицинск им, С.М.Кирова, Институт прикл ки АНСССР(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖЕЛТУХИ(57) Изобретение относится к мед именно к лабораторной диагности жет быть использовано для диффер ий институт адной физи и лаборана, 1960, В 10/00, ГЕНЕЗА ицине, э ке, имоенциа Изобретение относится к медицине, э именно к лабораторной диагностике и может быть использовано для дифференциальной диагностики желтух опухолевого и вирусного генеза.Цельизобретения-упрощениеспособа и возможность экспресс-диагностики,Поставленная цель достигается тем, что предлагаемый способ включает исследование сыворотки крови путем пропитывания ею фильтра из бумаги., для электрофореза диаметром 25-30 мм. В центр пропитанного таким образом фильтра найосят 0,01 мл азотной кислоты желтой от присутствия азотистой, При появлении в течение первой минуты в месте нанесения капли оттенков от красного до сиренево-фиолетового диагГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТВЕДОМСТВО СССР(ГОСПАТЕНТ СССР) е.Я 2 до 1 81 2491 А 1 2ной диагностики желтух опухолевого и вирусного генеза. Цель изобретения - упрощение способа дифференциальной диагностики желтух опухолевога и вирусного генезэ, Сущность изобретения состоит в исследовании сыворотки крови, которой пропитывается фильтр из бумаги для электрофореза, диаметром 25-30 мм, в центр его наносится 0,01 мл азотной кислоты с присутствием азотистой и при появлении в течение первой минуты на месте нанесения окислителя окраски оттенков от красного до сиренево-фиолетового диагностируют вирусный гепатит, а при появлении в центре нанесения бирюзовой окраски - опухолевую желтуху, Изобретение предназначено для экспресс-диагностики в эпидемических очагах. ностируют вирусный гепатит, при появлении бирюзовой окраски - опухолевую желтуху,Изобретение основано на установлении того, что сыворотка крови и моча больных вирусными гепатитами и опухолевыми желтухами различным образом реагирует на азотную кислоту желтого цвета от присутствия азотистой. При вырусных гепатитах вцентре фильтра, пропитанного биологической жидкостью больного, через 1 - 2 мин после нанесения 0,01 мл окислителя появляется окраска оттенков от красного до фиолетово-сиреневого, При опухолевой желтухе в центре нанесения капли моментально развивается окраска бирюзово-лазурного цвета, т.е, в любом случае наблюдаетсяпоявление колец, расходящихся от центра кпериферии, которые не смешиваются, т.к.идет постоянный форез, Реакцию следует"читать" в первые минуты (не позднее 5 - 6-ймин), ее скорость и интенсивность окраски 5колец зависит от концентрации фракций,Таким образом, установлено, что дифференциальный диагноз желтухи опухолевого и вирусного генеза можно проводитьпо реакции биологической жидкости (сыворотка крови, моча) с азотной кислотой желтого цвета от присутствия азотистой,Ранее азотная кислота с присутствиемазотистой использовалась в лабораторнойдиагностике при исследовании мочи на билирубин - проба Гмелина, Реакция описанаследующим образом: после нанесения смеси азотной и азотистой кислот вокруг каплиобразуются концентрические кольца: снаружи зеленое, затем кнутри синее, фйолетовое, красное. Для желчных пигментовхарактерно зеленое. Хилизм реакции за-.ключается в окислении билирубина до биливердина.В предлагаемом способе по истечении 258-10 мин после нанесения. капли в реакциювключаются билирубин и другие пигменты,о чем свидетльствуют внешние круги зеленого и годубого цветов, Чтобы этого избежать, экспериментально подобраны обьем 30исследуемого образца, окислителя, а такжедиаметр, фильтр и время "чтения" реакции.Для анализа выбрана непроклееннаябумага для электрофореза с характеристиками; масс 1 кв,м, 245 + 15 г, толщина 3544 +3 мкм, капиллярная всасываемость припоперечном направлении 80 + 7 мм, впитываемость при погружении менее 2 с, Всехарактеристики приведены для воды. Прианализе сыворотки крови приходилось учитывать, что она содержит крупные молекулы би-ологических соединений, в частностипигменты - цейи молекул, упакованные в особые "упаковки". Поэтому, чтобы бумага пропитывалась сывороткой максимально, 45выбрано время, равное 10-15 мин. По истечении этого времени объем остаточной капли варьировал в пределах 0,02-0,15 мл, чтозависело от состава сыворотки крови, Привремени меньше 10 мин разброс был значительно большим (0,05-0,2 мл).