Способ моделирования гиперкоагулемии

СО)ОЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 9 В 23/2 55 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ МУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ К АВТО(71) Лаборатория медиИнститута кибернетик(56) Зубаиров Д.М, Бикрови, М., 1978, с,161 нской кибАН ГССРкиаш вили рнетики В,П,Беия св ыван ИПЕРвозможностеи крови чество введенного болопрепарата почти в 20 раз ГОСУДАРСТВЕ ННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР Авторское свидетельство СССР1336088, кл, С 09 В 23/28, 1985.) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНАГУЛЕМИИ Изобретение относится к эксперментальной медицине и биологии, а именно к способам моделирования заболеваний внутрисосудистого свертывания крови, и л 1 ожет быть испрольэовано в мед )ко-биологических целях в качестве теста для определения функциональных возл 1 ожностей крови,Известен рефлекторный способ моделирования внутрисосудистого свертывания крови путем прямого активирования контактной фазы однократным внутривенным введением хлористоводородного адреналина в количестве 0,5 мг/кг Длительность ГК-состояния 15-30 мин с пиком на 5 мин после введения препарата. Процесс сопровождается возрастанием тромбоцтарного материала из эндотелиальных клеток и троекратным увеличением активности тромбоцитарного фактора, причем активность(57) Изобретение относится к экспериментальной медицине и биологии и может применяться при моделировании гиперкоагулемии. Цель изобретения - повышение воспроизводимости способа, приближение модели к естественной патолог и и повышение длительности гиперкоагулемии. Животному однократно внутрвенно вводят высокодсперсные частицы магнетита размером 8-15 нм, допированные атомами кобальта иэ расчета 7-15 ма" в количестве 0,05 - 0,5 г/кг массы при рН 7,0- 8,0 со скоростью 0,02-0,05 г/м) н. , зоС ретение может быть исгользоэано в ачес;ге теста для определеня функциснальнь л тромбоцитарного фактора видетельст.,ет об активации фактора Х 3.Недостатками способа являются н; зкзс воспроизводимость и малая продолж -е-ьность ГК. Это связано с быстрой ЕГра э цией хло ристоводо родного адре на.; на и ее захватом клетками ретикулоэнд,елальной системы, в результате чего они исчезают из кровеносной системы. Кроме того. хлористоводородный адреналин активно действует на л 1 ногие функциональные звенья организма, регулрующе процессы кровообращения (усиление и учащение сердечных сокращений, расширение коронарных сосудов, сужение артериол и капилляров и др.), что затрудняетнтерпретацию причинно-следственных сьсэей модели,При этом колигически активногоатомами кобальта иа раската 7-15 мас.,6 в са превышает норму (в норме 30 нг/мл адреналина), что нарушает физиологическое состояние организма.Наиболее близким к предлагаемому способу является способ моделирования ГК путем внутримышечного однократного введения ботулинического токсина типа "С" в дозе 2,2-2,5 мышиных ЛД 5 о/кг тела. При этом ГК длится 24-48 ч и наступает спустя 6-12 ч после введения препарата, медленно нарастая.Однако процесс идет с огромным зкэогенным токсикозом, так как повреждаются все ткани организма, включая кровеносную систему. У животных возникают длительные лихорадочные состояния, мышечная слабость, парезы туловища и кснечностей, резко угнетается фагоцитоз, Все это приводит к частой гибели животных, которые погибают через 1-3 су; при явлениях диспноз, вследствие чего воспроизводимость способа невысокая, модель сильно зависит от чувствительностиного и сверхтонкой дозировки, так как 10мл токсина приводит к мгновенной гибели животного. Процесс развития ГК протекает эа счет реакции сосудистой системы в ответ на интоксикацию, минуя естественныи и ключевой пункты внутренней свертывающей системы - контактный фактор свертывания Х 1 и гепатоциты, иэ которых начинается путь фибриногена, Все эт-. выключает иэ рассмотрения важные звенья свертывающей системы, в, альных условиях обеспечивающие включение свертывающей системы (адсорбция и ак, вация фактора Х 11), пролиферацию и транспорт фибриногена, т.е. модель неестестве на и недостаточно общая.Кроме того, анализ модели усложняется тем, что отсутствует возможность управления процессами распределения и накопления активного агента. а также виэуализирования и локализирования его, не нарушая жизнедеятельности организма. Контроль ГК возможен только по биохимическим анализам, которые при остро протекающих клинических проявлениях дают трудно идентифици Пемые результаты.