Способ получения полиплоидных форм клевера лугового

(19 00, 1/О ИТЕТКРЫТИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙПО ИЗОБРЕТЕНИЯМПРИ ГКНТ СССР Е ИЗОБРЕТЕН СВИДЕТЕЛЬСТВУ СК К юл, М. 28 й научно-исследовательскделия и кормовюк, И,А,Гордей, Л,П,Филип ия по полу кению и 1 х форм кормовых еление кормопроим В.Р,Вильямса,кие указалиплоиднХНИЛ, отдИ кормов3 Изобретение от ГИИ И СЕЛЬСКОМУ ХО использовано в селе чения новых исход отехноложет быть й ля полносится к бизяйству и мокции растени д У ных форм,Известен способ получения полиплоидных форм у различных кормовых культур путем обработки точек роста проростков колхицином при вакуум-инфильтрации, выращивания проростков в рассадных ящиках, оценки на плоидность каждой цветочной головки каждого растения, удаления диплоидных головок и переопылением полиплоидных, выращивания растений из полученных семян первого поколения (С 0), оценки растений на плоидность по форме пыльцы (пыльца полиплоидных растений многоовальная, неправильной формы, диплоидных - продолговатая, правильной формы) и отбора нехимерных полиплоидных растений второго поколения (С 1),(21) 4837740/1 (22) 19,06,90 (46) 30.07.92. Б (71) Белорусски институт земле (72) Л.Г.Близн вич и Е.И.Чеке (56) Методичес выделению по культур/ ВАС изводств, ВНИ - М 1987, с. 7(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИПЛОИДН ЦХ ФО РМ КЛ Е В Е РА ЛУГОВОГО (57) Изобретение относится к биотехнологии, сельскому хозяйству, селекции и семеноводству. Согласно способу проростки семян обрабатывают колхицином при вакуум-инфильтрации, эксплантируют первичный конус нарастания на искусственную. питательную среду, проводят микроклональное .размножение, Полученные растения - регенерэнты, высаживают,р почву, выращивают до цветения и по форме пыльцы первого соцветия оценивают плоидность. 1 з,п. ф-лы, 3 табл Недостатки способа-растения, выращенные из обработанных проростков (Со) - ф имеют химерное строение тканей; длитель-4 ный процесс получения нехимерных поли- (Я плоидов (из проростков семян выращивают ( ) растения на протяжении двух поколений ц для выделения нехимерных полиплоидов), цЦель изобретения - ускорение получения нехимерных полиплоидов.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения полиплоидных д форм клевера лугового, включающему обработку проростков семян колхицином при вакуум-инфильтрации, . выращивание растений из проростков, оценку плоидности соцветий по форме пыльцевых зерен, отбор полиплоидных растений, после обработки проростков колхицином отчленяют первичные конусы нарастания и размножают их микроклонально на искусственной питательной среде, иэ вегетативного потомства20 каждого экспланта отбирают нехимерные полиплоидные растения-регенеранты, при этом оценивают плоидность по форме пыльцы первого соцветия,П р и м е р 1, Семена клевера лугазаго поверхностно стерилизуют и в асептических условиях высаживаот на искусственную питательную среду Гамборга В,1 в чашки Петри. 4-6-дневные проростки для синхронизации клеточных делений помещают в холодильник при 1 С на 2 сут, а потом на 1 ч в термастат при 27-28 С, Затем проростки погружают в стерильный 10,-ный водный раствор колхицина и сосуд, в котором находятся проростки, помещают в вакуум-камеру, давление в которой постепенно сникают да 100 мм рт.ст, с последующим повышением его до уровня атмасфернсго давления, Обработку в вакуум-камере повторяют 4 раза через 1 ч, Обработанные колхицином проростки промывают автоклавированнай дистиллированной водой в стерильных условиях, отчленяют эпикотили и высаживают в среду для микроклонального размножения, Среда содержит минеральные соли, витамины и фитогорманы, Состав приведен в табл,1.Зкспланты культивировали на световых стеллажах с освещенностью 12 клк, температурой 22 чС, фотопериадом 16 ч. В потомстве каждого экспланта отбирали регенеранты, которые имели паизнаки тетраплоидных растений аналогично тетраплаидным растениям, полученным традиционным путем, а именна; более широкие листовые пластинки, более темную окраску листьев, ярче выраженнуа опущен. ность, утолщенные листовые черешки. Отобранные регенеранты пассировали на среду того же состава для окоренения, но без витаминов и гормонов. По мере появления корней регенеранты высаживали в искусственную почву "Бион" и доращивали растения до фазы цветения, В период цветения определяли плоидность по . форме пыльцевых зерен каждой цветочной головки всех окорененных растений-регенерантов табу,2).Как видно из табл,2, среди регенерантов не обнаружено ни одного растения, на катооам образовались бы цветочные головки разной плоидности, т,е, не обнаруженони одного химерного растения, что дает возможность по первой цветочной головке отбирать тетраплоидные нехимерныерастения, Всего проанализировано 334 растения-регенеранта сорта Йыгеваиз нихоказалось нехимерных тетраплоидов 141 идиплаидов 183) и 97 растений-регенерантовселекционного образца Крупноплодный (изних нехимерных тетраплоидов 57, диплоидов), Период получения полиплоидныхфарм ограничивался тремя пассажами напитательной среде и периодом роста их вискусственной почве, т.е, ат 3 до 5 мес, вусловиях искусственного климата.П р и м е р ы 2 и 3, Процесс велианалогично примеру 1Результаты представлены в табл.2,В табл.3 представлена влияние различ-ных концентраций 6-БАП на результаты способа,Предлагаемый способ по сравнению спрототипом позволяет ускорить получениенехимерных полиплоидав и их использование в селекционном процессе,Формула изобретения 1, Способ получения полиплоидных фарм клевера лугового, включающий обработку проростков семян колхицином при вакуум-инфильтрации, выращивание растений, оценку плоидности соцветий и отбор полиплаидныхформ, о т л и ч а и щ и йс я тем, что, с целью ускорения получения нехимерных палиплоидов, выращивание растений осуществляют путем помещения первичного конуса нарастания проростков на искусственную питательную среду и последуащего их микроклонального раэмнокения, затем полученные растения переносят в почву, выращивают да цветения и плоидность растений оценивают по форме пыльцы у первого соцветия,2. Способ по и. 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что микроклональное размножение осуществляют на питательной среде Гам.- борга ВБ, в которую дополнительно вводят 10 мг/л б-бензиламинопурина и 0,1 мг/л индолилуксусной кислоты.17"0 б"7 Таблица 1 Состав компонентов питательной среды для микроклонального размножения клевера луГовогоароза 30000, рН 5,7 Таблица 2 Табл ица Влияние высоких доз 6-БАП на регенерационную способность пазушных почек клевер лугового сорт Йыгева), среда культивирования В 5+0,1 мг/л ИУК+ 6-БАП, Выход полиплоидных размножении апик рм клевера лугового при обработке проростков колхициномелей на искусственной питательной среде (количество, шт.),1750557 Продолжение тэлб, 3 Составитель Л,БлизнюкРедактор Л.Пчолинская Техред М.Моргентал рректор О,Крйв тельский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина Производстве нн Заказ 2632 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушскэя наб., 4/5