Обьем 0;01 мл кислоты определен путемрасчета; т.к. допустимый уровень содержания фракций известен.Концентрация 9-8,5 ИНМОз соответствует концентрированной кислоте, Коммерческая кислота имеет плотность 1,37-1,405г/см и соответственно концентрацию 6168 при таких характеристиках пределы колебаний нормальности 8,95 - 8,52. Выбирают эти значения в пределах 9,0-8,5. Концентрация азотистой кислоты не определяется, поэтому указывается только цвет(желтая от присутствия азотистой).Выбранный объем окислителя 0,01 мл, при его нанесении на фильтр форезировал от центра на радиус 8 мм (соответственно диаметр 16 мм) за 5 мин, на 6-й мин этот круг начинал сужаться, (улетучивалась вода). При нанесении этого же объема кислоты на фильтр, пропитанный дистиллированной водой, диаметр круга достигал 22 мм, а в отдельных случаях 30 мм, Т.к. объем и концентрация были уже выбраны, то выбрали фильтр диаметром 25-30 мм.При выборе обьема исследуемого образца исходили из следующего: концентрация уробилина в крови очень низка, 5 мл сыворотки крови в патологии могут содер: жать максимально 17,2 мкг и минимально, 5,2 мкг фракции в ,уробилина, а 0,5 мл - 1,72 - 0,52 мкг. Это минимальное предельное количество сыворотки, определяемое чувствительностью метода.Для анализа большего объема сыворотки необходимо увеличивать диаметр фильтра и объем окислителя. Возрастает и время реакции.Учитывая, что на. 7-8 мин в реакцию вступают пигменты-билирубин, биливердин, что приведет к появлению дополнительных колец, то "чтение" фореграммы с целью выделения истинных уробилинов будет затруднено. Сохранение диаметра фильтра и обьема окислителя при увеличении обьема сыворотки крови приведет только к увеличению объема невпитавшейся сыворотки, Т.к. авторы стремились сокра-. тить обьем исследуемой сыворотки крови, то выбрали его равным 0,5 + 0,05 мл,В центр пропитанной таким образом бумаги наносится капля азотной кислоты желтого цвета от присутствия в ней азотистой и по появлению концентрических колец последовательно: бирюзового, далее всех оттенков от красного до фиолетового и желтого ( центре, всех вместе или какого-то одного, судят о присутствии всех или одной из фракций.Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.В центр фильтра из непроклеенной бумаги диаметром 25-30 мм на горизонтальном столике для равномерного пропитывания, находящемся в чашке Петри и предварительно смоченным дистиллирован.ной водой, наносится 0,5 мл исследуемой сыворотки крови, Фильтр пройитывается 10-15 мин, оставшаяся, невпитавшаяся сы1812491воротка крови стряхивается, а фильтр поме- (60 ), На основании других лабораторных щается на горизонтальное стекло. В центр исследований и клинических данных, поего наносится 0,01 мл азотной кислоты жел- ставлен диагноз: вирусный гепатит, типичтого цвета от присутствия азотистой. Азот- ное течение, желтушная форма.ная кислота в качестве окислителя вместо 5 Тихообразова А,В., 70 лет, история боГеОз взята, как наиболее сильный и практи- лезни М 1603чески бесцветный окислитель. Окраска раз- Диагноз при поступлении - механичевивается в первые же секунды. Появление ская,желтуха, желчно-каменная болезнь, на фильтре лазурной окраски (только одной) Для биохимического исследования вэяили с последующим кольцом всех оттенков 10 та кровь из вены, 0,5 мл сыворотки крови красного и фиолетового цветов свидетель- взято для исследования по предлагаемому ствует о наличии одной фракции О-уробили- способу, Этот объем пипеткой наносится на на или О-иЗ-уробилина, Наблюдая реакцию фильтр, расположенный в чашке Петри на в динамике 2-3 исследования с интервалом горизонтальном столике фдн) при постоянном присутствии отме вается 10 мин, Остаток сыворотки стряхиваченных колец диагностируют опухолевую ется и фильтр помещается на с . Вту у, р исчезновении кольца лазурной центр пипеткой наносится 0 01 йтекло. ок эски ви нымл азотнор русныи гепатит, атипичная фор- кислоты желтого цвета от присутствия азома с холестатическим компонентом, При тистой. В первые же секунды в центре появпоявлении на фильтре только колец с от ляется лазурно-бирюзовое пятно и тенками красного и фиолетового цветов - сиреневое кольцо вок г,2-я мидиагности ют вная о ма, труют вирусныи гепатит, типич- сиреневое кольцо растет, пятно расте аф р, О сутствие этих колец, вали- лазурно-бирюзовым внутренним коль ом, вк