Способ регенерации растений в культуре ткани

(504 А 01 аВОСЮЗНАЦ 1 И-,3 Х;г 1 аЦ ,"ь Я ;", т ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ СВИДЕТЕЛЪСТВ У ВТОРСН тиАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ(56) КгапЕ - Каяо 1 Маг 11 апа, Ле 1 аяЕа81 Ьд 1 а, Бегтпап ОгаяЕо. 1 яорегохЫаяеяеаг 1 у 1 пд 1 сасогя оЕ яошаг 1 с ИИегеп 1 ас 1 оп 1 п рцшр 1 с 1 п С 1.яяце. - АсСаЬог, сгоаг., 1982, 4 1, р, 33-39;(54) СПОСОБ РЕГЕНЕРАЦИИ РАСТЕНИЧ ВКУЛЬТУРЕ ТКАНИ(57) Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в биотехнологии для отбора новообразований со стеблевым типом развития, для определения срока готовности зксплантата к регенерации, атакже выяснения вопросов Фцзиологобиохимического регулирования процессов органогенеза. Целью изобретенияявляется ускорение и упрощение процесса. Культивируют недиФфереццированную ткань и определяют наличие вцей специФического для стеблевоготипа развития Фермента. Наличие амилаэы определяют визуальцо по изменению окраски крахмала. Лля дальнейшего культивирования отбирают ткань,содержащую Фермент - амилазу. В случае отсутствия активности Ферментанаблюдается корнеобразовацие или ростнедифФеренцированной ткани. 2 табл.Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в биотехнологии для отбора новообразований со стеблевым типом развития, для определения срока готовности эксплантата к регецерации, а также выяснения нопросон физиолого-биохимического регулирования процессов оргацогецеза. 10Цель изобретения - ускорение и упрощение процесса.П р и м е р. Для пересадки на среду для регенерации используют новообразования, полученные при культиниро нации ца первичных средах пыльников тритикале, зародышей пшеницы, ячменя и завязей люцерны, Каждое высаживаемое ца среду для регенерации новообразование подвергают определению ак тивности амилаэы по следующей методике.Ввиду того, что абсолютная величина для отбора це играет роли, а важно лишь ее наличие, обнаружение ами лаэной активности осуществляют визуально по изменению темно-синей окраски за время инкубации н одном повторении. Для этого от каждого отдельного новообразования стерильно беэ 30 взвешивания отделяют часть (достаточно 10-20 мг) и помещают в пробирку с 1 мл 0,17.-ного раствора крахмала (растворимого). Контрольная пробирка содержит тольКо раствор крахмала. Все пробирки вместе с коцтрольной инкубируют ца термостатиронанцой воодяной бане при 45 С в течение 20 миц, После ицкубации но все пробирки добавляют пипеткой по одной капле 27- 40 ного раствора йода. Наблюдаемое визуальное изменение темно-синей окраски крахмала в контрольной пробирке до бледно-голубой или чаще грязно-белой в опытных свидетельствует о наличии высокой активности амилаэы в соответствующих новообразовациях. Новообразования, н частях которых обнаружена активность амилазы, впоследствии на среде для регенерации дают растения. В случае отсутствия активности наблюдают корнеобразование (ризогенеэ) или рост недифференцированной ткани.Результаты опытов представлены в табл. 1 и 2. Ланные показали, что по наличию амилазной активности можно отбирать для пересадки на среду регенерации новообразования, дающие впоследствии стеблевые почки, раэвинающиеся в растениях,Проведенные исследования показали, что предлагаемый способ регенерации растений позволяет удешевить и ускорить процесс за счет выбраковки новообразований, не дающих растения, а также за счет определения времени пересадки на среду для регенерации.Формула изобретенияСпособ регенерации растений в культуре ткани, включающий первичное культивирование недифференцированной ткани определение наличия в ней специфического для стеблевого типа развития фермента и отбор для дальнейшего культивиронания ткани, содержащей этот фермент, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения и упрощения процесса, в качестве опре" деляемого специфического фермента используют амилаэу, наличие которой определяют качественным анализом.1380689 Таблица 1Образование стеблевых почек в новообразованияхна среде для регенерации в зависимости от наличия амилазной активностипои пеоесалке Новооб- Амилаэразова- ная акГенотип Тип морфогенеэание тивность Есть Стеблевые почки Нет Риэогенеэ То же Есть Стеблеваяпочка То же Разросшийся каллус Люцерна, сортСмуглянка Нет Есть Стеблевые почки То же Нет Разросшийся каллус Пшеница, сортОбрий Ризогенез То же Есть Стеблевыепочки Нет Ризогенез То же Ячмень, сорт Одесский 100 Нет Есть Стеблевыепочки То же Тритикалепшеничныйгибрид 4-78 Разросшийся каллусТо же131506159 Тд блида 2 Выход растений в здвнсцмостц от наличия амилдзцой активцасти в цовообрдзовдциях прц пересадке нд среду для регенерации (из30 новообразований) Процент новообПолучено растений от новообра- зований Генотип Высажено цовообрдзовдций без ковки гецер,растений активности Тритикалепшецичный гибрид4-78 20 10 19 33 12 18 60 100 16 14 47 16 0 100 Составитель С.Куваева Редактор М.Петрова Техред М,Дидык Корректор А. ЗимокосовЗаказ 1129/4 Тираж 66 1 ПодписноеВ 11 ИиПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, 6-35, Раушская наб д.4/5 Произво;и твсццо-полиграфическое предприятие, г,ужгород, ул.Проектцдя,4 Тритикалепшецичцый гибрид10/1-79Трит,1685/84 Тритикалепшецичцый гибрид 14-79 Трит.1685/84 с дми- без лаэцой амидктив- лазцостью ной с амилазцой актив- ностью ами- лазнойактивности разоваций, не дающих рстений, 7 выбраПроцентсовпаденийдмилазцой активноети с ре