Способ определения активных красителей в крови

СОЮЗ СОВЕТСКИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 5 О(ДВ зц 5 01 М 33/4 ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТРИ ГКНТ СССР ЯМ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ О МУ С В ИДЕТ ЕЛ Ь СТВ АВТ Нием при 8000 об/ми н центрифугат упариваю еление активных красите 6 С и черного К в подготовл оводится методом тонкосл афии,е формулы красителей; й ярко-красный 6 С трифугирова течение 15 ми0,5 мл, Опред ярко-красного ных пробах пр ной хроматогрСтруктурн 1, Активнь я к медиц дованиям, ологии иичественн телей в кр е относит им иссле ой токси но для ко вных крас Изобретени токсикологическ ности санитарн быть использова т до лей в част- можетого опови,ен- ойеделения акти,-( си=( едующим о Способ осушествляется с азом Пробы, содержащие 1 мл енных краслтелями крыс, з мл диметилфармамида с пос ячением 1 мин. После удалекрови затравкстрагируют 2 ледующим киния белка цен(21) 4763461/14Г 22) 2811 8946) 07.12.91. Бюл, й 4571) Пермский политехнический инсти:. ут(57) Изобретение огносится к медицинскимтоксикологическим исследованиям и можетбыть использовано для количественного определения активных красителей, Цельюспособа является повышение чувствительности и специфичности способа, Способ позволяет определять количествокаждого из красителей ярко-красного 6 С ичерного К. в крови при одновременном ихприсутствии в организме за счет полного их Цель изобретения - повышение чувст- витальности способа и специфичности способа,извлечения из биосубстрата и повышения специфичности разделения красителей. Количественное определение красителей в крови проводится предварительной обработкой проб диметилформамидом с последующим кипячением в течение 1 мин, упариванием до обьема 0,5 мл и проведени-. ем тонкослойной хроматографии на пластинках с широкопористым силикагеле, (силуфол). Хроматография проводится путем нанесения проб крови после поедварительной обработки на пластинку с последующим элюированием в хроматографической системе изобутиловый спирт - диметилформамид - вода в объемном соотношении 11;3:11, а количество активных красителей определяют по калибровочному графику путем сравнения площади разделенных пятен с эталоном. Чувствительность способа 0,01 мг в пробе, точность 96,0 + 3,0%, 5 табл,.ИО С, О-,.45 Ча Анзлизируемы 8 пробы наносят нз пластинки с широкопористым сликагелем силуфол) и для элюирования пластинку помещаот в стакан с хроматографической системой изобутиловый спирт - диметилформзмид - вода в объемном соотношении 11.3:11. Процесс элюировзния занимает 1 ч Затем пластинки вынимают и подсушивак)т С помощью планиметра измеряют площади окрашенных пятен нз пластинке, Количественное определение красителей осущесгзляют по калибровочному графику путем сравнения площяди получ 8 нных рязГелен" ных пятен с эталоном. Для этого строится кзлибровочн ыйл график - эталон,Кзлибоовочный график строится следуощим образом, Пробь крови контрольных жиВотных Объемом 1 мл экстрзгируют 2 мл диметилформямида, содержащего различные концентрации активных красителей ярко-красного бС и черного К с последующим кипячением в течение 1 мин. Велок удаляют центрифугирование при 8000 об/клин, а пробы упзривзют до объема О,Ь мл. На пластинку с широкопористым силика, елем нанося предварительно обрабоянные пробы крови, содержащие красители активный ярко-красньй бС и черный К В различных концентрациях, Пластин:у помещают В хромзтографическую систему изобутило. Вый спирт - диметилформзмид - вода в объ" емном соотношении 11:3;1, Процесс элюирОВзния ззнимяет, ч, Затем с грояграфик зависимости площздл полученных пятен на пластинке гт концен.грации краси" теля.В предлагаемой хроматогрзфической сист 8 ме изобутиловый сг 1 ирт - диметллфсрмзмид - Вода анализируемые красители сбладают различной подвижностью Щ, и результате чего повьшается специфичность разделения двух соединений и чувствительность, что позволяет количественно определять эти красители при одновременном ихприсутствии В крови,В табл,1 приведены значения подвижности анализируемых красителей в хрома 5 тогрзфической системе изобутиловь.й спирт- диметилформамиц - вода в обьемном соотношении 11,3:11 и в этой же системе придругих объемных соотношениях, а также вИЗВЕСТНОЙ СИСТ 8 ме,10 Предварительная экстракция проб крови диметилформамидом с последующим кипячением В течение 1 мин позволяет болееполно Выделить красители иэ крови, что повышает чувствительность способа.15 В табл,2 представлен выбор оптимального растворителя для экстракции активныхкрасителей ярко-:рзсного бС и черного К изкрови,В табл,3 представлен выбор оптималь 20 ного Времени кипячения проб крови для денатурации белков крови,В табл,4 представлены нормы точностиизмерений предлагаемого способа.В табл,5 представлены данные по срав25 ненио чувствительности предлагаемого иизвестного способов,Технико-экономическая эффективностьпредлагаемого способа по сравнению с известным состоит в том, что он позволяет30 раздельно определять активные красителиярко-красный бС и черный К при одновременном их присутствии в крови затравленных животных с заданной степеньючувствительности и точности определения,35 что позволяет использовать его для проведения санитарно-токсикологического контроля и исследования. Формула изобретения 40 Способ спределения активных красителей в крови путем экстракции органическим растворителем и последующего разделенияметодом тонкослойной хпоматографии, о т л1697005 ичающийся тем,что,сцельюповышения чувствительности и специфичнос;и способа, экстракцию проводят диметилформамидом с последующим кипячением в течение Таблица 1 По вижность сое инений Я 1Активный ярко-красный 6 С Активный черный К Хроматографическая системаП е агаемая система 0,42 0,54 0,60 0,42 0,60 0,40 Нет разделения (все красители в одном пятне)Известная система Нет разделения, идут с фронтом растворителя Таблица 2 аблицаЗ Из обута нол-диметил-фармамид - вода (11;3:11) Изобутд нол-диметил-формамид - вода (12:3:11) 9:3:1 11 мин, осаждают белки, центрифугируют и упаривают супернатант, а разделение проводят в системе изобутиловый спирт - диметилформамид- вода в соотношении 11:3:11,1697005 абг 1 ица Доверительинтервал ОДЕЛ Е,.1 ИС 1 М 1 Задан на 1 г. концеггграоил ве. ЩЕСтеа М 1/г 1 У" еществ Активный рко-красны 6 СХ 02 11,642,50 Активныйчерный К а блица 5 1 п рвдел Известного Предлагаемого Известного