Способ определения токсичности водорастворимых веществ

ОЮЗ СОВЕТСНИ ОЦИАЛИСТИЧРЕСПУБЛИН 19) (11) 4 С 01 И 33/48 БРЕТЕНИ едова огии,сегда 1 аяц197 хс зг ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ ИСАНИЕ И К АВТОРСКОМУ СВИДЕТ(56) Вочее Е.С. ЕНесгз оГсЬешса 1 ро 11 цапйе оп зшаап 1 ша 11, ц.8. ЮТ 13 Р.В. геуУ 241336, ген - СЬашдса 1 аЬ1975, ч. 83, У 127007.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧНОСТИВОДОРАСТВОРИИЫХ ВЕЩЕСТВ(57) Изобретение относится к микробиологии, токсикологии и может бытьиспользовано для биологического контроля за токсичными водорастворимымивеществами, цель изобретения - сокращение времени и упрощение способаопределения токсичности за счет исключения стадии микрофотографирования. Инфузории диспергируют в культуральной средеРегистрируют динамику изменения величин светопропусканиякультуры до и после зкспозиции с исследуемым веществом. Рассчитываютдвигательную активность инфузорийи ее изменение при воздействииИзобретение относится к микробиологии, токсикологии и может бытьиспользовано для биологического контроля за токсичными водорастворимыми веществами. 5Цепью изобретения является сокращение времени и упрощение способаопределения токсичности за счет исключения стации микрофотографирования.Способ заключается в определениидвигательной активности инфузорийпутем диспергирования их в культуральной среде и регистрации динамики изменения величин светопропусканиякультуры до и после экспозиции с исследуемым веществом.П р и м е р 1, Суточную культуруинфузории Тега 11 утепа ругдХоппдз,культивированную на аминопептиднойсреде (0,6% раствор аминопептида и 200,2% раствор дрожжевого экстракта)при 2 С и содержащую в 1 мл 40-60 тыс,особей, помещают в кювету с расстоя"нием между рабочими гранями 20 мм.Кювету устанавливают в правый кюветодержатепь калориметра-нефелометра ФЭКМ. В качестве источникасвета используют лампу накаливанияСЦсо светофильтром, имеющим максимум пропускания при длине волны 301582 мм, В левый кюветодержатель устанавливают кювету с аминансредой.Инфузории перемешиванием дис-.,пергируют в кювете (контроль) и,вращал левый барабан нефелометра,в течение 3 мин после прекращенияперемешивания поддерживают стрелкуизмерительного прибора на "0", регистрируя каждые 10 с значения на шкале светопропускания вращаемого бараСана,Результаты измерений в качестве контроля заносятся в таблицу (см. табл. 1).45Затеи (опыт) в кювету вводят 1,2- -дихпорэтан в концентрации 7,5 мг/мл (7, 5 мг/мл концентрация 1, 2-дихлорэтана, которая в течение 30 мин не приводит к гибели инфузорий). Культуру перемешивают, диспергируют ио помещают в термостат при 27 С на 30 мин, т.е, экспонируют. Затем вновь культуру перемешиванием диспергируют и проводят измерения таким 55 же образом, как и в контроле, т,е. вращая левый барабан нефелометра, Б течение 3 мин после прекращения перемешивания поддерживают стрелку измерительного прибора на "0", регистрируя каждые 10 с значения на шкале светопропускания вращаемого бара" бана. Результаты измерений в качестве опыта занесены в табл. 1.Двигательная активность инфузорий определяется по сумме разниц между соседними значениями светопропускания.Контроль;3,0 + 1,0 + 1,5 + 3,5 + 2,5 ++ 0,5 + 0,5 + 0,5 + 0,5 + 0,5 - 10,0Изменение двигательной активности инфузорий в результате 30-минутного ьоздействия 1,2-дихлорэтана в концентрации 7,5 мг/мл составляет100 - 26 О- д --- д% = 61 5%26,0О р 0При концентрации 7,5 мг/мл 1,2- -дихлорэтан дал снижение двигательной активности на 61,5%, поэтому следующие исследуемые концентрации должны быть больше и меньше 7,5 мг/мпИзмерения в контроле (до введения исследуемого вещества) и в опыте (после введения исследуемого вещества), расчет двигательной активности и ее изменения осуществляют так же, как и при исследовании концентрации 7,5 мг/мл. Исследуют концентрацию 2,5; 5,0; 11 2 и 12,5 мг/мп, Получают соответственно изменения двигательной активности на 31,1 37,9, 64,3 и 82,8% (табл. 2). Получают пять точек, по которым методом пробитанализа графическим путем находят концентрацию 1,2-дихлорэтана, вызывающую 50%-ное снижение двигательной активности инфузорий - 6,0 мг/мп.П р и м е р 2. Постановка опыта, измерения и расчеты проводят так же, как в примере 1, но исследуют другие вещества - диметипформамид и ацетонитрил. Результаты представлены в табл. 2.1257518 Точность метода характеризуетсякоэффициентом вариации (ч 23 ч) 12,4 + 2,27. Формула изобретения Способ определения токсичности водорастворимых веществ путем оценки их влияния на двигательную актив-. ность инфузории ТегаЬувепа ругГойщдз, о т л и ч а ю щ и Й с я тем, что, с целью сокращения времени и упрощения способа, двигательную активность инфузорий определяют диспергированием их в культуральной среде и регистрацией динамики изменения величин светопропускания культуры до и после экспозиции с исследуемым веществом.Таблица 1 Светопропускание культуры,7 Бремя после перемешивания культуры, с до экспозиции с 1,2- -дихлорэтаном в концентрации 7,5 мг/мл. 130 64,5 76,0 76,8 64,5 140 65,0 78,0 150 Сопоставляя значения концентраций, вызывающих снижение двигательной активности на 503, и учитывая, что чем ниже концентрация, приводящая к данному снижению двигательной активности, тем вещество токсичнее, находят, что изученные вещесТва по токсичности на основании рассматриваемо го показателя распределяются следующим образом: наиболее токсичен 1,2- 1 О -дихлорэтан, далее следует ацетонитрил и диметилформамид. Исследование одной концентрации изучаемого вещества проводится за 15 40-60 мин, в то время как аналогичс но исследование методом Вочее, принятым в качестве прототипа, осуществляется за 12 ч. после 30 мин экспозиции с 1,2-дихлорэтаном в концентрации 7,5 мг/мл (опыт)1257518 Продолжение табл.1 Светопропускание культуры,Хл 65,0 160 65,0 81,0 170 65,0 81,0 180 Таблица 2 Степень сниКонцентра" ция, мг/мл Вещество жения двигательной жение двигательной акактивности;Х тивности,мг/мл 82,8 1,2-дихлорэтан 11,2 64,3 6,0 61,5 5,0 25 140,031,1 87,7 Диметил-формамид 70,5 114,2 86,4 63,3 50,0 34,8 28,8 14,4 14,9 Ацетонитрил 70,5 62,6 81,8 72,4 54,8 37,0 39,1 60,7 23,4 23,5 Определено графическим путем методом нробитанализа,ВНИИПИ Заказ 4910/41 Тираж 778 Подписное Произв,-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Бремя послеперемешиваниякультуры, с до экспозиции с .1,2." -дихлорэтаном в концентраЦии 7,5 мг/мп