Способ определения количества каротиноидов в яичном желтке

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 5 601 й 30/0 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ РСК У ОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ АВТ Изоби можетсельскохтности нстанцияхству дляонного к аро Цел тиисо(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА КАРОТИНОИДОВ В ЯИЧНОМЖЕЛТКЕ(57) Изобретение относится к птицеводствуи может быть использовано на различныхсельскохозяйственных предприятиях, в чес- .тности на птицефабриках, инкубаторныхретение относится к птицеводству быть использовано на различных оэяйственных предприятиях, в часа птицефабриках, инкубаторных и опытных станциях по птицеводоперативного контроля инкубациачества яиц по содержанию в них идов.изобретения - повышение точно- ращение длительности анализа. определения содержания, каротияичном желтке отбирают прорую помещают в фарфоровую растирают с фосфатами щелочаллов (йазР 04, йазРО 4 12 Н 20,йа 4 Р 207 10 Н 20, йагНР 04 и соотношении проба: фосфат от 50 1721505 А станциях и опытных станциях по птицеводству для оперативного контроля инкубационного качества яиц по содержанию в них каротиноидов, Цель изобретения - повышение точности и сокращение длительности анализа. Пробу обрабатывают солью минеральной кислоты, в качестве которой используют фосфаты щелочных металлов при соотношении проба: фосфат от 1,33:10 до3,04:10, осуществляют последующее экстрагирование обработанной пробы органическим растворителем, в качестве которого используют смесь ацетона с этилацетатом в объемном соотношении от 7;3 до 9:1. Фотометрируют полученный экстракт при длине. 3 волны 450 нм, Определение количества каротиноидов в яичном желтке осуществляют по калибровочному графику. 4 табл,ЬЭ 1,33;10 до 3;04;10, Полученную смесь экстра-, - ф гируют органическим растворителем, в ка- (Я честве которого использует смесь ацетона (; с этилацетатом в объемном соотношении от (Я 7:3 до 9:1, и экстракт отфильтровывают через обеззоленный бумажный фильтр в мерную пробирку, Содержимое ступки про- ф мывают небольшими порциями смеси ацетона с этилацетатом и переносят на тот же фильтр. Эту операцию повторяют до тех пор, пока экстракт не будет окрашиваться, Затем замеряют объем экстракта, переносят полученный раствор в кювету и фотометрируют его при длине волны 450 нм. По измеряемому значению оптической плотности раствора рассчитывают содержание каротиноидов в пробе желтка с использова 1721505нием калибровочного графика, построенного по чистому В-каротину, азобензолу или бихромату калия с учетом объема экстракта по формулеС=Мгде С - концентрация каротиноидов в пробе, мкг/г;Е - концентрация каротиноидов в экстракте, найденная по калибровочному,графику, мкг/мл;У - . объем экстракта, мл;. М - йавеска пробы желтка, г.П р и м е р, Объемное соотношение ацетона и этилацетата (10:ОН 4:6), навеска пробы образца желтка 500 мг, пробу перетирают с 5 г йа 4 Р 207, экстрагирование осуществляют 10 мл смеси ацетона с этилацетатом в течение 1-2 мин, а промывание пробы - порциями смеси, указанных растворителей по 10 мл. Определение оптимальных соотношений компонентов смеси ацетон - этилацетат при экстракциикаротиноидов из курйного желтка приведено в табл, 1.14 з данных табл, 1 видно, что оптимальным является объемное соотношение ацетона и этилацетата от 7:3 до 9;1, поскольку при этих соотношениях для полного выделения каротиноидов из пробы достаточно проведения двукратного экстрагирования, что сокращает время проведения анализа, при этом повышается точность анализа (коэффициент вариации между параллельными определениями не превышает 2,15 ) за счет того, что предлагаемая смесь органических растворителей, смешиваясь с влагой, содержащейся в пробе, не образует помутнения.Результаты определения оптимальных соотношений проба:фосфаты щелочных металлов приведены в табл. 2.