Индикатор для определения наличия микроорганизмов в воде

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК ГОСУДАРСТВЕВедОмстВО с(ЕР(ГОСПАТЕНТ С ЕТЕНИЯ ЕДЕЛЕНИЛ НАОВ В ВОДЕеление наличияущность: индиенилтетразолиитразолий синий ОПР ИЗМ пред де. С триф ьскии институ еневскаяе микроорганизде, Технологиче 2520300003, М тро ов в дипзап ы в ОПИСАНИЕ ИЗОБ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ.Изобретение относится к микробиологическому контролю и может быть использовано в микробиологии, микроэлектронике, биотехнологии для контроля, содержания бактерий в деминерализованнай воде.В настоящее время для определения микроорганизмов в воде используют способ выращивания колоний бактерий на мембранных фильтрах, через которые пропускают определенный обьем контролируемой воды.Мембранный фильтр помещают в питательную среду и после инкубации в течение не менее 24 ч проводят подсчет количества колоний бактерий,. выросших на фильтре. Это значение характеризует содержание бактерий в контролируемой воде,Для выявления колоний микроорганизмов используют индикатор - вещество, окрашивающее колонии бактерий,Известен состав индикатора, включающий бриллиантовый зеленый, бромтимоловый синий, генциан фиолетовый и другие.Однако укаэанные индикаторы не выявляют микроорганизмы, живущие в деминерализованной воде,5 С 12 О 1/00, 1/04(54) ИНДИКАТОР ДЛ ЛИЧИЯ МИКРООРГА (57) Использование: микроорганизмов в катар содержит 2,3, хларистый этанол н и воду. 2 табл. Для определения микроорганизмдеминерализаваннай ваде известны икатары фирм "МИроге" США и "СеФРГ, окрашивающие микроорганизмкрасный цвет, Недостаток указанного икатара в том, чта время на определениелоний микроорганизмов (время инкубане менее 24 ч,Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является индикатор, содержащий 2,3,5-трифенилтетразолий хлористый (ТТХ) 0,005-0,01%, этанол ректификат 20-40%, остальное - дистиллированная вода, окрашиваощий микроорганизмы в красный цвет. Время инкубации не менее 24 ч. Указанный индикатор выбран в качестве прототипа.Целью изобретения является уменьшение времени проведения анализа за счет сокращения времени инкубации.Указанная цель достигается тем, что в качестве индикатора для определения наличия микроорганизмов в воде используется смесь, содержащая 2,3,5-трифенилтетразо1788013 Таблица 1 Сравнительные данные результатов испытаний индикатора при раэлицных соотношениях ингредиентов Ю серииопытов Состав индикатора,Вреля инкубаДистил" ции, ц лирова."наявода Результат анализа Итоговый результат по графам 6 и 7 (достиение поставленной целл) Ч-цель достигнута,цель не дос- тигнута 2,3,5 трлфен.тетразолийКолонии не окрашены 2.2 г.3 , 2,4 г.5 г,6 О,ОО 17о,оог 5о,оозз0,005 4 Е 4 В 4 В4 Е 12 12 12 1 г Оцень слабоеокрашивание колоний Оцень слабоеокрашивание колонийОчень слабое окрашивяниеколоний 1 г 36 о,оо 6 О,ОО 1 1 В 1 га,оо 1 3,1 1 В 1 В 17 1/ 1 г 1 г12 12 1 г О,ОО 1О,ОО 1О,ОО 1О,ОО 1О,ОО 1 О,ОО 17 0,0025 о,оозз о,оо 5 0,006 3.2 З.Э 3.5 3,6ию,и Слабое окраш.подлонки лий хлористый, этанол и воду дистиллированную.Сущность изобретения .заключается втом, что он дополнительно содержит нитротетразолий синий при следующем соотношении ингредиентов,;Э,2,3,5-трифенилтетразолийхлористый 0,0017 - 0,005нитро-тетразолийсиний 0,0012 - 0,0025зтанол ректификат 5-19дистиллированная вода остальноеП р и м е р. В приготовленный по прописи питательный агар РПА или ДПА добавляют 6 мл раствора предлагаемогоиндикатора при соотношении ингредиентовиндикатора; ТТХ 0,0025;, нитро-СТ00017 оД зтанол ректификат 12 о; остальное - дистиллированная вода. Полученныйпитательный агар с введенным индикатором наливают в стерильные чашки Петри,помеща 1 от в них фильтр, через которыйпредварительно профильтровали пробу воды, и инкубировали