Способ получения метафазных хромосом клеток крови животных

645297 А 1 се (О 122150 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН К ТОР СКОМУ ая академия Каров, З.Н. Г,И.рчен ьные вопросьиагностики жив4,твенныхМВА, 1 ование хрБюп ов(56) Иутузкин Л,И. Актуэтиологии, патогенеза гнеоплазий сельскохозяйсиых. Сб. научн. трудовс. 33-39.Калгыкова Т.П. Исслесом соматических клетокВИЭВ, 1980, 9 39, с., 56 зобретение относится к в частности к цитогенетикезяйственных животных, и иожприменение при проведении цического анализа животных длхромосоиных нарун, привснижению продуктивности.Цель изобретения - повышда метафазггых хромосом.Для реализации способа ипитательную среду следующегсреда 199 18-22 мл; фитогнин 1,7-2,2 ил; пенициллинстрептомицин 5000 ед; кровьмого животного 15-25 ил; осдо 100 гш среда Пгпа и допопроводят обработку прп (-1)в течение 12-15 мин(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕТАФАЗННХ ХРО 110 СОИ КЛЕТОК КРОВИ ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к биологиив частности к цитогенетике сельскохозяйственных животных и может найтиприменение при проведении цитогенетического анализа животных для выявления хроиосомных нарушений, приводящихк снижению продуктивности. Целью изобретения является повышение выходаметафазных хромосом. Для этого клетки крови животных культивируют на среде, содержащей фитогемагглютинин,стрептомицин,пенициллин, среду 199,среду Игла, а перед внесением колхицина выдерживают в течение 12-15 мин пр(-1) в (+1) С. 6 табл. П р и м е р 1. Из яремной вены животных берут кровь в стерильные пробирки. 15-25 мп крови вносят в питательную среду следующего состава: среда 199 18-22 мл; ФГА 1,7-2,2 мл; пенициллин 10000 ед; стрептомицин 5000 ед; остальное до 100 нп среда Игла. По 10 мп смеси помещают в культуральные матрасы и инкубируют 72 чпри 37,2 С. Через 20 ч после начала культивирования проводят холодовую рбработку, ставя матрасы с культурой на лед 12-15 мин, Затеи продолжают культивирование при 37,2 С. Нао 68 часу культивирования вносят колхицин 0,3 мкг/ил (на 1 ил смеси) дпя накопления митозов. После окончания культифирования смесь переносят1645297 Исходя из данных табл. 1, видно, что митотический индекс культур клеток крови животных по предлагаемому способу вваае и составляет 20,4+0,45, по прототипу 14,0+0,37. Это говорит о наличии наибольшего числа делящихся клеток, культивируемых предлагаемым способом, необходиыас для анали 25 за кариотипа исследуемых животных.Для получения оптимального варианта среды, используемой для получения наибольшего количества митозов, приводят пять примеров различного состава среды и различных параметров обработки.В каждом препарате просматривают не менее 2000 клеток, учитывая число клеток, находящюсся в состоянии митоза. Показателем активности деления 35 клеток служит митотический индекс, т.е. отношение числа клеток, находящихся в митозе, к числу исследованных клеток, выраженное в промилле, Полученныерезультаты обработаны ста тистически по Рокицкому.В следующих примерах последователь. ность обработки материала аналогична примеру 1 еП р и м е р 2. Среда 199 15 мп; 45 ФГА 1,5 мп; пенициллин 10000 ед;стрептомицин 5000 ед; кровь 10 мл;остальное до 100 мп среда Игла.ТМитотическвя активность кулкрови животных Способ получения метафазных хромосом клеток крови животных; включающий забор крови, культивирование ее на питательной среде с последующим внесением колхицина, гипотонизацией, фиксацией и окраской, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения выхода метафазных хромосом, кровь берут в количестве 15-25 мп, культивирование проводят на среде следующего состава; среда 199 18-22 мл; фитогемагглютинин 1,7-2,2 мп; пенициллин10000 ед; стрептомицин 5000 ед; среда Игла до 100 мл, а перед внесением колхицина культуру клеток в тече ние 12-15 мнн выдерживают при (-1)- (+1) С.аблица 1ьтур клеток Иитотический индекс, промилле Количествоо нсследоваииихклеток Способ оличесто клеток делении 140 14)0+0,37204 0,4+0,45 Прототип 10 000 Предпагвеэый 10 000 в центрифужные пробйрки и центрифугируют в течение 10 мин при 1000 об/мин.Надосадочную жидкость сливают, а осадок ресуспендируют в 5 кп гипотонического раствора КС 1 20-25 мин. Затем клеточную суспензию вновь центрифугируют и осадок проводят триждычерез фиксатор (метанол:уксуснаякислота, 3: 1), осаждая клетки центри Офугированием в прежних режимах. Когда осадок станет чистым, добавляют2-3 мл фиксатора и каплю такой суспензии наносят на влажные предметныестекла. Готовые цитологические препараты можно окрашивать. П р и и е р 3, Среда 199 18 мл;ФГА 1,7 мп; пенициллин 10000 ед;стрептомицин 5000 ед; кровь 15 мп;остальное до 100 цл среда Игла.П р и и е р 4, Среда 199 20 мл;ФГА 2 мл; пенициллин 10000 ед; стрептомицни 5000 ед; кровь 20 мл; остальное до 100 мп среда Игла,П р н м е р 5. Среда 199 22 мл;ОГА 2,2 мл; пенициллин 10000 ед;стрептомицкн 5000 ед; кровь 25 мл;,остальное до 100 мл среда Игла.Исходя из данных, наиболее оптимальной средой является среда из примера 4. Иитотическая активность культуры клеток в данной среде при обработке от (-1) до (+1) С в течение12-15 мин достигает 30, 5+1, 23.В средах примеров 3 и 5 митотическая активность культур средняя и достигает 23,0+1,07 и 19,5+0,99, Минимальная активность культур наблюдается в средах примеров 2 и 6 17,0+0,92,Формула изобретения645297 Таблица 2 Иитотическая активность культур клеток крови животныхна данной среде при различных параметрах обработки Температура, С Время, мин 5 10 12 15 20 13,0+0,81 12,5+0,80 15,0+0,87 10,0+0,7 Ф 9,5+0,69 12 эООэ 77 15,00 э 87 14,0+0,84 15,0+0,87 8,0+0,63 Таблица 3 Иитотическая активность культур клеток крови животныхна данной среде при различных параметрах обработки Температура, С 5 10 12 15 20 16,5+0,91 18 э 0+0,95 13,5+0,82 23,0+1,07 13,5+0,82 9,5+0,69 10,0+0,71 10,0+0,71 16,510 э 91 13,0+0)8 1 Таблица 4 Иитотическая активность культур клеток крови животных на данной среде при различных параметрах обработкиТаблица 5 Иитотическая активность культур клеток крови животных на данной среде при различных параметрах обработки4 Ъ Таблица 6 1645297 Иитотическая активность кульгур клеток крови кивотных на данной среде при различных параметрах обработкиЗаказ 1322 Шрамик 380 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по иэооретениям и открытиям прн ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издателъскиЯ комбинат "Патент", г.укгород, ул. Гагарина, 101