ется чие только желтого пятна свидетельствует центре белое пятно (коагулировавший бестан во физиологической норме или полном вос лок), 3 мин - картина много ярче. Н 6-йо лении функции печени после перене- во внешнем круге после си енев грч. а - мин сенного ви сног гл иреневого кольца спору го гепатита, Предлагаемый намечается бирюзовое кольцо чтособ может быть использован как для вается как продукт окисления фракции 3- дифференциальной диагностики, так и для уробилина при его избытке. "Чтение" ранней диагностики вирусных гепатитов в 30 реакциидалоследующийрезультат:данный зпиднеблагоприятных регионах для скри- образец сыворотки крови содержит двефракции уробилина О и 1. СпектральныйПримеры конкретного использования анализ показал уровень фракции О-уробиданы в виде выписок из историй болезни. лина 38, 3-уробилина 52. НЛипи с Н.П. Истилина . а основаниидустория болезни Ь 1379, 35 этих и других клинических данны б й Диагноз; и ипос плД, р ту ении и выписной - ви- поставлен диагноз рак гепатодуоденальной русный гепатит, острая жел шнаяр лтушная форма. эоны, больная переведена в хирургическийДля подтверждения диагноза взята стационар.кровь из вены для проведения унифицированных лабораторных исследований, в том 40 Демин Н,И. Истор б В 1593редлагаемым способом, Фильтр, по- Диагноз; вирусный гепатит, Больном (пемещенный в чашк Пет и асп лу етри, расположенную ред выпиской) из вены для контрольногон и гепатит, ольному (пегоризонтально, пропитывается 0,5 сыворот- анализа взята кровь, И 0,5ки крови в течение 10 мин. Оставшаяся сы- исследования предложенным способом. На воротка стряхивается, Фильтр помещается 45 фильтр, находя ий Пна стекло, в центр пипеткой наносится 0,01 ризонтальном столике наносится 0,5 мл сымл, азотной кислоты цвета от присутствия воротки крови. Фильт и оазотистой, В пе вые же 30р е с, на месте нане- течение 12 мин, невпитавшуюся сыворот сения окислителя развиваетсяр фиолетовое крови удаляют на край чашки. Фильтр помеотку мин пятнопятно с сиреневыми вкраплениями,через 1 50 щается на горизонтальное стеклорастекается в виде кольца, а в наносится 0,01 мл окислителя. В первые же, в центроявляется елое пятно (коагулируюцентре появляется желтое пятно. Через 2 30 с появляется б (мин - все цвета более яркие, 5 мин картина щий белок), только к кон 3-йцу - мин на месте ния" фо ег аммы мо нс вживается. На основании "чте- нанесения кислот ра вр эвивается слабая желный об аэ" ф реграммы можно сказать, что дан тая окраска что свидетельс ер ец сыворотки крови содержит концентрации стеркобилина и полном восфракцию -уробилина и стеркобилин, что . становлении функциха акте из ет ви нр р у т вирусныи гепатит, типичное сенного гепатита. Спектральный анализ течение. Спектральный анализ показал присутств 3- б (40-,ь)ие .уро наина( Яистернобилина выписан.р - подтвердил полученный результат. Больной7 1812491 Составитель С, ГорскийТехред М. Моргентал Корректор Н. Ревская Редактор Заказ 1573 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 1.13035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г; Ужгород, ул,Гагарина, 101 Таким образом, в первой и третьей сыворотках крови анализ на фракционный состав уробилина подтвердил клинический диагноз, а во второй быль показано онкологическое заболевание, больная переведена .в специальный стационар.Всего с помощью предлагаемого способа обследовано 20 сывороток крови здоровых людей, 75 больных вирусными гепатитами в разные сроки болезни, с типичным цитолитическим и античным холестатическим течением болезни и 50 сыворотоккрови больных с желтухой опухолевого происхождения, Во всех случаях диагноз подтверждался.Способ отличается простотой исполнениязкспрессностью, не требует специального оборудования, подготовки, обеспечивает скрининг.Формула изобретения Способ определения генеза желтухи пу тем биохимического исследования крови,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа дифференцированного опухолевого и вирусного генеза при экспрессном обследовании в эпидемических 10 очагах, сйворотку крови наносят на гигроскопическую белую бумагу, затем наносят каплю 61-68-ной азотной кислоты и при появлении в течение первой минуты окраски от красной до сиренево-фиолетовой оп ределяют желтуху вирусного генеза, а припоявлении в центре нанесения кислоты бирюзовой окраски - опухолевого генеэа,