при температуре37+0,5 С. Через 14 ч появилось четкое, хорошее окрашивание колоний бактерий безокрашивания подложки, Подсчет колониймикроорганизмов проводили с помощьюбинокулярной лупы пятикратного увеличения, Результаты указаны в табл.1 серияопытов 5.3), Аналогично описанному в примере провели серии испытаний индикатора при различных соотношениях ингредиентов и их данные также указаны в табл.1,Достижение поставленной цели иллю стрируется также многими данными табл.2,где показано, что для одной и той же анализируемой деминерализованной воды при использовании в качестве индикатора фирменного состава кМИроге", ТТХ и смеси 10 ТТХ с нитро-СТ 1,предлагаемый индикатор)при практически совпадающем количестве обнаруженных колоний время инкубации уменьшается значительно (на 7 - 10 ч) в случае использования предлагаемого индика тора. Формула изобретения Индикатор для определения наличиямикроорганизмов в воде, содержащий 2,3,5- 20 трифенилтетразолий хлористый, зтанол,дистиллированную воду,.о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью сокращения сроков определения, дополнительно он содержит нитро-тетраэолий синий при следующем 25 соотношении ингредиентов, об. :2,3,5-трифенилтетразолийхлористый 0,0017-0,005 нитро-тетразолийсиний О 0012 - 0 0025 30 зтанол ректификат 5 - 19дистиллированная вода остальное,(Н-СТ) отянол Дистиллированная ректификат вода 17 0,0010,0017 О,ОО 12 12 Оцень слабоеокраш колонийСлабое окраш.колоний остал. 4,344,6 0,00250,00330,0050,006 11 1 1 11 )1 1 11 Слабое акраш,17 17 1 б 1 б 0,0010,0017 0,0017 0,0017 12 17 5,2 12 16 5.3 5.4 5.5 0,00250,00330,005 12 12 12 14 14 14 0,006 0,001 12 14 0,0025 12 остал,0,00 170,0025 12 0,00250,00330,005 6.3 б 4 6.5 0,0025 0,0025 00025 12 12 12 14 14 6.6 0,006 0,001 14 0,0025 0,0033 7.1 12 осял. 7.2 7,3 7 4 7.5 0,00170,00250,00330,005 0,0033 0,0033 0,0033 0,0033 12 12 12 12 1 11 11 11 17 14 14 Ярков акраш. подложки, подсчет затрудн. 7,6 8.1 00060,0033 0,0033 0,0017 24 124 Оцень слабоеокраш, колоний астяльн 8,2 0,0033 0,0017 Слабое окрашив.колонийХорошее окраш,колоний 8.3 0,0033 0,0017 1 Э 84 8.5 0.6 8.7 14 О 23 0,0033 0,0033 0,0033 0,0033 0,0017 0,0017 0,0017 0,0017 1 О 15 16 19 0.8 0,00330,001 24 20 остяльн, 20 0,006 16 9,2 0,001 16 1 бЭ 14 1 Э 0,001 0,006 1Слабое окраш,0,0033 0,001 подложкиСлабое окраш,9,6 0,006 0,001 17 подложки е е е еееееП р и м е ч а н и е, 1. В графе 8 табл. 1 энакон "1 н отмечено соотношение ингреди"ентав индикатора, при котором достигнута поставленная цель,т.е. времл инкубации меньше 24 ц и подсчет колоний микроорганизмов возможен.2, Знаком "-" отмечено соотношение ингредиентов индикатора, прикатарам не достигнута поставленная цель, т,к. время инкубации24 или более часов или полсчет колоний микроорганизмов невоз"ножен из-зл очень слабого окрашивания колоний или иэ-за слабогоили яркого окрашивания подложки, на фоне которого нельзя подсчитать колонии микроорганизмов,0,00 170,0010,00330,0033 Слабое окраш,колоний и слабоеокраш. Подложкилцень слабое ок"раш. копанииХорошее окраш,колаи Яркое окраш,колонийСлабое окраш,подложкиОцень сл 1 боеокраш, колонийХорошее Окраш.колоний Яркое Окраш,КОЛОНИЙСлабое окраш,подложкиЯркое окрдш,подложки Яркое окраш.колонийЯркое окоаш,колонийОцень слабоеокраш,колонийЯркое окраш,подложкиЯркое окраш,подложки Итоговый результат по графам 6 и 7 (достижение поставленной цели)ПЧ-цель достигнута,цель не достигнута1788013 Таблица 2 Рост микроорганизмов при анализе деминерализованной воды на разных питательных средах и с различными индикаторами .Составитель А.ПавловаТехред М.Моргентал тор Н,Ревска Ко едакт эводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Заказ 49 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ ССС 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5