Целью изобретен,1 я является повышение воспроизводимости способа, приближение модели к естественной патологии и повышение длительности гиперкоагулемического состояния. Способ осуществляют следующим образом,Лабораторному животному внутривенно вводят высокодисперсные частицы магнетита размером 8-15 нм, допированныв 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 количестве 0.05-0,5 г/кг массы при рН 7,0- 8,0 со скоростью 0.02-0,05 г/мин.Готовят водный коллоидный раствор феррита кобальта Со,Гездисперсно- стью 8-15 нм, для чего берут 10,4 г хлорного железа ГеС 1 з 7 Н 20 и растворяют в 100 мл дистиллированной воды, аналогично берут эакисное сернокислое железо Ге 50 лбН 20 и двуххлористый кобальт СоС 122 Н 20 общей массой 5,6 г, причем количество железадолжно превышать количество кобальта 1), и также растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Затем берут 10,0 г гидроокиси натрия ьаОН и растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Растворы трехвалентного и смеси двухвалентного железа с двухвалентным кобальтом смешивают и медленно капельно переливают в раствор гидроокиси натрия, непрерывно перемешивая смесь. На дно выпадает темный осадок кристаллов феррита кобальта. Полученный осадок декаптацией промывают дистиллированной водой до рН 7,0 - 8,0. Далее раствор фильтруют через двойную фильтровальную бумагу и пасту феррита кобальта массой 4,8 г переносят в сосуд и доводят объем дистиллированной водой до 50 мл, т.е. в 1 мл находится 0,1 г высокодисперсного феррита кобальта или 10 -10 част. Полученную15 16коллоидную суспензию набирают в шприц в количестве 0,5-5,0 мл и вводят внутривенно медленно в течение 1-5 мин иэ расчета 0,05-0,5 г/кг массы животного.Через 0,5-2,0 мин после введения наблюдают первъе признаки ГК-состояния: время свертывания крови 4-8 мин, время кровотечения 20-55 с, протромбиновый индекс 40-6075, тромбоциты 40-70 , В дальнейшем на протяжении двух-трех суток уровень ГК остается стационарным, после чего наблюдается монотонное снижение этого уровня в течение 24-72 ч до нормы. Клиническая картина беэ отклонений. Сердечно-сосудистая система, выделительные органы, дыхание и ориентация животного в пределах нормы.Таким образом, модель гиперкоагулемического состояния воспроизведена с первой минуты после внутривенного введения препарата, функционировала 72 ч с признаками ГК без отклонений в клинической картине состояния животного.Высокодисперсные частицы магнетита размером 8-15 нм, допированные атомами кобальта, введенные внутривенно, функционируют в кровеносной системе 24-48 ч, что подтверждено методом ферромагнитного резонанса и электронно-микроскопически. В дальнейшем частицы перераспределяютв печени и селезенке, причем внешниммагнитным полем напряженность до 5 кАlм имеется воэможность регулировать это перераспределение, удерживая частицы в заданном месте, Геометрические размеры используемого вещества соизмеримы с биологическими молекулами, что позволяет отнести их к промежуточным между инородным телом и биосовместимым материалом, Обладая высокой поверхностной энергией, они адсорбируют контактный фактор Х, вызывая его активацию и запуск всей цепи биохимии свертывания крови, Имея столь малые размеры, комплекс частицы - фактор ХИ остается соизмеримым с размерами пор и каналов микроциркуляторного русла, вовлекая в рассматриваемую модель все уровни кровообращения. После исчезновения частиц иэ кровеносного русла ГК поддерживается частицами, аккумулированными в клетках РЭС. Через определенное время частицы переносятся в гепатоциты. причем процесс этот можно наблюдать электронно- микроскопически, В связи с тем, что концентрация высокодисперсных частиц определяют активность фактора Х, то по концентрации можно суд 1 ть о степени ГК.Разработаны остальные приемы способа; скорость внутривенного ввления препарата в организм, диапазон лопирования магнетита атомами кобальта, диапазон рН.Повышение воспроизвол 1 глости способа достигается внутривенным одноразовым введением вьгсокадисперс а;о магнетита размером 8-15 нм допироа.нога атомами кобальта, так как ьещестао именно такого размера вызывает 100-ную актиеацию контактного фактора Х, цеглу, кроме геометрических размеров, спаса:стауют потенциал поверхности (агтигл, л СН еы е изозлектрической точки) и п.,маснье л"- бавки атомов кобальта. При 5 лжен,1 е глодали к течению естественной патологии достигается активацией естественного фактора Х инороднымтелом, соизмеримым с биологическими молекулами и размерами пор и каналов на уровне микроциркуляции, физиологическим диапазоном рН, полной химической инертностью препарата в биосреде и отказом от всех повреждающих факторов (механическое, хиглическае, электрическое и другие воздействия). Повышение длительности ГК достигается медленным введением препарата и допированием магнетита атомами кобальта, а также размерами частиц, так как мелкие частицы дольше находятся в кровеносной системе, поддерживая ГК, и менее токсичны. Быстрое введение приводит к тромбозу и, возможно, гибели животного. 