Из данных табл. 2 видно, что с учетом совокупности всех предлагаемых для использования фосфатов щелочных металлов оптимальным является соотношение проба:фосфат(1,33:10)-(3,04:10). При этом полное выделение каротиноидов из пробы достигается в результате двукратного экс трагирования, Кроме того, использованиев качестве соли минеральной кислоты фосфатов щелочных металлов позволяет примерно в 3 раза сократить время экстрагирования каротиноидов за счет сокраще ния времени коагуляции белков солями сболее высокой ионной силой,:ем в известном способе. В табл. 3 и 4 приведены сравнительные15 данные по длительности и точности анализапо предлагаемому и известному способам.Из данных табл, 3 и 4 видно, что времяпроведения анализа сокращается с 60до 20 мин за счет исключения операций20 обезвоживания и фильтрации от гча 2304,точность анализа возрастает с 8 - 10 до 1,5 -2,0 .Таким образом, предлагаемый способопределения каротиноидов в яичном желтке25 позволяет в 4 - 5 раз повысить точность и в 3раза сократить время проведения анализа,Формула изобретенияСпособ определения количества каротиноидов в яичном желтке, предусматрива 30 ющий отбор пробы, обработку пробы сольюминеральной кислоты, экстрагирование обработанной пробы органическим растворителем, фотометрирование экстракта придлине волны 450 нм с последующим оп 35 ределением количества каротиноидов висследуемой пробе с использованием калибровочного графика, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью повышения точности исокращения длительности анализа, в каче 40 стае соли минеральной кислоты используютфосфаты щелочных металлов в соотношении проба: фосфат 1,33:10-.3,04:10, а вкачестве органического растворителя используют смесь ацетона с этилацетатом в45 объемном соотношении 7:3 - 9:1,1721505 Табли 9 а 15,0 4,0:6,0 1 О;О 8;г Соотношение ацетон;этилацетат 0,21 0,14 О, 19 0,14 0,16 0,20 . 022 0,15 0,15 0,26 97,5 96,0 95,2 95,6 96,4 97,8 98,1 98,1 98,2 93,4 Количество эхстракций, необходиноедля полного извлечения каротиноидов 2 3 3 4 2 2 Коэффициент вариации между параллельными определениями, ь 1,98 2,15 2,88 3,15 3,62 3,72 2,33 2,01 2,13 1,97 П р и н е ч а н и е.Кв д, -где А, - оптическая плотность первого экстракта;АеА " оптическая плотность второю экстракта.е Таблица 2 СООтНОЩЕНИЕ Иееооэжелток 1 Оэо,0,34 0,28 0,25 0,23 0,26 0,29 0,31 0,35 85,3 85,3 88,9 853 80,1 70,3 900 90,3 91,1 Интервал оптимальногосоотношения обеэвожиеаащего вещества сжелткон 10 офО 7 100 3 Соотношение ВаьРеот.желток 1 О;0,7 0,24 0,16 97,5 0,16 0,16 Ку 2и 0,20 90,0 0,30 0,1597,82 0,9 96,4 91,1 93,93 975 9752 2 Интервал 10.1,2-10:3,3 Соотношение ИааРз Отх10 Нзоэжелток 010,70 10:0,90 1 О:1,21 10:1,57 10:1,70 1 О:3,04 10:523 027 0 25 016 0,15 0,1597,7 97,72 2 Кз Ие О, 1697,52 0,20 92,2 93,94 4 95,9 97,52 10:1,21-0:3,04 Интервал СоотношениеИаэРОэ,желток 0,29 Кэ2 О,8 . О 21 0,28 0,26 0,15 01597,82 91,6 97,8 97,2 95,6 922 93,34 2 2 3 10;1,33-10:3 56 Интервал 10 э 3690,2792,2 1 О:0,49 1 О:1,27 10:1,81 10:2,23 024 0,14 011 012 93,9. 98 2 98,8 98,510;1,27"10.3,30 10;2,960,1597,8 1 О:3,300,1897,2 Соотношение К НРОЭ.желток Р024 О 7 О 15 0,17 0,27 Кэиз, 2 10: 1,О 1- 1 О;3,69 93,9 97,3 97,8 973 93 2 2 2 4 Интервал КоэфФициент экстракции, КэКоличество каротиноидов, извлеченноеза две экстракции,Коэффициент экстракции, КэИзвлечение веществаэа две зкстракции,ие 2Количество экстрак"цнй, необходиных дляполного извлечениякаротиноидов, п Соотношение МвЭРОа2 И О:желтокКИИнтервал 10:0,9 10;1,2 1 О;1,5 10:1,8 10:3,3 10:5,2 10:8,4 0:0,55 1 О:0,98 1 Оэ 1,33 10:2,43 103 56 10:6,57 10:8,53 1 О;062 О;1,01 1 О:2,05 1 О:3,69 10;5,201721505 Таблицащ,.е е.вит .щ вшит .вета 3 Операции Длительность операции, мин июиИзвестныйспособ Предлагаемыйспособ Взвешивание и растирание в ступке Экстракция каротиноидов 10 Фильтрация Высушивание с НаВО 30Фильтрация 5 Фотометрирование 5 Таблицаю т Использованный припроведении анализаФэсфат Способ Количество определений Содержаниекаротиноидовв 1;г желтка,мкг24,6+ 0,41 23,2+ 1,61 23,9+ 0,26 20,4+ 2;96 24,2+ 0,34 20,1 + 2,21 24,1 + 0,46 19,7 + 2,04 1 а 4 РО 10 Н О ПредлагаемыйИзвестныйПредлагаемыйИзвестный 10 10 1 аЭРО+ 10 10 Предлагаемый Иа РО 12 Н О 10 ИзвестныйПредлагаемыйИзвестный 10 10"аг"РО 4 10 Составитель Ю. СкарбовРедактор И. Шмакова Техред М.Моргентал Корректор Т, Малец Заказ 949 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101