5 10 15 20 25 30 35ч 45 50 55 П р и м е р 1. Готааст волна е раатасрлсолей двух- и треквален гна о. е л (3 6 гРе 504 и 10,4 г ЕеСз в 100 мл лн-.ти 1 л,1 равзнной воды каждый), прицег 1 в раста р лаухазлентного железа лабавлягат 2 0 г СоСзРастворы сливйют и осаждают в избытковщелочи (10,0 г йаОН в 100 мл л стиллираванной воды). Осадок промывагот листиллированной водой до рН 7,5 и фильт суют черездвойную фильтровальную бумагу. Пат уце- ную массу объемом 20 мл (4,8 т Сс,Гез-,Ол,остальное вода) переносят в сосуд и дистиллированной водой доводят объем до 50 мл.Данную коллоидную суспензию набирают вшприц в количестве 0,5 глл и веалят белымбеспородным крысам весом 160 г внутривенно медленно в течение 1,0 гл 1 н. Через 30с после введения и;.егарата наблкла отпризнаки ГК: время крсаатецения - 35 с,время свертывания кГ ав 5,5 мин, про рам.биновый индекс 47 Ч., тГ амбоциты 54%. Такие показатели наблюла от 72 ц и в течениесуток они линейно переходят в норму. ;инические показате;н в па лелас нормы.Выбранные показатели иса 1 ел,сглыпризнаков по пригл-;у 1 - каснтсацг чдисперсной фазы, с агаГа:тъ аа -,-н.1,приводят к четко ас; . -цнс,га, - 1 н ГКкоторая длится цет г,а с, та:,1 вызывая тРЕЗКИХ ОтКЛОНЕНИй а Уг Ц Зн.1 сааацпИ СРганизма,П р и м е р 2, По т;"гл-:.;1 аут Г, а; н г. абелой беспаралнсй гс.-; гас.м 80 т вводят коллаиднуюсусз; гз в ъа ; ча; ье 0мл с рН 8,0 в 1 ец.г . , ми- Чс;после введения .".-;.-.кт и, аги ГК:время краьатецег.:, а. - "- са:.Стывания крови 4 мин, г . .; -г 1 на: а,. инл40; трглбаци ь .тг д па;- 1-наблюдаютчетве;:,:, ас,.-: а с - .тс ение 1,5 сут отг,ецак,т и:Гсад а г сцаглу. Отк 1 оччглй д г 1 игл 1"- - "т 1нУаксиглзлъчые з з .н пс, -накса ко.лицество введенного г се;,а,".атз ." 5 гкг, рН8,0, скорость введеня 0, 5 г/гл" г, снаолятк выраженной картив ГК б:3 ат;,снения вклинической картине и вазн 1 кновениятромба,П р и м е р 3, Па пГг. ру 1 внутривенно белой беспородной к, ь.се весом 180 г введено 0,1 мл коллоиднай суспензии ультра- дисперсных частиц феррита кобальта при рН 7,0 в течение 0,2 мин. Через 2,0 мин наблюдают картину ГК: время кровотечения 55 с, время свертывания крови 7 мин, протромбинавый индекс Е 0, тромбоциты ббг, Такие показатели наблюдают 24 ч с переходом в норму в тецение 12 ч. Клинических отклонений от нормы нет.1707618 ФМР-контроля эа процессами перераспределения и магнитной локализации дисперсной фазы; используемое вещество можно длительно хранить беэ применения специальных мер предосторожности, легко получить в лабораторных условиях. Формула изобретения Составитель М, АхалаяТехред М.Моргентал Корректор Н. Ревская Редактор Л, Гратилло Заказ 268 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно.издательские комбинат "Патент", г, Ужгород, ув.1 егарина, 101 Минимальное значение признаков способов приводит к ГК-состоянию, однако его количественное выражение снижается.Использование предлагаемого способа моделирования гиперкоагулемии по срав нению с существующими упрощает процесс моделирования за счет применения в качестве активного вещества высокодисперсных частиц стандартного размера, формы, известными и легко контролируемыми фи зико-химическими характеристиками; повышает воспроизводимость способа за счет использованиявеществ, которые избирательно взаимодействуют с контактным фактором ХИ свертывающей системы крови, 15 обеспечивая этим естественное функционирование модели.Кроме того, появляется возможность включения в рассмотрение микроциркулярного русла кровообращения за счет ма лых размеров этих частиц; имеется возможность непрерывного визуального и Способ моделирования гиперкоагулемии, включающий введение химических веществ лабораторному животному. о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью повышения воспроизводимости способа, приближения модели к естественной патологии и повышения длительности гиперкоагулемического состояния, однократно внутривенно вводят высокодисперсные частицы магнетита размером 8-15 нм, допированные атомами кобальта иэ расчета 7-15 мас,6 в количестве 0,05 - 0,5 г/кг массы при рН 7,0-8,0 со скоростью 0,02-0,05 г/мин,